鼠伤寒沙门菌YaaA蛋白的原核表达与纯化及蛋白晶体的培养

目的 通过建立大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统,得到高纯度及构象均一的YaaA蛋白,筛选蛋白晶体,为其结构解析及相关功能研究奠定基础。方法 利用生物信息学方法对YaaA蛋白的性质及结构进行预测和分析。使用PCR的方法从沙门菌基因组中扩增yaaA基因,将其克隆到原核表达载体pGl01上,获得重组质粒pGl01-YaaA。利用DE3培养后,IPTG合并氯霉素进行YaaA蛋白的可溶性诱导表达,通过镍离子亲和层析柱、阴离子交换柱以及分子筛凝胶层析柱得到高纯度的目标蛋白。纯化的YaaA蛋白采用悬滴气象扩散法获得其蛋白晶体。通过胰蛋白酶酶切试验测定YaaA蛋白核心区及稳定性。结果 YaaA蛋白基因成功克隆到pGl01载体上,并在DE3中可溶性表达。通过层析纯化得到高纯度、形态均一的YaaA蛋白,相对分子质量约为30×10³,浓度为6 mg/mL,纯度约为98%。YaaA蛋白的稳定性较好,晶体培养条件为：0.2 mol/L Ammonium sulfate, 0.1 mol/L BIS-TRIS,pH 6.5,25%(w/v)Polyethylene glycol 33...