老年人糖尿病终末期肾病血液透析间期并发症的防治

就我院门诊2002年1月至2004年10月糖尿病终末期肾功能衰竭(ESRD)维持性血液透析患者，在血液透析期间主要并发症的防治分析如下。     

基于网络药理学预测补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质与作用机制

目的:预测补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质及作用机制.方法:基于网络药理学理论框架,结合以"OB≥30％,Lipinski五规则"条件下的潜在活性成分筛选、靶点预测、网络构建及KEGG通路富集分析等方法进行补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质与作用机制预测.结果:补阳还五汤满足"OB≥30％,Lipinski五规则"条件的潜在活性成分共有198个活性成分,药物靶标中有30个靶标与动脉粥样硬化相关.此外,对这30个活性靶标进行KEGG通路分析,共获得16条代谢通路,其中有4条通路与动脉粥样硬化相关,分别为HIF-1信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路、花生四烯酸代谢通路.利用Cytoscape 3.7.1软件对补阳还五汤198个药材潜在活性成分与30个抗动脉粥样硬化靶标进行网络拓扑性分析,以度、介数中心度和紧密中心度3项数值均在平均值以上为筛选条件,最终获得66个关键活性成分(黄芩素、阿魏酸、2-甲基苯并唑、壬醛、正丁基苯酞、水杨酸等)及8个关键靶标(PARP1、ESR1、PTGS2、ALOX5、CNR2、NOS2、PPARG、LTA4H).结论:补阳还五汤可通过HIF-1信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路、花生四烯酸代谢等多条途径发挥抗动脉粥样硬化作用,表现出多成分、多靶点、多通路的特点,与动脉粥样硬化治疗机制相一致.     

N-乙酰半胱氨酸对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的保护作用

目的观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)灌肠对小鼠急性溃疡性结肠炎的作用。方法5%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用7 d诱导小鼠急性溃疡性结肠炎,同时予以生理盐水(NS)、5-氨基水杨酸(5-ASA)、NAC保留灌肠,观察小鼠体重、粪便性状、隐血便血,计算疾病活动度(DAI)积分,检测结肠长度、结肠过氧化物酶(MPO)活性、血清过氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量及肠黏膜病理改变。结果NAC组小鼠隐血、便血、体重下降、DAI积分、病理改变等均好于模型组、NS组(P<0.05),与5-ASA组疗效相似。NAC组SOD活力高于模型组,MPO活性、MDA含量则低于模型组(P<0.05)。结论NAC对DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎黏膜损伤有保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

参苓白术散抗炎症性肠病作用与调节肠上皮细胞自噬的关系探讨

目的:探讨参苓白术散通过调节肠上皮细胞自噬对5%葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠炎症性肠病(IBD)的改善作用。方法:84只BALB/c小鼠随机分为7组,每组12只。除正常组之外,5%DSS自由饮用7 d诱导急性炎症性肠病,治疗组分别给予参苓白术散高、中、低剂量(12,6,3 g·kg~(-1)·d~(-1)),美沙拉嗪(2 g·kg~(-1)·d~(-1)),自噬诱导剂雷帕霉素(4 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织的病理形态学变化;透射电镜检测肠上皮细胞自噬体形成情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR),泛素结合蛋白~(-1)(p62),Beclin1磷酸化,ULK1,4EBP蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠结肠黏膜上皮细胞广泛缺失,腺体大多数不完整,呈结肠炎改变,LC3-Ⅱ含量明显降低(P 0. 05),自噬不明显,而自噬水平增加,结肠组织中自噬通路蛋白PI3K,mTOR,p-p62磷酸化程度及ULK1蛋白表达明显升高(P 0. 05),Beclin1磷酸化程度及4EBP蛋白表达明显降低(P 0. 05);与模型组比较,参苓白术散中、高剂量组,美沙拉嗪组及雷帕霉素组结肠组织明显改善,LC3-Ⅱ含量均明显升高(P 0. 05),参苓白术散高、中、低剂量组,美沙拉嗪组及其对应的抑制剂组可明显抑制PI3K,mTOR,p-p62磷酸化,降低ULK1蛋白表达,促进Beclin1磷酸化及升高4EBP蛋白表达(P 0. 05)。结论:参苓白术散抗DSS诱导的IBD的作用与调节肠上皮细胞自噬通路蛋白PI3K,mTOR,p62的磷酸化有关。     

参苓白术散治疗炎症性肠病与肠上皮细胞紧密连接的关系探讨

目的:探讨参苓白术散通过肠上皮细胞紧密连接对抗5%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠肠炎(IBD)的作用机制。方法:48只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、参苓白术散低、中、高剂量组,除正常组之外,5%DSS自由饮用7 d诱导BALB/c小鼠急性炎症性肠病,参苓白术散高、中、低剂量组ig分别给予12,6,3 g·kg-1参苓白术散,正常组和模型组ig等体积生理盐水,柳氮磺胺吡啶组ig给予柳氮磺胺吡啶2 g·kg-1,15 d后观察小鼠体重、粪便性状、隐血便血,计算疾病活动度(DAI)积分、病理检测肠黏膜病变。采用Western blot和RT-PCR检测闭合蛋白(Claudin)水平变化和咬合蛋白(Occluding),Claudin,胞浆附着蛋白(ZO-1)和细胞间连接黏附分子(JAM)mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组Clandin蛋白表达明显降低(P0.05),Occluding,Claudin,ZO-1和JAM mRNA水平降低(P0.05);给药后,与模型组相比,柳氮磺胺吡啶组、参苓白术散低、中、高剂量组Clandin蛋白表达量明显升高(P0.05),各给药组的Occluding,Claudin,ZO-1和JAM mRNA表达明显升高(P0.05)。结论:参苓白术散抗DSS诱导的IBD的作用与调节肠上皮细胞间细胞紧密连接有关。     

因子分析在中医方药量效关系研究中的应用

目的 以经典方葛根芩连汤为例,对中医方药临床剂量与效应的变化规律进行研究。方法 葛根芩连汤给药根据剂量分为9个组(1.65~28.05 g/kg),每组同样的剂量给药6次,提取血清蛋白、血糖、胰岛素、糖化血红蛋白和胰岛素抵抗指数5项指标的因子。结果 提取2个公共因子,方差贡献率分别为55.601%和24.157%。第1因子能代表血糖、糖化血红蛋白和胰岛素抵抗指数,而第2因子则适合代表血清蛋白和胰岛素。结论 在分析葛根芩连汤治疗糖尿病的实验数据中,因子分析法取得了较好的效果,可以消除人为因素的干扰,是研究中药临床量效关系的有效方法。     

补阳还五汤对LPS诱导巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路在补阳还五汤抗脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化与自噬中的作用。方法:细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选诱导RAW264.7巨噬细胞活力值的最适LPS浓度。在最适LPS浓度下,利用PI3K阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5 mmol·L~(-1)),Akt阻断剂MK2206(5μmol·L~(-1)),m TOR阻断剂Rapamycin(10μmol·L~(-1)),Beclin-1阻断剂Spautin-1(5μmol·L~(-1))及不同剂量的补阳还五汤含药血清(5%,10%,20%)处理RAW264.7巨噬细胞24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定磷酸化(p-)PI3K,p-Akt,p-mTOR通路蛋白的表达及微管轻链蛋白3(LC3),泛素结合蛋白1(p62),Beclin-1的水平。自噬双标腺病毒转染检测RAW264.7细胞自噬流的变化。结果:CCK-8结果显示10 mg·L~(-1)LPS作用时,细胞活性显著增强。模型组IL-1β,IL-6,TNF-α浓度显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著升高IL-6浓度,其他给药组均可降低IL-1β,IL-6,TNF-α的水平(P0.05,P0.01)。模型组p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量明显低于空白组(P0.05),LC3,p62蛋白表达量显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著降低p-Akt蛋白表达量,不影响p-mTOR表达,补阳还五汤各剂量组与其他各阻断剂组均可明显升高p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量(P0.05,P0.01),降低LC3,p62蛋白表达量(P0.05,P0.01),各组Beclin-1蛋白表达量均无显著性差异。与空白组比较,模型组中有明显的自噬体斑点形成,自噬流顺畅;与模型组比较,补阳还五汤含药血清组,3-MA,Spautin-1组自噬斑点的形成明显减少或消失,MK2202,Rapamycin组自噬体斑点大小明显减小,但自噬活力仍较强。结论:补阳还五汤抗LPS诱导巨噬细胞活化与自噬与抑制巨噬细胞炎症反应,调控PI3K/Akt/m TOR信号通路,抑制自噬的过度发生有关。     

葛根芩连汤整方剂量变化治疗糖尿病大鼠的量效关系研究

目的: 探讨葛根芩连汤整方剂量变化治疗2型糖尿病的量效关系, 获得基于药效学的经方"剂量阈"。方法: SD大鼠给予高脂饲料喂养4周后按30 mg·kg^-1 尾 iv 新鲜配制的STZ(链脲佐菌素)诱导2型糖尿病大鼠模型,正常对照组注射同体积的柠檬酸盐缓冲液。实验分组:正常组、 糖尿病模型组、葛根芩连汤整方剂量变化的9个剂量组(分别为生药1.65,4.95,8.25,11.55,14.85,18.15,21.45,24.75,28.05 g·kg^-1,)、阳性药物对照组(二甲双胍200 mg·kg^-1),取血检测血糖、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数(IR)、糖化血清蛋白(GSP)、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标。结果: 给药10周后,葛根芩连汤明显降低2型糖尿病大鼠血清中的血糖水平与IR(P<0.05,P<0.01)、降低糖化血清蛋白、糖化血红蛋白水平(P<0.05,P<0.01),指标与葛根芩连汤剂量存在着一定的量效关系,在一定剂量范围内,随着葛根芩连汤整方剂量的增大,药效增强,其"剂量阈"为27.01~1.09 g·kg^-1。结论: 葛根芩连汤整方剂量变化治疗2型糖尿病具有良好的量-效特征。     

抗幽门螺杆菌的胃原籍益生菌株的筛选

目的 筛选体外对幽门螺杆菌有拮抗作用的胃原籍益生菌.方法 从健康志愿者溃疡好发部位取黏膜组织标本按常规厌氧菌分离方法 分离鉴定出多株益生菌,对所分离的菌株通过打孔法检测其体外抑制HP的效果,筛选出有拮抗作用的菌株进行体外与HP共同培养检测其抑菌效果,并进行耐酸、耐胆汁实验.结果 从健康成人胃内分离、鉴定出50株益生菌株,体外抑菌实验发现3株具有拮抗HP的作用、能耐酸、耐胆汁的胃原籍益生菌,编号分别为LF011、JBG012和FB013,经鉴定1株为双歧杆菌,2株为乳酸杆菌.结论 胃内具有独特的菌群体系,分离的3株益生菌能体外拮抗HP并能耐酸、耐胆汁.