肿瘤转移抑制基因HTPAP的Haploview单体型构建分析

目的 通过单核苷酸多态性(SNP)检测对肿瘤转移抑制基因HTPAP进行单体型构建和分析.方法 取100例肝细胞癌(HCC)新鲜标本,应用激光捕获组织显微切割获取纯肝癌细胞、提取DNA,对HTPAP基因上已登录的15个SNP位点进行检测,应用Haploview软件构建单体型.结果 15个SNP位点中,有8个表现为单态、5个呈多态性、2个未能检测出.对100例肝细胞癌的该5个多态位点进行单体型构建后发现11种单体型,其中3种单体型(C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G)最常见,占87%,另外8种单体型占13%.4个SNP(rs7007097、rs3830326、rs1149、rs3739252)表现为强连锁不平衡关系,尽管rs11539529出现重组现象,但从整体看还是属于同一个单体型块.结论 肿瘤转移抑制基因HTPAP在肝癌中常见C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G三种单体型,针对不同单体型研究分析可能为肝癌转移复发、预后预测提供新的途径和指标.     

肝脏外科少见病诊治问题

肝脏外科少见病是指发生于肝脏并排除了肝细胞癌和胆管细胞癌以及肝囊肿、肝海绵状血管瘤等常见良性占位之后的其它一些发生率较低的良恶性肿瘤和瘤样病变，其组织学类型复杂，临床上常无典型症状，实验室检查亦缺少特异性指标，诊断主要依靠影像学检查和病理检查。由于肝脏不同组织学类型的肿瘤预后相差悬殊，因此，术前定性诊断对治疗方案的选择以及病人的预后尤为重要。本文概述几种临床相对多见的病变，并根据其特点探讨诊治要点。     

穴位和非穴位氧分压和钙离子浓度在体实时监测比较

目的:比较穴位与非穴位中氧分压和钙离子浓度的差异。方法:利用自制的传感针,在体监测8只山羊的大肠俞、肝俞和关元俞及其对应的非穴位点的钙离子浓度;并监测肝俞和后三里及其对应非穴位点的氧分压。用方差分析方法对穴位和非穴位钙离子浓度和氧分压的差异和变化趋势进行统计分析。结果:穴位的钙离子浓度和氧分压在整个监测过程中都高于非穴位,差异均有显著性意义。结论:传统的针灸穴位具有高氧分压和高钙离子浓度特性。     

B族Ⅰ型清道夫受体基因外显子1多态性与冠心病、血脂水平的关系

目的 探讨B族Ⅰ型清道夫受体（SR-BⅠ）基因外显子1和内含子5单核苷酸多态性对中国天津地区汉族人群血脂水平和冠心病发病易感性的影响。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,测定370例冠心病患者和143例正常对照者SR-BⅠ基因外显子1的AluI酶切基因型及内含子5的ApaI酶切基因型,分析其与血脂水平、冠心病及冠状动脉造影结果的关系。结果 两组研究对象中内含子5均仅发现CC基因型。SR-BⅠ外显子1等位基因G、A频率在冠心病组和对照组分别为0.988、0.012和0.997、0.003。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。外显子1 AluI酶切多态性基因型频率、等位基因频率组间比较均无显著性差异（P>0.05）。在冠心病组男性患者中,外显子1基因多态性变异组（GA＋AA基因型亚组）的血清高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AⅠ水平高于无变异组（GG基因型亚组）。结论 SR-BⅠ基因外显子1多态性可能与中国天津汉族人群冠心病发病易感性及冠心病病变严重程度无关,但冠心病患者SR-BⅠ基因外显子1 A等位基因可引起男性血清高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AⅠ水平升高。     

肿瘤抑制基因HTPAP单体型构建及其与肝癌转移潜能的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织DNA的HTPAP基因单体型与肝癌转移潜能的关系。方法提取864例HCC手术样本DNA,应用焦磷酸测序行SNPs检测,并予单体型构建,分析其与肝癌转移潜能的关系。构建HTPAP启动子单体型pGL3质粒,并分别转染MHCC-97H、HepG2肝癌细胞和正常的肝Hela细胞,分析不同HTPAP启动子单体型对基因转录活性的影响。结果共发现6个SNPs位点[-1053A/G、+64G/C、+357C/G、+1648-/TAAG(无插入和插入TAAG等位基因分别以T/G示,后同)、+1838A/G、+3528C/T]。单体型构建发现HTPAP中共存在11个单体型,其中AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC、GCGGAT四种单体型占94.75%。临床病理特征分析提示单体型GCGGGT与高转移潜能正相关(P=0.0003)。启动子序列中两个SNPs(-1053AG和+64GC)存在完全LD,故只有三种启动子单体型(-1053AA/+64GG、-1053AG/+64GC GC和-1053GG/+64CC);双荧光报告法发现三种单体型的HTPAP启动子都具有显著转录活性,其中-1053AA/+64GG单体型启动子转录活性较-1053GG/+64CC和-1053AG/+64GC单体型启动子强,差异具有统计意义(P=0.005,0.009)。结论肿瘤转移抑制基因HTPAP的GCGGGT单体型与HCC高转移潜能正相关。HTPAP启动子单体型对基因的转录活性有显著影响并与术后复发密切相关,提示HCC中HTPAP的不同SNP单体型可能是潜在侵袭转移和复发预后的预测指标。     

乌苯美司联合XEC化疗方案治疗三阴性乳腺癌的临床研究

目的探讨乌苯美司联合XEC化疗方案治疗三阴性乳腺癌患者的临床疗效及其对外周血T淋巴细胞亚群及血清骨桥蛋白(OPN)水平变化的影响。方法选取河南科技大学第一附属医院2015年6月—2017年1月收治的三阴性乳腺癌患者83例,随机分成对照组(41例)和治疗组(42例)。对照组患者给予XEC化疗方案治疗,第1天静脉滴注注射用环磷酰胺500 mg/m~2,同时静脉滴注注射用盐酸表柔比星100 mg/m~2,第1~14天口服卡培他滨片1 g/m~2,疗程为21 d。治疗组在对照组的基础上口服乌苯美司片,30 mg/次,1次/d,疗程为21 d。两组均持续治疗4个疗程。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者SF-36评分、外周血T淋巴细胞亚群表达水平和OPN水平。结果治疗后,对照组和治疗组临床总有效率分别为75.61%、95.24%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组躯体疼痛、躯体功能、睡眠质量、生命活力、生理职能、心理健康等生活质量评分均显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗后治疗组生活质量评分显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平均显著升高,CD~(8+)水平显著下降,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗组T淋巴细胞亚群水平显著优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清OPN水平显著下降,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗组血清OPN水平显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论乌苯美司联合XEC化疗方案治疗三阴性乳腺癌患者效果显著,可有效改善患者外周血T淋巴细胞亚群和血清OPN水平,且安全性较高,具有一定的临床推广应用价值。     

ICU中心静脉置管相关性血流真菌感染的临床诊断与治疗

目的探讨ICU中心静脉置管相关性血流真菌感染临床易感因素和真菌耐药性,以提高临床诊治水平。方法回顾性分析2010年1月-2013年1月65例ICU中心静脉置管相关性血流感染患者临床资料,对其中出现真菌感染进行危险因素和病原菌耐药性分析。结果 ICU中心静脉置管相关性血流真菌感染13例,感染率为35.38%;共分离出真菌39株,其中热带假丝酵母菌所占比例最高,占33.33%;热带假丝酵母菌和近平滑假丝酵母菌对两性霉素B耐药率较低,分别为7.69%和11.11%,白色假丝酵母菌对氟胞嘧啶耐药率较低,为10.0%,光滑假丝酵母菌对酮康唑耐药率为0;中心静脉插管时间长(>14d)、低蛋白血症、多个静脉导管接头(>3个)、多根留置体腔内引流(>4根)、联合使用抗菌药物时间长(>7d)、伴有其他部位感染、肠外营养时间长(>7d)、病情严重(评分为4⁵分)是ICU中心静脉置管相关性血流真菌感染的危险因素(P<0.05)。结论 ICU中心静脉置管相关性血流真菌感染与置管时间等因素密切相关,加大干预后可降低感染的发生。     

Rai & Van Ryzin巢式模型在发育毒性研究中的应用

目的介绍应用BenchmarkDoseSoftware中的Rai&VanRyzin巢式模型进行化合物对动物仔代影响的危险度评价方法。方法用发育毒性实验数据进行模型拟合。结果根据模型为所研究物质推算出BMD及BMDL。结论软件包的使用使建模变得简单、方便,在发育毒理学研究中有广泛的应用前景。     

Fos蛋白参与PGE2引起HepG2肝癌细胞中VEGF mRNA的表达上调

目的: 研究前列腺素E2 (PGE2) 对人肝癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法: 反义脱氧寡核苷酸(ASO)及反转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 技术. 结果: PGE2增强了c-fos及VEGF mRNA在肝癌细胞系HepG2中的表达.c-fos mRNA的表达在PGE2作用3 h时达到高峰,显著高于PGE2作用0 h时(P < 0.01).在PGE2作用6 h时,VEGF mRNA的表达水平达到最高,显著高于PGE2作用0 h时(P< 0.01).c-fos ASO能明显降低PGE2诱导的VEGF mRNA的表达上调(P < 0.01).结论: PGE2可能通过增强转录因子c- fos的表达,进而促进VEGF mRNA在肝癌细胞中的表达和分泌,促进肝癌新生血管的生成,参与肿瘤的生长.     

DNA载体介导的RNAi抑制肝癌细胞的骨桥蛋白表达及侵袭性

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3侵袭性影响。方法构建两个针对人OPN mRNA干扰质粒pENTR~(TM)/U6-INF(pINF-1、2)及对照质粒pENTR~(TM)/ U6-CTR(pCTR),并将其转染HCCLM3细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定OPN的mR—NA表达量；Western印迹测定OPN蛋白的表达量；噻唑蓝(MTT)比色法实验检测HCCLM3的增殖力；Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变；结果与仅加转染试剂的空白对照组(2．01±0．13)相比。转染24h后,plNF-1组OPN mRNA用RT-PCR无法检测到,pINF-2组mRNA(1．00±0．12)下降50%,而pCTR组mRNA(2．02±0．13)表达差异无统计学意义(P＞0．05)。转染48h后plNF-1组OPN蛋白表达(0．11±0．02)与空白对照组(1．02±0．11)相比下降90%；转染plNF-1后,HCC-LM3细胞的增殖力下降2%。但与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。Matrigel侵袭实验结果显示,与空白对照组(28．4±1．5)相比,转染plNF-1后HCCLM3细胞穿过人工基底膜的数量(10．2±0．8)明显减少,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论pINF-1可以特异性抑制高转移肝癌细胞系HCCLM3中OPN的表达,并显著降低其侵袭力,但对细胞增殖力影响不大,此技术有望成为抑制肝癌侵袭转移的新途径。