凋亡抑制因子Survivin表达在大鼠重症急性胰腺炎肾损伤中的作用

目的 研究大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾组织细胞间凋亡抑制因子Survivin表达与肾损伤的关系.方法 40只SD大鼠,体重(250±20)g,随机分为假手术组和重症急性胰腺炎6h、12 h、24h组,每组10只.实验组采用胰胆管逆行穿刺注射4.5％牛磺胆酸钠( 1.0 ml/kg)建立不同炎症程度的SAP模型,比较假手术组与各实验组胰腺组织和肾组织病理学变化,检查各组血清淀粉酶(AMY)、血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),应用免疫组化方法检测胰腺和肾组织中Survivin的表达,肾脏组织细胞凋亡测定法(TUNEL法)检测肾组织细胞凋亡的变化.结果 各实验组AMY、Cr、BUN较假手术组有所升高,Survivin在假手术组胰腺组织和肾组织表达均呈阴性,Survivin在SAP大鼠胰腺组织中的表达主要集中在胰腺导管处,腺泡细胞也有散在表达,Survivin在SAP大鼠肾组织中表达主要集中在肾小管和肾小球.肾小球细胞凋亡指数明显高于对照组[6、12、24h分别为(3.10±1.00)vs (0.79±0.11),P＜0.05;(4.01±1.90)vs (0.87±0.12),P＜0.05;(5.00±1.80) vs(0.81±0.19),P＜0.01],肾小管细胞凋亡指数明显高于对照组[6、12、24h分别为(9.50±1.01) vs (1.29±0.47),P＜0.01;(11.90±2.30)vs(1.27±0.29),P＜0.01;(14.9±2.57) vs (1.21±0.32),P＜0.01],且随SAP病程延长,肾组织凋亡细胞水平逐渐升高.结论 Survivin在SAP大鼠胰腺组织中及并发肾损伤的肾组织中呈异常高表达,Survivin表达的高低与肾组织损伤的严重程度有关,可能起到减轻肾损伤、促进其修复的作用.     

细胞表面Toll样受体4在小鼠急性坏死性胰腺炎中的作用

目的 探索髓系细胞(中性粒细胞、血小板)及内皮细胞表面Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达在小鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)中性粒细胞招募中的作用.方法 将C3H/He-J和C3H/He-N小鼠通过骨髓移植的方法制作髓系细胞TLR4-/一和内皮细胞TLR4+/+、髓系细胞TLR4+/+和内皮细胞TLR4+/+、髓系细胞TLR4+/+和内皮细胞TLR4-/-、髓系细胞TLR4-/-和内皮细胞TLR4-/-4组嵌入体或纯合体小鼠,另设1个对照组.腹腔注射蛙皮素、尾静脉注射脂多糖复制ANP模型.榆测血清淀粉酶含量,行胰腺病理检查、胰腺组织萘酚AS-D氯乙酸脂酶染色计数、髓过氧化物酶(MPO)活性测定、TLR4蛋白表达检测及RT-PCR检测外周血粒细胞TLR4 mRNA表达.结果 各实验组小鼠血清淀粉酶均较对照组显著升高,但组间无显著性差异.4个实验组胰腺病理分值分别为5.52±1.21、5.18±1.02、2.03±0.82、1.92±0.78;胰腺MPO水平分别为(1.834±0.170)U/g、(2.596±0.138)U/g、(0.367±0.018)U/g、(0.202±0.018)U/g;AS-D计数分别为(66.88±2.17)个、(75.00±2.43)个、(21.50±2.38)个、(20.00±2.19)个;外周血粒细胞TLR4 mRNA表达量分别为0.037±1.047E-2、1.489±8.084 E-2、1.470±5.210E-2、0.017±6.668 E-3;内皮细胞TLR4+/+的2组小鼠胰腺内血管内皮细胞TLR4蛋白强阳性表达,内皮细胞TLR4-/-的2组不表达.内皮细胞TLR4+/+的2组小鼠的胰腺损伤、MPO活性、AS-D计数及TLR4蛋白表达均显著高于内皮细胞TLR4-/-的2组小鼠.结论 内皮细胞而非外周血粒细胞在ANP中性粒细胞聚集及病理损伤中起关键作用.     

不同细胞表面TLR4表达对小鼠重症急性胰腺炎中性粒细胞招募的作用

目的 探索髓系细胞(中性粒细胞、血小板)及内皮细胞表面TLR4表达在重症急性胰腺炎中性粒细胞招募中的作用.方法 采用C3H/He-J和C3H/He-N小鼠通过骨髓移植的方法 制作"髓系细胞TLR4 -/- 和内皮细胞TLR4 +/+ "(A组)及"髓系细胞TLR4 +/+ 和内皮细胞TLR4 -/- "(B组)嵌合体小鼠及"髓系细胞TLR4 +/+ 和内皮细胞TLR4 +/+ "(C组)及"髓系细胞TLR4 -/- 和内皮细胞TLR4 -/- "(D组)纯合体小鼠,腹腔注射蛙皮素、尾静脉注射脂多糖复制SAP模型,检测血浆淀粉酶、PCR测外周血粒细胞TLR4、免疫组化检测胰腺组织内TLR4的表达、胰腺组织萘酚AS-D氯乙酸脂酶染色计数、MPO活性.结果 各实验组小鼠血浆淀粉酶升高;B、C两组外周血粒细胞TLR4mRNA表达高于A、D两组(P<0.05);A、C两组胰腺组织内TLR4阳性,B、D两组阴性;A、C两组AS-D计数高于B、D两组;A、C两组MPO活性亦明显高于B、D两组(P<0.05).结论 内皮细胞而非外周血粒细胞在重症急性胰腺炎中性粒细胞招募聚集中起关键作用.     

Survivin蛋白在大鼠急性出血坏死性胰腺炎中的表达及作用

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin的表达在大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)发病机制中的作用。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、造模后6h、12h、24h组,每组10只。实验组采用胰胆管逆行穿刺注射4.5%牛磺胆酸钠建立不同炎症程度的ANP模型,比较假手术组与各实验组胰腺组织病理学变化,检测各组血清淀粉酶(AMY)、血清脂肪酶(LPL)含量,应用免疫组化及RT-PCR方法检测Survivin蛋白在胰腺组织中的表达,TUNEL法检测凋亡的胰腺组织细胞。结果各实验组AMY明显高于假手术组,其中ANP12h组AMY为(6987±261)U/L,与假手术组差异有统计学意义(P<0.05);ANP各组LPL活性较假手术组明显下降,差别有显著统计学意义(P<0.01),建立模型后随时间延长,胰腺组织病理损害呈进行性发展,胰腺组织出血、坏死。通过免疫组化检测假手术组胰腺组织无Survivin蛋白的表达;大鼠ANP模型建立后,随时间进展,胰腺Survivin蛋白及其mRNA的表达水平呈逐渐增强;胰腺导管细胞凋亡水平逐渐升高,而胰腺腺泡细胞凋亡水平则逐渐下降。结论凋亡抑制蛋白Survivin的表达在ANP发病机制中起着重要作用,其水平的高低可用来预测和评估ANP严重程度的作用。