四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究

目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。     

羟基喜树碱对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原表达的影响

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)对大鼠肝星状细胞(HSC) -T6增殖、转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原表达的影响,探讨HCPT抑制肝纤维化的机制.方法 体外培养肝星状细胞-T6,设立空白对照组和HCPT低剂量组(0.25 μ g/L)、HCPT中剂量组(0.50 μ g/L)、HCPT高剂量组(0.75μ g/L).四甲基偶氮唑盐比色实验测定细胞增殖的情况;RT-PCR检测转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原基因表达;Western blot检测转化生长因子β 1、α-平滑肌肌动蛋白表达;酶联免疫吸附法检测培养细胞上清液中的I型胶原的含量.组间差异用方差分析,两两比较用q检验.结果 (1) HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组A值分别为0.631±0.074、0.469±0.012、0.204±0.001,均较空白对照组(0.793±0.098)降低(F=82.86,P＜0.01);(2)与空白对照组比较,HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原(0.716±0.064、0.611±0.040、0.510±0.014、0.403 ±0.026)、α-平滑肌肌动蛋白(0.696±0.075、0.579±0.037、0.470±0.024、0.299±0.017)、转化生长因子β 1(1.019±0.056、0.835±0.022、0.696±0.055、0.322±0.104)mRNA表达均较显著下降(F值分别为133.304,244.501,100.164,P值均＜0.01);(3)与空白对照组比较,HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组α-平滑肌肌动蛋白(0.858±0.050、0.620±0.045、0.525±0.042、0.434±0.052)、TGF β 1蛋白(0.872±0.053、0.654±0.047、0.545±0.042、0.436±0.039)表达均下降(F值分别为234.56,312.34,P值均＜0.01);(4) HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原含量分别为(168.367±16.453) ng/ml、(141.284±11.731)ng/ml、(132.910±10.048) ng/ml,均较空白对照组(188.733±18.299)ng/ml下降(F=15.49,P＜0.01).结论 HCPT能下调肝星状细胞-T6 TGF β 1表达,抑制肝星状细胞-T6增殖、活化以及I型胶原的合成和分泌,这可能是HCPT抗肝纤维化的作用机制之一.     

羟基喜树碱对肝纤维化大鼠肝组织Bax、Bcl-2基因和α-SMA蛋白表达及肝纤维化的影响

目的 考察羟基喜树碱（hydroxycamptothecin,HCPT）对肝纤维化大鼠肝组织中Bax、Bcl-2基因和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达及肝纤维化的影响。方法 64只SD大鼠随机分为5组：正常组、模型组、低剂量 HCPT治疗组、中剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组。采用40%四氯化碳（CCl₄）诱导大鼠肝纤维化模型。正常组给予生理盐水腹腔注射;3个治疗组在造模同时分别给予0.25、0.5、1.0 mg/kg HCPT腹腔注射,3次/周,共8周。各组分别在第8周末取肝脏组织,行H-E、Masson染色观察肝脏组织病理学改变;RT-PCR检测肝脏组织中Bax、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2 mRNA比值;免疫组化染色检测肝脏组织中α-SMA蛋白表达;TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果 模型组大鼠出现明显的肝纤维化（Ⅲ期2例,Ⅳ期8例）,各HCPT治疗组的肝纤维化程度较模型组减轻（低剂量组Ⅱ期1例,Ⅲ期8例,Ⅳ期1例;中剂量组Ⅱ期7例,Ⅲ期3例;高剂量组Ⅰ期1例,Ⅱ期7例,Ⅲ期2例）,差异有统计学意义（P均<0.05）。RT-PCR检测显示模型组Bax、Bcl-2 mRNA较正常组升高,而各HCPT治疗组较模型组降低（P均<0.05）;模型组Bax/Bcl-2 mRNA比值低于各HCPT治疗组（P均<0.05）。免疫组化染色检测显示模型组α-SMA蛋白表达水平高于中、高剂量HCPT组（P<0.05）。TUNEL染色结果显示正常组、模型组无明显阳性染色,各HCPT治疗组均有阳性染色。结论 HCPT对CCl₄诱导的肝纤维化大鼠模型具有防治作用,抑制肝星状细胞活化增殖,上调Bax/Bcl-2 mRNA比值可能是HCPT抗肝纤维化的部分机制。     

Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究现况

阻断该通路可以 Wnt 信号转导通路是近年来分子生物学、细抑制癌细胞的增殖和诱导凋亡.胞生物学和肿瘤研究中的一大热点,其参与调 控细胞分化、癌变、凋亡及机体免疫、应激 等多种病理生理过程.目前许多关于癌症方面 的研究均已证实,阻断Wnt 信号通路可以诱导 癌症细胞的凋亡.肝纤维化的发生与多种信号 通路的激活相关,有研究...