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目的 了解重组人内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因转染人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb)的可行性,以及转染后一氧化氮(NO)的生成和Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成情况. 方法体外构建人eNOS真核表达载体.取体外培养的人HSFb进行转染实验,根据细胞培养液中所加质粒不同分为pcDNA3.0空载体组、pcDNA3.0-eNOS转染组.另设未转染组,细胞按常规培养.采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞eNOS及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达.硝酸还原酶法测定NO含量. 结果细胞转染后eNOS显著表达,pcDNA3.0-eNOS转染组eNOS mRNA相对表达量为5.92±0.21,明显高于pcDNA3.0空载体组(0.98±0.13,P<0.05);pcDNA3.0-eNOS转染组Ⅰ型胶原mRNA相对表达量为0.76±0.15,Ⅲ型胶原mRNA相对表达量为0.79±0.08,均明显低于pcDNA3.0空载体组(0.98±0.15、1.02±0.12,P<0.05).pcDNA3.0-eNOS转染组NO含量为(36.1±0.8)μmol/L,明显高于pcDNA3.0空载体组(28.4±1.0)μmol/L和未转染组[(27.7±1.3)μmol/L,P<0.01]. 结论 HSFb可作为eNOS基因转染的靶细胞,转染的细胞能表达eNOS并产生NO,并且对细胞的胶原合成功能有抑制作用. 相似文献
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背景:阴道平滑肌细胞原代培养主要有两种方法:酶消化法和组织块贴壁法。前者培养所需时间短,产量高,但所需组织量较大,且试验中污染机会大,最佳消化时间不易把握;后者虽方法简便、有效,但培养所需时间较长。目的:观察组织块 酶消化法原代培养兔阴道平滑肌细胞时间,并与组织块法比较。设计、时间及地点:体外观察实验,于2005-02/2006-02在南昌大学第一附属医院烧伤研究所及动物实验室完成。材料:四五个月龄雌性新西兰大白兔,体质量2.0~2.5kg。方法:①组织块法原代培养阴道平滑肌细胞:将修剪好的1mm×1mm×1mm组织块均匀地接种于培养皿中,然后放入37℃恒温培养箱中静置培养3.0~4.0h,待组织块贴壁牢固后,再补加含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液,使组织块浸于培养液中,37℃恒温静置培养3.0~4.0d,待细胞游出后换液,大约每3天换液一次。②组织块 酶消化法原代培养阴道平滑肌细胞:将组织块用0.1%胶原酶Ⅳ在37℃培养箱中消化0.5~1.0h,至组织块边缘变毛时中止消化,然后将消化好的组织块接种于培养皿上,其余步骤同组织块法。③传代培养:第1次传代时机应根据细胞生长具体情况而定,在细胞达50%~60%融合时即进行传代培养。第2次以后传代,在细胞生长达80%融合时进行传代培养。主要观察指标:①原代培养所需时间。②第3代阴道平滑肌细胞表面结构和超微结构。结果:组织块 酶消化法原代培养细胞萌出时间较组织块法早1.0~2.0d,细胞融合时间较组织块法早3.0~4.0d,细胞可稳定传5~6代。倒置显微镜下观察两种方法所培养细胞呈梭形或多角形,融合时部分区域细胞出现平滑肌细胞特征性生长表现"峰-谷"状结构。透射电镜下观察,第3代阴道平滑肌细胞核呈锯齿状,胞浆内含平滑肌细胞特征性结构肌丝和密体,含有大量高尔基体,粗面内质网扩张,游离核糖体丰富,提示获得合成表型阴道平滑肌细胞比例大。结论:组织块 酶消化法原代培养周期较短,需要注意的是在取材、分离整个操作过程中需保持阴道组织块湿润;胶原酶消化组织块时间不应过长,以组织块周边呈现毛须状为度;此外应在静置状态下培养。 相似文献
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前列腺素(PG)是来源于细胞膜质结构中的磷脂,经磷脂酶A_2分解成花生四烯酸,再经脂肪酸环氧化酶作用而成。目前已发现有20余种PG。全身各组织、器官均有PG 分布,它广泛参与多种生理及病理过程。本文仅就PG 与消化性溃疡的关系及治疗消化性溃疡的近况作一综述。 相似文献
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目的 基于网络药理学探讨芪榆三黄膏治疗肛肠术后创面愈合不良的作用机制。方法 采用中医药系统药理学数据库(TCMSP)对芪榆三黄膏的活性成分进行筛选,并利用Swiss Target Prediction数据库预测其活性成分的潜在靶点;使用 Genecards数据库、Disgenet数据库和OMIM数据库检索肛肠病术后创面愈合不良的相关靶点;通过STRING数据库构建药物与疾病交集靶点的蛋白互作网络(PPI),获得芪榆三黄膏治疗肛肠病术后创面愈合不良的关键靶标;运用DAVID 数据库对关键靶标进行基因本体论(GO)功能与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,并搭建疾病-通路-靶点-成分-药物网络。结果 筛选得到芪榆三黄膏的药效成分91个、药物靶点154个、肛肠术后创面愈合不良靶点679个,最终得到药物-疾病关键靶点26个,富集分析后获得175 个 GO 功能项目和 68 条 KEGG 信号通路。结论 芪榆三黄膏的活性成分可经PI3K-Akt、IL-17、MAPK、AGE-RAGE等通路,作用于TNF、IL-2、AKT1、EGFR、GSK3B等靶点,来发挥抑制炎症反应、促进血管再生、调控细胞增殖和凋亡等作用。 相似文献
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目的复方黄柏液保留灌肠配合耳穴治疗肛隐窝炎的临床疗效观察。方法将就诊于贵阳中医学院第二附属医院普外。肛肠科门诊2017年3月至2018年3月的65例肛隐窝炎患者随机分为两组,治疗组33例采用耳穴贴压配合复方黄柏液保留灌肠治疗;对照组32例单纯采用复方黄柏液保留灌肠治疗,共治疗3个疗程,以10天为1个疗程。结果治疗组愈显率(90.9%)明显高于对照组(71.9%),χ2=3.91,P0.05。两组疗程治愈和显效例数比较差异有高度显著性(Z=3.16,P0.05)。结论耳穴贴压配合复方黄柏液保留灌肠治疗肛隐窝炎能明显缩短疗程,提高疗效。效果显著,且安全可靠,无任何副作用,值得推广使用。 相似文献
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济川煎合五仁丸加减治疗老年性便秘30例报告 总被引:2,自引:0,他引:2
刘德武 《贵阳中医学院学报》2008,30(4)
目的:观察中药治疗老年性便秘的疗效。方法:治疗组30例以济川煎合五仁丸加减;对照组30例以口服福松治疗;20天为一个疗程,2个疗程后判断疗效。结果:治疗组和对照组的有效率分别为93.7%和71.4%,有显著性差异(P相似文献
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目的探讨多次重复空气灌肠治疗小儿肠套叠的价值及安全性,以提高空气灌肠治疗小儿肠套叠的治愈率。方法对本院2010年7月-2014年2月130例行空气灌肠治疗的特发性小儿肠套叠临床资料进行回顾性分析。结果 130例行空气灌肠治疗小儿肠套叠中119例空气灌肠治疗获得成功,成功率为91.5%,21例行重复空气灌肠治疗,11例获得成功,成功率为52.4%。10例重复空气灌肠复位未成功者均出现回肠末端套入部周围空气环绕。1例因首次空气灌肠发生肠穿孔而未行重复灌肠治疗。结论重复空气灌肠治疗小儿肠套叠是一种安全、有效的方法,能提高复位成功率。在患儿临床情况稳定的情况下,应行延迟的重复空气灌肠治疗。回肠末端周围空气环绕可作为小儿肠套叠空气灌肠治疗难以复位成功的一个重要征象。 相似文献