SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并...     

SARS-CoV-2重组痘苗病毒载体疫苗的构建、筛选、安全性和免疫原性研究

目的 利用穿梭质粒通过同源重组构建表达SARS-CoV-2 RBDEPI蛋白重组痘苗病毒,并对其进行筛选、鉴定和免疫原性检测。方法 参照SARS-CoV-2全基因组序列设计合成目的基因RBDEPI,通过PCR、测序、酶切连接将目的基因插入到痘苗病毒穿梭载体pSTKE中,构建pSTKE-RBDEP。将pSTKE-RBDEPI与天坛株痘苗病毒VTT共转染鼠肾细胞BHK-21中,通过同源重组,并以增强型绿色荧光蛋白EGFP为筛选标记,通过多次绿色荧光噬斑筛选获得重组病毒rVTT△TK-RBDEPI。利用RT-PCR和Western blot检测rVTT△TK-RBDEPI目的基因的转录和目的蛋白的表达情况;通过ELISA和ELISPOT检测rVTT△TK-RBDEPI免疫小鼠SARS-CoV-2与痘苗病毒载体特异性抗体水平和特异性淋巴细胞IL-4与IFN-γ的表达情况,确定rVTT△TK-RBDEPI的免疫原性。结果 经过10次绿色荧光噬斑筛选、RT-PCR与Western blot鉴定获得1株能够表达SARS-CoV-2 RBDEPI的重组痘苗病毒rVTT△TK-RBDEPI,且rVTT△...     

IgG4相关性眼病研究进展

IgG4相关性眼病是一种与IgG4密切相关的慢性系统性疾病,是以血清IgG4水平升高及IgG4阳性浆细胞浸润泪腺、眼外肌、眶下神经等眼部附属器为特征,而且经常是全身系统性病变的首发症状.糖皮质激素对该病治疗有效.本文就近年来IgG4相关性眼病的病因发病机制,临床表现,诊断及治疗方面的最新进展进行综述.     

丹参静脉注射后在兔血浆和眼玻璃体中的药代动力学研究

目的建立测定兔血浆和玻璃体中丹参素含量的高效液相色谱方法,研究丹参通过血眼屏障进入玻璃体的能力及药代动力学特点。方法白兔72只,随机分为对照组6只;血浆组6只;玻璃体组60只。对照组0.85%生理盐水20 mL,静脉注射。其余两组丹参1.0 g/kg静脉注射。取血浆和玻璃体检测丹参素的含量。色谱柱Hypersil BDS,C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);预柱:自填国产YWGC18;流动相为乙腈:0.01 mol/L磷酸二氢钾(8:92);紫外检测波长279 nm;流速1.0 mL/min;柱温为室温。结果丹参素血浆质量浓度符合三室模型。t1/2β(消除半衰期):5.661 min;Cmax(锋浓度):727.29mg/L;Tmax(达峰时间):0 min。玻璃体质量浓度符合二室模型。t1/2β:499.521 min;Cmax:0.998 mg/L;Tmax:25 min。对照组血浆、玻璃体中未检测到丹参素。结论本方法灵敏、特异、准确。丹参静脉注射后可以通过血眼屏障,丹参素在玻璃体内的含量较少。在玻璃体中丹参吸收比较慢,消除也较慢。