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目的 探讨甲基转移酶(METTL)3调节皮肤成纤维细胞衰老的机制。方法 酶消化法提取小鼠原代皮肤成纤维细胞,对照(Control)组、D-半乳糖(D-gal)组、转染阴性对照siRNA(NC)组、转染METTL3 siRNA(si-METTL3)组、转染核苷二磷酸连接部分X型基元(NUDT)18 siRNA(si-NUDT18)组,D-gal(20 g/L)建立皮肤成纤维细胞衰老模型。采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测细胞衰老,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测METTL3 mRNA表达。SA-β-gal染色法、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法检测si-METTL3组细胞衰老与增殖。蛋白质质谱分析D-gal组与si-METTL3组中的差异蛋白,qRT-PCR验证差异基因成熟与前体的表达水平。SA-β-gal染色法、EdU染色法、JC-1线粒体膜电位检测法和共聚焦显微镜检测线粒体自噬法分别检测si-NUDT18组细胞衰老、增殖、线粒体膜电位和线粒体自噬的表达变化。结果 METTL3 mRNA在衰老皮肤成纤维细胞中表达明显降低,低表达METTL3... 相似文献
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