应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

Objective To screen differential proteins in serum from hepatocellular carcinoma (HCC) patients by Proteomic Technology and to purify and identify them. Methods Surface enhanced laser desorp-tion Ionization time of flight-mass spectrum (SELDI-TOF-MS) was employed to screen differential proteins in serum from 33 HCC patients and 33 control cases, and then to purify and identify them using isoelectric precipitation, Tricine sodium dodecyl sulphate ployacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and high performance liquid chromatography tandem Mass Spectrum (HPLC-MS). Result 65 protein peaks in the range of relative molecular weight from 2000 to 10 000 were found significant difference (P < 0.05) between the patient group and control group. Based on these differential protein peaks, diagnostic model for HCC detection was established and its sensitivity and specificity were 100% and 96.97 % respectively. Proteins with 8706.5 and 8579.2 relative molecular weights (the t value was 2.562 and 2.783 respectively, and P value was 0.013 and 0.015 respectively) out of the 65 differential proteins were purified and identified, and then recognized as Apolipoprotein A Ⅱ (Apo AⅡ). Conclusion Apo A II is probably a differential protein of HCC and maybe related to the pathogenesis of HCC.     

广西医学生临终关怀态度现状及其影响因素分析

目的了解广西医学生临终关怀态度现状及其影响因素,为开展临终关怀教育提供参考依据。方法采用分层整群随机抽样方法对广西1062名医学生进行问卷调查,根据问卷结果进行临终关怀态度及其影响因素分析。结果调查对象中临终关怀态度得分护理专业得分为(133.79±11.06)分,高于临床;年级中大一得分最高,为(132.53±10.31)分;不同家中讨论死亡情形中,"气氛很坦然公开"得分为(132.53±10.79)分,高于"从未讨论过死亡";自己未患过重病者得分为(130.89±10.22)分,高于患过重病者,以上差异均有统计学意义(P0.05);相关分析发现,死亡态度各维度[死亡恐惧(r=-0.331)、死亡逃避(r=-0.258)、自然接受(r=0.319)、趋近接受(r=-0.198)、逃离接受(r=-0.216)]、生命意义(r=0.450)、青少年生活事件(r=-0.174)与临终关怀态度均有显著相关(P0.05);层次回归分析发现,在控制了人口社会学变量后,心理因素对临终关怀态度作出了新的贡献,解释的变异量增加了26.30%。结论不同特征医学生临终关怀态度差异显著,提示我国在临终关怀亡教育上的不足,未能通过教育使不同背景的医学生树立科学、理性并具有人文关怀色彩的态度。     

肺结核病人血清差异蛋白的分离及鉴定

目的分离并鉴定SELDI筛选出的肺结核病人血清差异表达蛋白。方法乙腈沉淀法去除血清中的高丰度蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分离差异表达的目标蛋白,高效液相色谱串联质谱鉴定目标蛋白并进行生物信息学分析。结果电泳显示肺结核患者血清中小于6000Da的蛋白条带浓度明显低于正常人血清,经质谱鉴定和生物信息学分析,该目标蛋白为载脂蛋白(apo)C-I酶解片段,与SELDI建立的诊断模型中分子量为M4480.14的潜在标志物吻合。结论与血脂代谢密切相关的apo C-I可能是结核病血清潜在标志物之一。     

应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

目的 应用蛋白质组学技术筛选并鉴定肝癌患者血清中的差异蛋白质.方法 采用表面增强激光解析及电离飞行时间质谱技术,对33例肝癌患者和33例正常对照的血清蛋白质进行了检测分析,筛选肝癌的差异蛋白;用等电点沉淀法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及高效液相色谱串联质谱等一系列方法分离鉴定差异蛋白质.肝癌组与正常组蛋白质峰差异比较采用两样本t检验. 结果 肝癌组与正常人组血清蛋白质图谱在相对分子质量为2 000～10 000范围内,有65个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),由此组建的诊断模型灵敏度为100%,特异度为96.97%其中包括8706.5 M/Z和8579.2M/Z(t值分别为2.562和2.783,P值均<0.05),经分离鉴定其为阿朴脂蛋白AⅡ. 结论 阿朴脂蛋白AⅡ是肝癌的差异蛋白之一,可能与肝癌的发生有关.     

人血清中小分子蛋白质分离电泳方法改进

目的建立一种灵敏易行分离分子量〈10000 Da低丰度蛋白质的电泳方法。方法用Hitrap Blue层析柱去除血清中白蛋白,用U9对血清样品进行变性处理,采用改进后的方法（0.1%甲醇,0.5%三氯乙酸,0.1%考马斯亮蓝G250）进行染色。结果经去除血清中的白蛋白、对样品进行变性处理及改进染色方法后,分辨率和灵敏度明显提高,可有效分离10000 Da以下的小分子蛋白质。结论改进后的电泳方法,不仅简便灵敏,而且还有利于蛋白质的洗脱回收。     

SELDI检测结核血清蛋白指纹图谱及与同类研究比较

目的利用SELDI技术筛选肺结核患者血清差异表达蛋白并与同类研究的结果进行比较。方法采用SELDI-TOF-MS筛选30例肺结核患者和30例正常对照血清的差异表达蛋白,建立诊断模型;对105例样本进行盲法验证;与同类研究比较寻找共同差异表达蛋白。结果 SELDI筛选出86个差异有统计学意义的蛋白(P﹤0.05)。从中筛选出了6个最具有诊断价值的潜在标志蛋白建立诊断模型,该诊断模型的ROC曲线下面积为0.983;盲法验证ROC曲线下面积为0.837。与同类研究比较发现,11个差异有统计学意义(P﹤0.001)的差异表达蛋白在本研究中重现。结论肺结核病人与对照的血清蛋白图谱存在差异,两个独立实验共同得到的11个差异表达蛋白与结核病的关系值得深入研究。     

应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

Objective To screen differential proteins in serum from hepatocellular carcinoma (HCC) patients by Proteomic Technology and to purify and identify them. Methods Surface enhanced laser desorp-tion Ionization time of flight-mass spectrum (SELDI-TOF-MS) was employed to screen differential proteins in serum from 33 HCC patients and 33 control cases, and then to purify and identify them using isoelectric precipitation, Tricine sodium dodecyl sulphate ployacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and high performance liquid chromatography tandem Mass Spectrum (HPLC-MS). Result 65 protein peaks in the range of relative molecular weight from 2000 to 10 000 were found significant difference (P < 0.05) between the patient group and control group. Based on these differential protein peaks, diagnostic model for HCC detection was established and its sensitivity and specificity were 100% and 96.97 % respectively. Proteins with 8706.5 and 8579.2 relative molecular weights (the t value was 2.562 and 2.783 respectively, and P value was 0.013 and 0.015 respectively) out of the 65 differential proteins were purified and identified, and then recognized as Apolipoprotein A Ⅱ (Apo AⅡ). Conclusion Apo A II is probably a differential protein of HCC and maybe related to the pathogenesis of HCC.     

两种分离人血清蛋白质电泳技术的比较研究

目的比较双向电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离人血清中蛋白质的效果。方法双向电泳直接分离人血清中的蛋白质；采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离去除白蛋白的人血清样品。结果双向电泳图谱显示，样品在分子量为10k-20kDa可以分离出较清晰的蛋白质点，但在8000Da以下没有分离出清晰的蛋白质点，且在20kDa以上的蛋白质点，凝胶背景模糊不清。而采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，可有效分离10kDa以下的小分子蛋白质。结论两种电泳技术各有所长，需根据目的蛋白的特点选择适合的方法。     

人血清中小分子蛋白质的电洗脱回收

[目的]建立一种快速简便的回收分子量﹤10000 Da低丰度蛋白质的电洗脱方法。[方法]采用改进后的聚丙烯酰胺凝胶电泳和电洗脱方法分离纯化小分子标志蛋白,利用SELDI技术检测回收后的标志蛋白。[结果]SELDI技术检测发现,改进后的电泳和电洗脱方法能有效分离并回收10000 Da以下的低丰度蛋白质。[结论]改进后的电洗脱方法,不仅快速简便,而且还有利于蛋白质的后续鉴定。     

SELDI-TOF-MS技术及其在传染病研究中的应用

生命科学研究进入后基因时代,蛋白质组学成为该领域的研究前沿和热点,SELDI技术的出现,为蛋白组研究提供了一个高效,快速,高通量的理想研究平台,促进该领域向纵深方向发展.本文阐述其在传染病研究方面应用进展.