基因工程植酸酶表达的优化途径和方法

植酸酶(phytase)即肌醇六磷酸水解酶(Myo—inositol hexaphosphate phosphohydrotase),是催化植酸及植酸盐分解成肌醇和无机磷酸盐的一类磷酸酶。该酶分为三类:肌醇六磷酸-3-磷酸水解酶(3-植酸酶EC3,1,3,8)、肌醇六磷酸-6-磷酸水解酶(6-植酸酶EC3,1,3,26)和非特异的磷酸单酯酶(     

RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和SCF等四种细胞因子膜外区cDNA

在逆转录病毒介导下将TNF基因转染入小鼠LAK细胞中．结果发现．转染TNF基因的LAK细胞比正常LAK细胞和转染对照基因的LAK细胞分泌更高水平的TNF．其体外生长能力和杀伤活性均显著升高．抗TNF单抗可显著抑制其体外杀伤活性．表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的TNF介导的。将较低数量的TNF基因转染的LAK细胞与IL-2联合腹腔内注射后，对腹水型肝癌小鼠有显著的治疗效果．     

重组人白细胞介素17的活性检测及其临床意义

采用免疫印迹电泳检测重组人白细胞介素17（rhIL-17）纯化产物的免疫活性，以rhIL-17能够刺激人胚肺成纤维细胞（MRC-5）分泌IL-6的特性间接反映其生物学活性。结果rhIL-17纯化产物为单体型和同源二聚体型的混合物，能够刺激人MRC-5分泌IL-6，并呈浓度依赖关系。提示rhIL-17纯化产物具有高活性。     

人白细胞介素17cDNA的克隆及表达

目的 获取重组的人白细胞介素17以进行科学研究和应用。方法 应用RT－PCR的方法，从经PHA活化的人外周血单个核细胞中扩增hIL-17cDNA的编码序列，将其克隆至测序载体pBS SKⅡ（ ）中进行测序，再将其亚克隆至表达载体pBV220中，在大肠杆菌XL1－Blue中进行表达。结果 克隆获得了hIL-17cDNA，经热诱导后使hIL-17蛋白在大肠杆菌中的表达量达到了39．7％。结论 通过克隆hIL-17cDNA的编码序列及热诱导使hIL-17蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。     

HSV-TK／GCV系统的临床应用及分析

自杀基因疗法又称药物敏感基因疗法、分子化疗或病毒介导的酶解前药疗法(virus directed enzyme／prodrug therapy，VDEPT)。该疗法通过将基因导人细胞表达某种酶，该酶能将无毒或弱毒的前药转化为对细胞有毒性的药物，从而引起细胞死亡，该基因被称为“自杀基因”。     

急性白血病患者红细胞免疫功能的变化

测定了14例急性白血病患者的红细胞免疫功能。结果表明红细胞表面的 C_3b 受体、血清中红细胞免疫粘附(RCIA)增强因子明显降低,而红细胞表面免疫复合物(IC)及血清中 RCIA 抑制因子与正常对照无明显差别。说明急性白血病患者的红细胞免疫功能明显下降。     

急性粒细胞白血病患者血清白细胞介素2受体的变化

急性粒细胞白血病患者血清白细胞介素２受体的变化王京华，方翠芬，汪闻裕，沈佳禾，刘钟滨，赵育莹血清白细胞介素２受体（亦称可溶性白细胞介素２受体、ＳＩＬ－２Ｒ）。被认为是ＩＬ－２Ｒ由细胞膜脱落所形成的。正常人血清及尿中含少量ＳＩＬ－２Ｒ［１］。急性白血病...     

RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和DSCF等四种细胞因子膜外区cDNA

应用RT—PCR方法，体外扩增获得人IL-6、IL-10、IL-13和SCF膜外区蛋白质编码序列。又运用基因重组手段，将这些基因序列分别插入到表达性载体PBV220中．转化大肠肝菌DH5x，经过筛选和鉴定，获得了上述细胞因子膜外区cDNA克隆。SDS—PAGE和生物学活性测定证实：IL-6、IL-10和IL-13已在大肠肝菌中得到表达，尤其是IL-6获得了高效表达，其表达量约占菌体总蛋白质含量的30%左右。     

耐热植酸酶基因phyA的克隆及新型表达载体的构建

目的 克隆烟曲霉耐热植酸酶基因，构建分泌性的真核表达质粒，以获取耐热的基因工程植酸酶。方法 提取烟曲霉菌的基因组，以此为模板PCR扩增成熟肽编码序列，双酶切后与包含黑曲霉葡萄糖淀粉酶启动子和基因片断的真核表达栽体pYG1．2相连接，转化入大肠杆菌DH5a，从转化菌株中提取质粒进行序列测定和分析。结果 PCR扩增出1326bp的植酸酶编码序列，插入pYG1．2质粒中，构建了重组质粒，重复实验结果表明，该植酸酶基因序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列有2个碱基的差异，编码的蛋白质序列有99．8％的同源性。结论 成功构建了用于黑曲霉菌真核表达耐热植酸酶的重组质粒。     

凝乳酶的研究进展

凝乳酶是一种从未断奶的小牛胃中发现的天门冬氨酸蛋白酶，其主要的生物学功能是有限剪切Phe105-Met 106连接的k-酪蛋白，导致牛奶凝结，因此被广泛用于乳酪制造业，成为重要的酶制剂，其产值占全世界酶制剂的15％。由于乳酪生产的需要，全球每年约屠宰5000万头小牛，造成全球性小