MEK1/2抑制剂曲美替尼对体外多房棘球蚴原头节的作用研究北大核心CSCD

目的研究MEK1/2抑制剂曲美替尼对体外多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)活性的影响,探讨MEK1/2作为治疗泡型棘球蚴病靶点的可能性。方法建立Em空白对照组、DMSO及1μmol/L、50μmol/L、100μmol/L曲美替尼组,利用活力染色与扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分别观察虫体活性及体表结构变化;以Swiss Model同源建模合理构建Em MEK1/2分子的三级结构进行分析。结果1μmol/L曲美替尼干预3 d、6 d、9 d的原头节活性分别为(84.72±0.27)%、(87.32±2.01)%、(85.12±3.64)%,低于相同时间DMSO组,且差异有统计学意义(t>2.78,P<0.05);当1μmol/L曲美替尼干预时间延长至12 d,原头节活性降至(37.82±2.12)%,与DMSO组比较差异具有统计学意义(t=32.90,P<0.01)。SEM和活力染色显示曲美替尼组虫体活性与干预浓度成正比,同源建模结果显示Em与人MEK1/2分子具有较高的同源性。结论综合分析活力染色、SEM与同源建模结果,证实体外1μmol/L的MEK1/2抑制剂曲美替尼对虫体活性具有较好的抑制作用,为临床治疗提供了理论依据。     

泡球蚴感染对小鼠脾脏CD8+ T细胞免疫功能耗竭的影响

目的　观察不同时间、不同剂量泡球蚴感染对小鼠脾脏CD8+ T细胞免疫功能耗竭的影响。方法　采集泡球蚴原头蚴虫体,经肝门静脉建立低（50个原头蚴）、中（500个原头蚴）和高剂量（2 000个原头蚴）泡球蚴感染小鼠模型,并设生理盐水对照组。于感染后早（2周）、中（12周）、晚期（24周）分别取小鼠脾脏,研磨分离淋巴细胞。流式细胞术检测不同实验组小鼠脾脏中记忆性CD8+ T细胞表型、免疫抑制性分子2B4表达水平,及其分泌γ?干扰素（IFN?γ）、肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、白细胞介素?17A（IL?17A）和IL?10的能力。结果　在感染早期,高剂量泡球蚴感染诱导小鼠脾脏CD8+ T细胞以中心记忆性表型为主,其比例为（35.50 ± 2.00）%,显著高于对照组（25.90% ± 2.46%）（P < 0.01）;在感染晚期,中、高剂量泡球蚴感染均诱导小鼠脾脏CD8+ T细胞以效应记忆性表型为主,其比例分别为（25.70 ± 4.12）%和（28.40 ± 4.12）%,均显著高于对照组（10.50% ± 6.45%）（P均 < 0.05）。高剂量泡球蚴感染中期和晚期,中心记忆性CD8+ T细胞比例显著低于感染早期（P均 < 0.01）;高剂量泡球蚴感染晚期,效应记忆性CD8+ T细胞比例显著高于感染早期和中期（P均< 0.05）。低、中剂量泡球蚴感染早期,脾脏CD8+ T细胞分泌IFN?γ和IL?17A能力显著增强,而高剂量泡球蚴感染虽然促进小鼠脾脏CD8+ T细胞分泌IFN?γ和TNF?α能力,但感染晚期其分泌IFN?γ和TNF?α能力显著低于早期和中期（P均< 0.05）。此外,中、高剂量泡球蚴感染晚期小鼠脾脏CD8+ T细胞表面免疫抑制性分子2B4呈高表达,其比例分别为（4.73 ± 1.56）%和（4.94 ± 1.90）%,均显著高于低剂量组（2.49% ± 0.58%）和对照组（2.92% ± 0.60%）（P 均< 0.05）。结论　在低、中剂量泡球蚴感染中期和晚期,机体利用自身免疫应答能力对虫体起到杀伤和清除;而高剂量泡球蚴感染晚期可诱导小鼠脾脏CD8+ T细胞上调2B4分子表达,导致免疫耗竭,造成慢性寄生。     

骨形态发生蛋白Ⅰ型受体抑制剂LDN-212854对多房棘球蚴原头节的体外作用研究北大核心CSCD

目的探讨骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(bone morphogenetic protein typeⅠreceptor,BMPRⅠ)新型抑制剂LDN-212854对多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)原头节的体外作用。方法建立体外培养多房棘球蚴体系,随机设置空白对照组(RPMI 1640)、DMSO溶剂对照组(RPMI 1640+DMSO)及药物干预组(RPMI+DMSO+LDN-212854),其中药物干预组又设1、50及100μmol/L LDN-212854三个浓度梯度,分别与原头节共培养3、6、9、12 d。伊红染色与扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察各干预组虫体存活率,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察虫体病理形态变化。结果各时间段空白对照组与DMSO对照组原头节存活率比较差异无统计学意义(P>0.05);50μmol/L与100μmol/L LDN-212854组干预6 d原头节无存活,与DMSO组比较差异有统计学意义(P<0.01);1μmol/L LDN-212854组干预3 d和6 d原头节存活率分别为(84.85±2.77)%、(82.92±0.59)%,显著低于以往实验中1μmol/L LDN-193189组的(99.75±0.35)%和(99.11±0.22)%(P<0.01);1、50、100μmol/L LDN-212854组干预12 d原头节存活率分别为(38.05±1.29)%、0和0,与DMSO组存活率(98.31±0.14)%比较差异有统计学意义(P<0.01)。随LDN-212854浓度的增加,药物干预组原头节较空白对照及DMSO组HE染色变深、体积变小;SEM显示虫体体表结构改变,主要表现为顶突变形、头部固缩、内部结构暴露以及微绒毛成簇聚集。结论BMPR I新型抑制剂LDN-212854体外抗多房棘球蚴效应较LDN-193189强,低浓度下即有杀伤作用,为新型药物研发奠定了理论基础。