MicroRNA对基因表达调控研究进展

microRNA( miRNA)是一类长约21－25nt的内源性单链小分子RNA（small RNA），可调节与其序列互补mRNA的表达，普遍存在于高等生物界，在不同物种间具有高度的保守性，表达具有细胞特异性或组织特异性。通过与mRNAs特异性的碱基配对的程度，引导靶序列进入降解或（和）翻译抑制，以此参与个体系统发育、细胞分化、细胞增值、物种进化以及疾病发生过程中的基因表达调控。本文简述了近年对miRNA的形成、功能、作用机理等研究的新进展，并对其在基因沉默中的作用作了重点概述。     

LDLR-/-小鼠中脂代谢相关基因的表达

目的 分析LDLR基因敲除小鼠体内脂代谢相关基因ApoB100、PPARα、LXRα以及ABCA1与野生型相比表达水平的差异情况.方法 应用多重PCR的方法对LDLR-/-小鼠基因型进行鉴定;接着分别对LDLR-/-小鼠和野生型小鼠脂代谢相关基因的mRNA相对丰度以及蛋白表达水平进行qRT-PCR、ELISA分析.结果 与野生型相比,LDLR-/-小鼠中ApoB100、PPARα的mRNA及蛋白表达均上调(P＜0.05);ABCA1的表达水平下降(P＜0.01),蛋白水平上的下降幅度更为明显;而LXRα不管在mRNA或蛋白水平上均检测不到差异表达.结论 LDLR基因功能的缺失对不同的脂类代谢相关基因的表达产生不同的影响.本研究有助于人们进一步了解家族性高胆固醇血症的发病机制,同时也为药物设计中靶位点的选择提供参考价值.     

利用RNA干扰技术抑制小鼠羟甲基戊

目的 为了探寻一种更有效的家族性高胆固醇血症(FH)基因治疗新途径,通过慢病毒介导RNA干扰的方法在H22细胞系及C57BL/6J纯系小鼠中抑制内源性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)基因表达进行研究.方法 从HMG-CoAR基因序列中选择三段作为靶序列(T1、T2和T3),并构建重组慢病毒RNAi载体;经体外包装后,分别感染H22细胞系及注射小鼠.通过qRT-PCR检测HMG-CoAR mRNA丰度;利用Western Blot、ELISA方法分析HMG-CoAR的表达水平.结果 与空载体对照相比,三个实验组中稳定转染细胞的HMG-CoAR表达水平显著降低(P＜0.05),同时感染5天后小鼠的肝脏HMG-CoAR mRNA水平、蛋白含量以及血浆中HMG-CoAR表达均显著降低(P＜0.05),其中T3位点的抑制效率最高,是空质粒对照的1/3.另外,对三个载体的持续性抑制能力分析显示,在处理后的至少50天内,三个实验组小鼠中HMG-CoAR表达量均有效地被抑制,其中T1靶点的抑制效果最为稳定,而T3靶点的波动最大,但抑制效率一直最高.结论 三个重组慢病毒RNAi载体均可显著抑制内源性HMG-CoAR表达,可为下一步试图通过下调HMG-CoAR表达的方式,降低FH患者体内胆固醇水平的FH基因治疗奠定基础.     

MicroRNA对基因表达调控的研究进展

MicroRNA（miRNA）是一类长约21～25nt的内源性单链小分子RNA（small RNA）,可调节与其序列互补mRNA的表达,普遍存在于高等生物界,在不同物种间具有高度的保守性,表达具有细胞特异性或组织特异性。通过与mRNAs特异性的碱基配对,引导靶序列进入降解或（和）翻译抑制,以此参与个体发育、细胞分化、细胞增殖、物种进化以及疾病发生过程中的基因表达调控。该文简述了近年对miRNA的形成、功能、作用机制等研究的新进展,并对其在基因沉默中的作用作了重点概述。