细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。     

应用SSH技术研究H_2O_2胁迫下细粒棘球蚴基因的表达

目的构建H2O2胁迫下细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)与正常组织差异表达的消减cDNA文库。方法以H2O2胁迫细粒棘球蚴cDNA为试验方(tester),正常生长的细粒棘球蚴cDNA为驱动方(driver),应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)研究H2O2胁迫下细粒棘球蚴基因的表达。结果文库扩增后得到124个阳性克隆,菌落PCR分析,均得到200~1000bp插入片段。将整个文库克隆进行测序,测得序列结果利用BLAST在线软件与GenBank数据库进行同源序列比对分析和BlastX分析。结果获得重要基因的cDNA序列,如氧化还原酶、蛋白激酶、生长因子等。另有部分克隆在GenBank中无法查到对应的同源基因,可能代表了新基因。结论成功构建了H2O2胁迫与正常组织差异表达的消减cDNA文库,为研究细粒棘球蚴在抗氧化过程中的相关靶基因筛选奠定基础。     

细粒棘球绦虫抗氧化蛋白TPx的免疫定位

目的：研究抗重组细粒棘球绦虫抗氧化蛋白TPx（rEgTPx）多克隆抗体对天然EgTPx的结合活性，探讨EgTPx在原头蚴内的分布。方法：采集自然感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏，在无菌条件下收集包囊内的原头蚴，经消化处理后制备石蜡切片。利用rEgTPx多克隆抗体，以间接免疫荧光法确定抗氧化蛋白EgTPx在原头蚴内的分布。结果：rEgTPx多克隆抗体能够特异性地结合天然EgTPx抗原表位，EgTPx广泛分布在原头蚴的体表皮层、皮下层和钙颗粒细胞内。结论：确定了EgTPx蛋白在细粒棘球绦虫原头蚴内的分布，为研究EgTPx在原头蚴发育的生物功能奠定基础。     

定量PCR研究细粒棘球蚴抗氧化相关基因的差异表达

目的在已构建的氧化胁迫下细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)与正常组织差异表达的消减cDNA文库中,筛选细粒棘球蚴在抗氧化过程中差异表达的重要基因。方法将前期研究中应用抑制性消减杂交技术(suppression subtrac-tive hybridization,SSH)构建氧化胁迫下细粒棘球蚴差异表达基因的消减cDNA文库进行蓝白斑筛选和菌落PCR分析后测序分析。测序结果利用BLAST在线软件与GenBank数据库进行同源序列比对分析和BlastX分析。从文库中随机挑选4个未知新序列和抗氧化密切相关的TPx基因片段,利用定量PCR法研究氧化胁迫下,差异表达基因片段在mRNA水平上的变化情况。结果整个文库克隆测序结果获得重要基因的cDNA序列,如氧化还原酶、蛋白激酶、生长因子等。另有部分克隆在GenBank中无法查到对应的同源基因,可能代表了新基因。定量PCR结果显示:S88、H32-1两个基因在0.8mmol/LH2O2氧化胁迫的原头蚴中表达量分别上调为未经氧化胁迫原头蚴中的2.0和2.3倍,TPx基因片段当H2O2浓度大于0.8mmol/L时,其表达量增高。结论上述基因的上调表达很可能与细粒棘球蚴在抗氧化过程中的相关功能有密切的联系,可以作为研究细粒棘球蚴抗氧化的候选基因。     

新疆某高校宿舍群发性臭虫叮咬报告1例

目的对新疆某高校频繁上报的宿舍群发性臭虫叮咬疫情进行调查。方法采用目测法捕捉观察臭虫,访视某高校宿舍环境及被叮咬学生皮肤病灶。虫体标本至生物显微镜下进行虫种鉴别并摄图。结果经目测法观察到某高校宿舍环境内孳生的臭虫为典型温带臭虫;叮咬的学生为新疆各民族人口,病灶显示为直径1~3 cm红色斑疹,医院诊断为虫咬性皮炎。结论新疆某高校内臭虫的流行除与宿舍的房间设施,新疆冬季集中供暖的环境因素相关外,还可能与新疆特殊的生活生产方式有关。     

齿龈内阿米巴接种对大鼠牙周炎发生发展的影响观察

目的 观察齿龈内阿米巴(E.g)接种对大鼠牙周炎发生发展的影响.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组(C组)、齿龈内阿米巴干预组(E.g组)、实验性牙周炎组(EP组)、混合干预组(mix组),每组6只.C组给予醋酸泼尼松龙肌注,同时生理盐水涂抹于大鼠左上第一磨牙龈缘.E.g组给予醋酸泼尼松龙肌注,同时E.g悬液涂抹...     

铜死亡相关基因COX17 在乳腺癌组织和细胞中的表达及其与临床特征和患者预后的关系

目的：探究铜死亡相关基因COX17在乳腺癌组织和细胞中的表达及其与肿瘤免疫细胞浸润、临床特征和患者预后的关系。方法：通过多种数据库数据分析COX17 在人体正常组织和泛癌组织与细胞中的表达及其与患者预后的关系、COX17 基因突变情况、COX17表达水平与肿瘤免疫微环境的相关性、COX17在浸润性乳腺癌中表达水平及其与患者临床病理特征的相关性、在乳腺癌细胞中COX17基因遗传突变及甲基化情况、COX17差异共表达基因的功能富集分析，构建COX17蛋白质相互作用网络及功能分析。采用免疫组化法检测COX17蛋白在国人乳腺癌组织中的表达以验证数据库分析结果。结果：COX17 mRNA广泛分布于全身组织中且在多数癌组织中呈高表达，COX17蛋白在乳腺癌等癌组织中呈高表达，COX17 mRNA表达水平明显影响乳腺癌等癌症患者的预后，COX17 基因在多种癌组织中突变频率高且其主要突变类型为错义突变、扩增和深度缺失，COX17mRNA表达水平与多种肿瘤的肿瘤纯度和多种免疫细胞浸润存在相关性，COX17蛋白水平与乳腺癌临床分期、病理分型、淋巴结转移、患者性别和年龄有关联。免疫组化法检测结果证实在国人乳腺癌组织中COX17蛋白也呈高表达，COX17基因在乳腺癌中遗传突变和修饰特征分别是截断突变和启动子区高度甲基化。COX17蛋白与ATOX1等多种蛋白表达相关且构成复杂的相互作用网络，COX17在乳腺癌中差异表达基因主要涉及氧化还原酶活性、蛋白翻译、氧化磷酸化及TNF信号通路等生物过程。结论：COX17在乳腺癌组织和细胞中呈高表达，且与癌组织的免疫细胞浸润和患者预后相关，COX17是临床治疗乳腺癌的潜在靶点。     

围手术期观察及护理

护理工作千头万绪错综复杂,但最重要最细致的工作莫过于观察病情。通过观察可以掌握病情变化,而手术室护士巡回观察有其特殊性,除了要观察术中病人病情外还要观察手术过程,巡回护士要仔细观察密切配合处理各种情况,因为这直接关系到病人的安危,手术的成功,观察是否及时、细致处理是否得当,可反映护士的责任心和实际工作能力,现就我们在巡回观察中的体会报告如下。