丹酚酸B对非酒精性脂肪性肝病细胞模型氧化应激的影响

目的通过体外油酸(OA)诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型,给予丹酚酸B(Sal B)干预NAFLD细胞,探讨Sal B对NAFLD细胞氧化应激的影响及其机制。方法将Hep G2细胞分为对照组、模型组(OA)及治疗组(OA+丹酚酸B),CCK8法检测细胞标准生长曲线,筛选OA最佳的药物干预浓度及干预时间;油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况;检测ALT、AST、TG、TC含量;荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的含量; TBA法检测细胞内丙二醛(MDA)含量; RT-qPCR和Western Blot分别检测SOD2及SIRT3的mRNA及蛋白的表达。运用SIRT3过表达质粒上调SIRT3后给予Sal B干预,通过Western Blot筛选转染试剂和质粒的最合适转染比例,并检测SIRT3与SOD2的相对表达量变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果 1 mmol/L 24 h为OA最佳造模浓度及时间。细胞培养上清液中ALT、AST模型组较对照组升高,干预组较模型组降低,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为1240. 075、471. 989,P值均0. 05)。细胞内TG、TC模型组较对照组升高,干预组较模型组降低,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为97. 530、39. 824,P值均0. 01)。模型组MDA较对照组升高,干预组较模型组明显降低,3组间比较差异有统计学意义(F=336. 67,P 0. 01)。3组间细胞SIRT3 mRNA及SOD2mRNA表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为119. 35、32. 005,P值均0. 01),模型组较正常对照组显著降低,干预组较模型组明显升高(P值均0. 05)。3组细胞SIRT3及SOD2蛋白表达量比较差异均有统计学意义(F值分别67. 093、70. 314,P值均0. 01),模型组较对照组降低,治疗组较模型组升高(P值均0. 01)。Western Blot检测转染和(或)加药后SIRT3、SOD2蛋白的表达,4组细胞SIRT3、SOD2蛋白表达量不同,差异均有统计学意义(F值分别为287. 2、179. 8,P值均0.01),空白质粒+Sal B组以及质粒组较空白质粒组升高,质粒+Sal B组较质粒组升高(P值均0.05)。结论 Sal B可减轻NAFLD细胞脂质蓄积状态和氧化应激反应,对NAFLD细胞发挥保护作用。     

丹酚酸B对非酒精性脂肪性肝病细胞模型自噬功能的影响*

目的 应用棕榈酸（PA）体外诱导HepG2细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）细胞模型,并应用丹酚酸B（Sal B）和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预,探讨Sal B对脂肪变性的HepG2细胞自噬功能的影响及其分子机制。方法 将HepG2细胞分为对照组、模型组（PA）、干预组（PA/Sal B）和抑制剂组（3-MA/PA/Sal B）。采用MTT法筛选PA和Sal B最佳干预浓度,采用油红O染色观察细胞脂滴变化,使用荧光显微镜检测自噬标志蛋白LC3B荧光强度,采用Western blot法检测LC3B蛋白的表达。结果 模型组细胞培养上清TC、TG、ALT和AST水平分别为（0.57±0.07） mmol/L、（0.99±0.07） mmol/L、（98.47±7.00） IU/L和（88.36±8.54）IU/L,显著高于对照组【分别为（0.14±0.02） mmol/L、（0.26±0.03） mmol/L、（23.37±2.24） IU/L和（27.27±3.19） IU/L,P<0.01】,也显著高于干预组【分别为（0.30±0.04） mmol/L、（0.56±0.06） mmol/L、（53.36±5.33） IU/L和（56.37±7.66） IU/L或抑制剂组【分别为（0.43±0.02） mmol/L、（0.83±0.10） mmol/L、（86.84±3.37） IU/L和（75.82±3.43） IU/L,P<0.05】;模型组油红O吸光值为（0.666±0.009）,显著高于对照组、干预组或抑制剂组【分别为（0.247±0.011）、（0.477±0.013）或（0.507±0.002）,P<0.001】;干预组细胞LC3B蛋白相对表达量为（0.97±0.01）,显著高于模型组的【（0.22±0.02）,P<0.01】,而抑制剂组为（0.44±0.05）,有所降低。结论 Sal B处理能减少HepG2细胞脂质蓄积,可能是通过增加细胞自噬而起到保护作用的。