马齿苋体外抗感染性腹泻菌群的作用研究

本文通过马齿苋对常见感染性腹泻菌的体外抗菌作用研究,为马齿苋在农村感染性腹泻患儿中的应用推广奠定理论基础。     

ScFv噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用

随着蛋白组学时代的到来,对目的抗体的需求量的增加,噬菌体抗体库技术获得抗体的优越性得到充分发挥。该文主要介绍噬菌体抗体库技术的重要一种ScFv(单链抗体)噬菌体抗体库技术。从理想ScFv噬菌体抗体库的构建、可溶性表达、液体和固体筛选的优缺点及其在寄生虫学的应用等几个方面对此技术的研究进展作一综述。     

弓形虫蛋白激酶C受体1蛋白的表达与抗原性分析

目的构建弓形虫蛋白激酶C受体1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,表达、纯化RACK1蛋白。方法PCR扩增RACK1基因的cDNA序列,用SacI、NcoI限制性内切酶对RACK1基因的PCR产物及pET-30a（＋）质粒进行双酶切,连接,转化大肠杆菌BL21,构建重组质粒。IPTG诱导表达,亲和层析柱纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析鉴定。结果PCR扩增出 966 bp的RACK1完整基因序列,成功构建RACK1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,表达出约36kDa的RACK1蛋白,蛋白具有抗原性。结论成功构建弓形虫RACK1基因的pET-30a（＋）-RACK1重组质粒,纯化出RACK1蛋白,为进一步进行RACK1蛋白在弓形虫入侵分子机制中的作用研究奠定基础。     

金钗石斛多糖提取工艺的优化及对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:优化金钗多糖的提取工艺,并研究其对小鼠脾细胞增殖的影响。方法:采用单因素试验和L9(34)正交试验法考察了提取时间、提取温度和料液比对金钗石斛多糖得率的影响,并用MTS/PMS法测定其对小鼠脾细胞增殖的影响。结果:金钗石斛多糖的最佳提取工艺条件为液料比45∶1,提取温度90℃,提取时间2.5 h;金钗石斛精制多糖、金钗石斛粗制多糖能直接促进脾细胞的增殖,且两者能显著增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖,在此最佳工艺条件下金钗石斛粗多糖得率为2.80%。结论:金钗石斛多糖能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A,LPS对T,B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。     

ScFv噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用

随着蛋白组学时代的到来，对目的抗体的需求量的增加，噬菌体抗体库技术获得抗体的优越性得到充分发挥。该文主要介绍噬菌体抗体库技术的重要一种ScFv（单链抗体）噬菌体抗体库技术。从理想ScFv噬菌体抗体库的构建、可溶性表达、液体和固体筛选的优缺点及其在寄生虫学的应用等几个方面对此技术的研究进展作一综述。     

基于p73和DAPK基因异常甲基化模式的白血病肿瘤标志物研究

目的 肿瘤抑制基因异常甲基化状态与白血病发生关系密切,发展白血病甲基化标志物成为研究热点.但白血病类型复杂,利用单个基因甲基化模式作为肿瘤标志物具有一定局限性.本研究通过探讨基于肿瘤抑制基因p73和死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase gene,DAPK)异常甲基化模式对白血病诊断分型的价值和意义,寻找一种联合多基因异常甲基化模式作为白血病肿瘤标志物的方法.方法 应用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP),分析正常人白细胞、单核细胞系白血病细胞株U937、粒细胞系HL-60及淋巴细胞系Jurkat基因组中,p73和DAPK基因启动子区CpG岛甲基化状态,将测序结果汇集到Office Excel 2010文件中,并计算各CpG位点甲基化率,绘制2个基因在4种细胞来源基因组中的CpG岛甲基化模式图,从而筛选特异甲基化位点组合.通过甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP),在白血病细胞株、30例正常对照和104例白血病惠者外周血标本中,验证基因异常甲基化模式的诊断效能.结果 成功测序约107个含BSP产物转化质粒的菌株,并绘制出p73和DAPK基因CpG岛甲基化模式图.正常细胞基因组两者去甲基化程度远高于白血病细胞株.p73基因在正常细胞与白血病细胞株中,甲基化状态完全相反.DAPK基因在HL-60中与其他白血病细胞株甲基化状态存在明显差异.p73基因MSP甲基化检测可以鉴别正常细胞和白血病细胞,在临床白血病标本诊断中的灵敏度、特异度和准确度分别是21.5％、100.0％和43.1％,DAPK基因甲基化检测可以鉴别HL-60与其他白血病细胞株,其诊断急性非淋巴细胞白血病的灵敏度、特异度和准确性分别是59.1％、100.0％和77.2％.结论 p73和DAPK基因启动子区CpG岛在不同类型白血病细胞基因组中存在特异的甲基化位点,将其作为白血病初步诊断分型的潜在肿瘤标志物具有一定临床意义,也为今后发现白血病等肿瘤的甲基化标志物提供方法并奠定实验研究基础.     

刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白结合作用的研究

目的研究刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白之间的结合特性。方法采用PCR方法扩增弓形虫RACK1基因,双酶切后与pGEX-4T-1连接,构建原核表达载体pGEX-4T-1-RACK1,转化入BL21大肠埃希菌中,用0.8mmol/L IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE检测并进行Ni-IDA亲和层析纯化,采用Western blot分析RACK1蛋白与PKC蛋白的结合作用。结果 PCR扩增出966bp的RACK1基因开放读码框,成功构建pGEX-4T-1-RACK1原核表达载体,转化BL21后用IPTG诱导4h~6h,SDS-PAGE检测到约36ku的表达产物,Western blot检测RACK1蛋白能与PKC蛋白结合。结论成功构建了pGEX-4T-1原核表达载体,表达产物RACK1蛋白能与PKC蛋白结合。     

结核分枝杆菌在生物化学教学中的案例作用

结核分枝杆菌(Mycobacterium.tuberculosis,MTB)蕴含着丰富的生物化学知识,通过讨论其在生物化学相关章节理论教学中的案例作用,以期达到促进学生学好生物化学的目的。