单细胞测序技术在肿瘤浸润B细胞研究中的应用

肿瘤浸润B细胞（tumor-infiltrating B cells,TIL-Bs）已经被证明在调节肿瘤免疫方面起着关键作用,既可以抑制也可以促进抗肿瘤免疫的效应,需要对其进行深入分析以研究具体的效应功能。单细胞测序技术是对单个细胞的基因组、转录组及蛋白组进行高通量测序,利用其高分辨率对单个细胞的详细分子状态进行定义。因此,单细胞测序技术已经成为生命科学研究领域不可或缺的工具,可以全面分析不同类型肿瘤中B细胞的状态。本文从单细胞的角度阐述了TIL-Bs的异质性、优势细胞群体的状态并希望将对表型的表征转化为对预后以及治疗的研究,旨在认识TIL-Bs的生物学作用、肿瘤特异性抗体的功能,为靶向肿瘤的治疗提供一个新的角度。     

抑瘤细胞运动和侵袭的鼠FRNK重组腺病毒的构建

目的应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建小鼠FRNK基因重组腺病毒，并在293HEK细胞中扩增制备重组病毒。方法把小鼠FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack—CMV中，构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV-FRNK，经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后，采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中，通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到293HEK细胞进行包装，获得FRNK重组腺病毒pAdFRNK。荧光显微镜下观察绿荧光的表达。结果经酶切和绿荧光表达证明了小鼠FRNK基因的重组腺病毒载体pAdFRNK构建成功，并制备出高滴度的重组病毒。结论成功构建携带小鼠FRNK基因的重组腺病毒pAdFRNK，为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。     

人FRNK重组腺病毒的构建

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。     

我国医院麻醉科发展存在问题分析

麻醉学的发展不仅推动了手术科室的发展,并为广大病人解除了痛苦,提高了病人的生活质量.麻醉科作为临床科室,其建设与发展好否对医院的建设与发展有着重要的作用,但是现在医院麻醉科发展不能完全适应现阶段要求.作者试图探索医院麻醉科发展存在的问题并提出相应建议,探讨医院麻醉科发展与建设的路子.     

DOCK家族蛋白基因变异与免疫缺陷病

胞质分裂作用因子(DOCK)家族蛋白作为保守的鸟嘌呤核苷酸交换因子, 其基因变异在免疫缺陷病发病机制中起重要作用。本文介绍了免疫缺陷病及其类型, DOCK家族蛋白及其基因变异引起的疾病, DOCK家族蛋白与免疫缺陷病的关系, DOCK2和DOCK8各自的结构及其免疫缺陷病并且关注DOCK家族现有的针对免疫缺陷的最新研究进展, 以期为免疫缺陷疾病的诊断、治疗和预防提供新的思路。     

心内直视手术颈内静脉穿刺致颈部巨大血肿1例

患者女,18岁,因法洛四联症拟行心内直视手术。术前血压140/80mmHg、心率120～130次/min、血氧饱和度63%,桡动脉穿刺置管和麻醉诱导气管插管顺利。择右颈内静脉穿刺,以颈总动脉搏动最明显处旁开1.0cm作为穿刺点,见血     

腺病毒介导人FRNK基因对结肠癌细胞Colo320WT中p190RhoGAP磷酸化和RhoA活性的影响

目的利用腺病毒载体表达人FRNK基因,体外观察其对胃泌素干预下的结肠癌细胞Colo320WT中p190RhoGAP磷酸化和RhoA活性的影响。方法2005年10月至2006年9月,武汉大学人民医院消化内科在中国科学院,武汉病毒所病毒学国家重点实验室,利用AdEasyTM系统在大肠埃希菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺病毒载体pAdhFRNK。脂质体转染pCR3.1-GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418抗生素筛选出稳定表达胆囊收缩素-2受体/胃泌素受体(CCK-2R)的阳性克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定。用10~8mol/L胃泌素干预Colo320WT细胞12 h和pAdhFRNK体外感染Colo320WT细胞2 d后,再用10~8 mol/L的胃泌素干预细胞12 h,然后用免疫沉淀方法检测磷酸化的p190RhoGAP的表达,pull-down测定RhoA的活性。结果在胃泌素干预12 h后的磷酸化的p190RhoGAP的表达量明显增加,RhoA活性降低,而用pAdhFRNK感染后胃泌素干预的细胞中磷酸化p190RhoGAP表达又降低,RhoA活性却增加。结论hFRNK基因可明显阻断外源性胃泌素引起Colo320WT细胞中p190RhoGAP磷酸化的表达和RhoA的活性。