应用基质辅助激光解吸质谱的源内衰变及串联质谱技术测定重组人纽兰格林的C端序列

目的测定重组人纽兰格林的C端序列。方法用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）的源内裂解（ISD）及串联质谱技术（TOF—TOF,LIFT）,测定重组蛋白纽兰格林的C端序列。结果用该方法鉴定了重组蛋白纽兰格林C端序列的10个氨基酸残基。结论与现有的C-端序列测定方法比较,该方法简便快捷,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制。     

晚发型阿尔茨海默病蛋白质组学中触珠蛋白的表达

目的建立晚发型阿尔茨海默病(LOAD)蛋白质组学技术体系,寻找并鉴定与LOAD发生有关的生物标记物。方法选择8例经病理证实为LOAD患者的颞叶脑皮质为LOAD组,另选择5例尸体解剖为正常老年人颞叶脑皮质为对照组。分别采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用图像分析软件进行比较分析、确定差异蛋白质点。将选取的差异蛋白质点进行胶内酶切,采用基质辅助激光解析-电离-飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱法进行质谱分析;搜索数据库鉴定蛋白质。结果分别获得两组脑组织双向电泳蛋白质组表达图谱,筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质点11个,其中蛋白质点2触珠蛋白在LOAD组有明显上调。结论筛选并鉴定表达有明显差异的蛋白质点11个,可能成为具有临床诊断意义的LOAD潜在标记物,从而为阿尔茨海默病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据。     

DJ-1蛋白在晚发型阿尔茨海默病蛋白组学的表达

目的 从蛋白质水平初步探讨晚发型阿尔茨海默病发病机制,寻找并鉴定与之有关的生物标志物.方法 选择经病理证实的8例晚发型阿尔茨海默病患者及5例正常老年人颞叶脑皮质为研究对象.分别进行双向凝胶电泳后采用基质辅助激光解析-电离-飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱法进行质谱分析,搜索数据库鉴定蛋白质.结果 分别获得两组脑组织双向凝胶电泳蛋白质组表达图谱,DJ-1蛋白在疾病组明显上调.结论 DJ-1蛋白可能成为具有临床诊断意义的晚发型阿尔茨海默病潜在标志物,从而帮助开发靶向目的 蛋白质的新型抗神经退化药物.     

急性重型脑外伤后脑蛋白表达变化的蛋白质组研究

目的应用蛋白质组学技术，研究重型人脑外伤后的脑皮层蛋白质组表达变化的情况。方法提取脑挫伤部位皮层的总蛋白。通过双向电泳，分离蛋白。应用胶内酶切、生物质谱，鉴定由图像分析软件所得出的具有表达差异的蛋白质点。结果在急性期8h内，目前已发现138个蛋白质点，表达水平具有显著性差异变化。在已鉴定出的83个蛋白点中，属于64种蛋白质。依其功能可分为：细胞骨架、代谢反应、核酸蛋白合成与更新、信号传导、氧化应激反应、功能未知等几类。在急性期，大多数差异蛋白表达水平呈波动变化。结论蛋白质组技术作为一个有力的大规模、高通量的分析蛋白质混合物工具，可快速的建立脑蛋白表达谱。在急性期，脑蛋白质表达呈剧烈变化主要为参与细胞代谢反应、结构修复等组织代偿反应。     

急性Meckel憩室炎穿孔误诊为化脓性阑尾炎1例

<正>1病历介绍患者,男,16岁,因右下腹痛2 d门诊以"阑尾炎"于2008年8月28日收入院。体检:腹部平坦,未见肠型。腹肌略紧张,右下腹压痛、反跳痛,无包块触及,肝脾未触及,移动性浊     

直肠癌手术致输尿管损伤1例

男,68岁。行直肠癌根治术8d出现右侧腰痛。做B超检查,发现右肾积水,右输尿管上段扩张。做膀胱镜检查,右输尿管口不喷尿,行右侧逆行输尿管插管只能进入2．5cm,考虑直肠癌手术误扎右侧输尿管。全麻下行右侧输尿管探查术,结果右侧输尿管下段被误扎,行解除缝扎线的切断吻合内置输尿管、肾盂及膀胱支撑管14d,术后la行静脉肾盂造影,肾功能恢复正常。     

应用FTIR分析技术快速鉴定中药伟哥中的西地那非

目的 对标识由加多种中草药成分组成的中药伟哥成药中，所含的西地那非成分及其来源进行了快速鉴定。方法 应用傅立叶变换红外光谱分析技术(FTIR)，测定了原药和西地那非柠檬酸盐标准品的红外光谱，并进行了红外光谱定性对比分析，对原药中提取物进行了红外光谱分析，对人工模拟配方进行了对比分析。结果 在中药伟哥成药所含的加多种中草药中未发现西地那非成分。结论 中药伟哥成药中所含的西地那非为非中草药成分来源。     

电磁辐射致海马损伤的比较蛋白质组学研究

目的研究三种不同频率电磁波辐照后海马组织蛋白质表达谱的差异。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)—质谱鉴定—生物信息学分析的比较蛋白质组学方法研究辐照后6 h海马组织总蛋白的差异,通过W estern blot和RT-PCR技术分别在蛋白和基因水平对差异蛋白质进一步检测验证。结果三种电磁辐射致海马蛋白质表达谱的变化基本相似。经图像分析共筛选到45个差异蛋白点,其中26个差异蛋白点得到了初步鉴定。对于信号转导相关差异蛋白raf激酶抑制蛋白(RKIP),W estern blot和RT-PCR进一步验证了2-DE结果。辐照后6 h RKIP蛋白及其mRNA表达均明显下调,各照射组未见明显差异。结论三种电磁辐射对海马的致伤机制具有相似性,其损伤程度呈频率依赖性。RKIP可能在辐射致海马损伤中发挥重要作用。     

重组人纽兰格林二硫键分析

目的：应用多种质谱技术确证重组人纽兰格林（rhNRGL）的一级结构及其二硫键定位。方法：（1）利用Q—FT—MS测定rhNRGL二硫键还原前后的精确相对分子质量，确定分子中二硫键数目；（2）应用MALDI—TOF／TOF—MS法测定rhNRGL的N端序列；（3）用ESI-MS／MS法测定rhNRGL的C端序列；（4）通过Trypsin和Glu—C2种蛋白酶进行酶解，获得肽质量指纹谱，确证其序列及定位3对二硫键。结果：（1）测定rhNRGL还原前后的精确相对分子质量，两者相差6．0516，确证其主成分形成了3对二硫键；（2）串联质谱法测定rhNRGL的N端序列的5个氨基酸和C端序列的11个氨基酸，均与理论序列一致；（3）2种酶切肽谱的序列覆盖率分别为82％和64％，分析确证主成分二硫键配对正确，但同时存在少量错配二硫键异构体。结论：以上结果表明，该样品的一级结构正确，主要二硫键模式为：1—3，2—4，5—6。多肽药物的二硫键分析常常需要多种质谱及样品制备技术联合。     

纳升电喷雾串联质谱在修饰多肽及未知多肽结构分析中的应用

目的：以2种多肽为例，说明纳升电喷雾串联质谱存修饰多肽及未知多肽结构一级结构确证和分析中的应用。方法：存纳升电喷雾串联质谱TOF MS模式下对2种多肽的分子量进行了确认，然后在MS／MS模式下获得双电倚肽段的碎片离子峰。结果：曲谱瑞林一级结构全序列是E’HWSYWLRPG’，其中N-端焦谷氨酸和C-端甘氨酰胺。未知多肽通过“序列拼接法”得到该样品的全序列T’VSP^＊VWLPPSVY，其中第4位脯氨酸加合了一个钠离子，且N-端苏氨酸磷酸化。结论：本研究表明纳升电喷雾串联质谱在分析修饰多肽及未知多肽方面具有明显优势。