依赖利福平结核分枝杆菌相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列研究

目的 研究临床依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列。方法以罗氏绝对浓度法药敏实验鉴定临床依R菌株（49株）、耐R菌株（54株）和R敏感菌株（30株），用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）法对不同临床菌株及H37Rv标准株共计134株菌株的菌体蛋白质图谱进行比较分析，通过Q-TOF2型毛细管液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱仪（LC-ESI-MS-MS）对其差异表达蛋白的氨基酸序列进行鉴定，并用对其蛋白的编码基因进行DNA序列分析。结果不同菌株的SDS-PAGE菌体蛋白图谱基本相似。49株依R菌有4l株（84％）在含R管中的菌体蛋白图谱有一条相同的高表达蛋白带（相对于标准物分子质量43000的下端），约占总菌体蛋白的30％～50％，H37Rv标准株、28株R敏感菌（28／30）及44株耐R菌（44／54）的含R管和对照管的蛋白图谱相似，且无相应的高表达现象；该高表达蛋白经氨基酸序列鉴定为结核分枝杆菌H37Rv假设蛋白Rv0341，相对分子质量为43894，等电点（PI）5．25，得分183。不同菌株的Rv0341编码基因1440bp扩增片段，经DNA测序分析均未发现突变。结论利福平对Rv0341在依R菌中的表达有上调作用，Rv0341与依R菌相关，可视为依R菌的相关蛋白或标志物；Rv0341与依R菌的毒力及细胞壁的合成是否相关有进一步的研究价值。     

一线抗痨药物均耐药结核菌体外组合药物作用效果研究

目的对临床主要一线抗痨药异烟肼（isoniazidum，H）、利福平（rifampin，R）、链霉素（streptomycin，S）和乙胺丁醇（ethambatal，E）均耐药结核菌株进行体外组合药物作用效果研究，拟探讨结核病主要一线药物均耐药再联合用药时，化疗是否有效的临床耐多药结核病治疗问题。方法采用BacT／ALERT3D分支杆菌培养系统对10株常规L-J法药敏至少对H、R、S和E（或同时对R）依赖的结核菌株及H37Rv标准敏感菌株，以MIC和平均血药峰浓度分别进行H、R、S及E单一药物和H＋E＋S及H＋S＋E＋R组合药物药敏平行实验；将3D培养42d结果为阴性的实验瓶混悬液再平行转种于L-J管继续培养，以确定药物作用的效果（观察细菌是否真正被药物杀死）。结果单一药物3D法与L-J法的药敏结果基本一致。3D法单一药物均耐药菌株组合药物MIC和平均血药峰浓度实验结果显示不同程度报告阳性时间延长趋势。3D法单一药物耐药，组合药物未报告阳性的实验瓶，转种于L-J管继续培养均报告阳性。病例追踪10株分离株均为一线正规化疗失败的复治肺结核患者。结论小样本菌株实验研究结果提示：体外3D法H、R、S及E单一药物均耐药的临床结核菌株，组合药物（MIC和平均血药峰浓度）对其细菌可有不同程度的相对抑制作用，但没有最终协同杀灭细菌，其实验结果与患者临床疗效相符合。     

一线抗痨药物均耐药结核菌体外组合药物作用效果研究

目的 对临床主要一线抗痨药异烟肼(isoniazidum,H)、利福平(rifampin,R)、链霉素(streptomycin,S)和乙胺丁醇(ethambatal,E)均耐药结核菌株进行体外组合药物作用效果研究,拟探讨结核病主要一线药物均耐药再联合用药时,化疗是否有效的临床耐多药结核病治疗问题.方法 采用BacT/ALERT 3D分支杆菌培养系统对10株常规L-J法药敏至少对H、R、S和E(或同时对R)依赖的结核菌株及H37Rv标准敏感菌株,以MIC和平均血药峰浓度分别进行H、R、S及E单一药物和H+E+S及H+S+E+R组合药物药敏平行实验;将3D培养42d结果为阴性的实验瓶混悬液再平行转种于L-J管继续培养,以确定药物作用的效果(观察细菌是否真正被药物杀死).结果 单一药物3D法与L-J法的药敏结果基本一致.3D法单一药物均耐药菌株组合药物MIC和平均血药峰浓度实验结果显示为同程度报告阳性时间延长趋势.3D法单一药物耐药,组合药物未报告阳性的实验瓶,特种于L-J管继续培养均报告阳性.殶例追踪10株分离株均为一线正规化疗失败的复治肺结核患者.结论 小样本菌株实验研究结果提示:体外3D法H、R、S及E单一药物均耐药的临床结核菌株,组合药物(MIC和平均血药峰浓度)对其细菌可有不同程度的相对抑制作用,但没有最终协同杀灭细菌,其实验结果与患者临床疗效相符合.