弓形虫感染对THP-1巨噬细胞极化影响的研究

目的 探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法 用佛波酯(PMA)诱导THP-148 h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Western blot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果 成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS 及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-1 36 h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36 h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论 弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。     

基于生物信息学探讨弓形虫ROP16Ⅰ对A549细胞表达谱的影响

目的 采用生物信息学对ROP16_Ⅰ基因转染的A549细胞株的表达谱芯片结果进行数据挖掘,寻找影响Ι型弓形虫疾病的差异表达基因,为揭示Ι型弓形虫疾病的发病机制提供依据。方法 通过生物信息学方法对过表达ROP16_Ⅰ的A549细胞株的表达谱进行研究,从中筛选差异表达基因。将得到的数据导入在线分析工具ToppGene和STRING中对差异表达基因进行筛选,同时进行GO 分析及KEGG分析。结果 本研究共获得了483个差异表达基因,其中上调的基因共有252个,下调的基因共有231个。ToppGene最终筛选得到CCL8、CXCL11、PIAS1及EIF2AK2等14个Ι型弓形虫相关的基因。GO分析和KEGG分析发现,这些候选基因与白介素IL-10、IL-4、IL-13信号通路,细胞因子-细胞因子受体相互作用通路及Toll样受体信号通路等相关。在蛋白-蛋白互作网络中,这14个候选基因恰好处于网络的最核心位置。结论 Ι型弓形虫疾病的发生可能与CCL8、CXCL11、PIAS1及EIF2AK2等基因密切相关。     

弓形虫ROP16_Ⅱ效应分子对宿主A549细胞基因表达谱的影响

目的 ROPl6在弓形虫入侵宿主细胞的过程中发挥着关键作用。为了提高ROP16对宿主细胞的分子功能的认识,本研究分析了ROP16_Ⅱ基因转染的A549细胞株的表达谱,筛选了新的候选基因,为揭示Ⅱ型弓形虫病的发病机制提供了依据。方法通过表达谱芯片技术对过表达ROP16_Ⅱ的A549细胞株的表达谱进行研究,并从中筛选差异表达基因。利用ToppGene从差异表达基因中筛选候选基因,并通过RT-qPCR对获得的基因进行验证。结果共获得了9 994个差异表达基因,其中上调的基因有4 293个,下调的基因有5 701个。将这些差异表达基因进行GO功能富集分类,主要涉及多种生物学过程,包括发育过程、生物调控、免疫应答和信号传导等过程。采用ToppGene筛选得到4个疾病候选基因,其中上调表达的有IL4R和STAT1;下调表达的有IL12RB1和IL2RG。RT-qPCR结果与表达谱芯片数据一致。结论 ROP16_Ⅱ入侵宿主细胞后影响宿主细胞基因表达谱,了解ROP16_Ⅱ的作用机制,对于更加全面地揭示Ⅱ型弓形虫病的发病机制具有重要意义。     

弓形虫ROP16Ⅱ效应分子对宿主A549细胞基因表达谱的影响

目的 ROPl6在弓形虫入侵宿主细胞的过程中发挥着关键作用。为了提高ROP16对宿主细胞的分子功能的认识,本研究分析了ROP16_Ⅱ基因转染的A549细胞株的表达谱,筛选了新的候选基因,为揭示Ⅱ型弓形虫病的发病机制提供了依据。方法 通过表达谱芯片技术对过表达ROP16_Ⅱ的A549细胞株的表达谱进行研究,并从中筛选差异表达基因。利用ToppGene从差异表达基因中筛选候选基因,并通过RT-qPCR对获得的基因进行验证。结果 共获得了9 994个差异表达基因,其中上调的基因有4 293个,下调的基因有5 701个。将这些差异表达基因进行 GO 功能富集分类,主要涉及多种生物学过程,包括发育过程、生物调控、免疫应答和信号传导等过程。采用ToppGene筛选得到4个疾病候选基因,其中上调表达的有IL4R和STAT1;下调表达的有IL12RB1和IL2RG。RT-qPCR结果与表达谱芯片数据一致。结论 ROP16_Ⅱ入侵宿主细胞后影响宿主细胞基因表达谱,了解ROP16_Ⅱ的作用机制,对于更加全面地揭示Ⅱ型弓形虫病的发病机制具有重要意义。     

弓形虫多态性ROP16效应分子诱导宿主A549细胞基因表达谱的差异研究

目的 探讨弓形虫Ι、Ⅱ和Ⅲ型ROP16对宿主基因表达谱的影响及其意义。方法 以A549细胞株为研究模型,建立弓形虫Ι、Ⅱ和Ⅲ型ROP16稳定转染的A549细胞株,通过表达谱芯片技术筛选差异表达基因,并对差异基因进行GO分析和Pathway通路分析。结果 对差异基因进行聚类,发现ROP16_I转染组776个基因表达上调,494个基因表达下调;ROP16_III转染组842个基因表达上调,520个基因表达下调;而ROP16_II转染组5 063个基因表达上调,5 989个基因表达下调。另外,ROP16_I/III转染组基因表达谱相似。而ROP16_II转染组则不同,表达谱差异显著。对ROP16_II转染组差异基因进行Pathway通路分析发现,显著改变的通路共有74条,其中ROP16_II单独调控的信号通路有19条,主要与NF-κB、Toll样受体,趋化因子等信号通路、炎症反应及免疫调节和代谢等相关。结论 ROP16入侵宿主细胞核后影响宿主细胞基因表达谱。同Ι、Ⅲ型弓形虫相比,Ⅱ型弓形虫在基因组上的差异导致其具有独特的差异基因表达谱和信号通路,了解其单独调控的信号通路对于Ⅱ型弓形虫的防治具有重要意义。