建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体

目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物,建立染料法(SYBR green I)实时荧光定量PCR,评估其灵敏性及特异性;并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2=0.99),灵敏性评估显示20μl体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测,最低检出浓度为2拷贝/μl,比普通PCR检测方法提高1~2个数量级,并且具有较好的重复性;建立的SYBR I染料法具有良好的特异性,与立氏立克次体R株等其他5种立克次体,以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增;用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器,以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测,其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体检出量最多,肝脏和肾脏次之,血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性,适合各种样本中东方体的快速检测,可用于实验室的快速诊断。     

几种老年房颤的特点（附58例报告）

几种老年房颤的特点（附５８例报告）龚秀芳（徐州市交通医院内科２２１００５）我科从１９９１～１９９４年共收治了老年房颤的病人５８例，现分析如下。１临床资料１．１一般资料５８例病人，其中男性４０例，女性１８例，男：女＝２．２：１，年龄５５～７８岁，平均６...     

医院数字化建设在妇科临床护理工作中的应用

目的探讨数字化建设对妇科护理工作的影响。方法介绍数字化建设中的HIS系统、移动查房和移动护理系统、医护患呼叫信息系统和电子护理标识系统、条形码信息管理系统、病房点播系统、护理记录的电子化，说明它们对护理工作的影响。结果高度数字化信息资源共享模式能优化妇科护理工作流程，提升护理质量，降低护理成本，改善护患关系，利于护理管理，也对护理工作提出更高要求。结论数字化医院优化护理工作流程、更新护理管理模式，提升护理服务质量，确保高效、优质、安全的护理服务，值得临床推广。     

2型猪链球菌89K毒力岛Ⅳ型分泌系统LAMP检测方法的建立

目的建立针对高致病性2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)89K毒力岛Ⅳ型分泌系统的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。方法根据国内流行株特有89K毒力岛编码的Ⅳ型分泌系统(T4SS-89K)的virB4-89K基因保守区域设计并合成LAMP引物,通过优化反应体系和扩增条件建立T4SS-89K快速检测方法,对方法的特异性、敏感性进行评估。结果优化的LAMP反应体系具有良好的扩增效率,检测灵敏度为1.53×101拷贝/反应,全部扩增检测可在60min内完成;建立的LAMP法具有良好的特异性,与不含T4SS-89K的猪链球菌(包括1/2型、1型、3~33型),以及其他常见9种对照菌均不发生特异性扩增,而与1998和2005年疫情现场分离的高致病性SS2均可发生特异性扩增。结论建立的LAMP方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,可用于高致病性SS2快速检测。     

米索前列醇预防产后出血的临床观察

目的 观察米索前列醇预防产后出血的临床疗效.方法 选取我院收治的94例产妇,收治时间为2015年1月—2017年2月,将所有的产妇随机分为治疗组(n=47)和对照组(n=47).对照组采用常规预防产后出血治疗,治疗组在对照组的基础上加用米索前列醇,对比2组产妇产后出血量情况以及不良反应发生情况.结果 治疗组发生产后出血4例(8.52%),明显优于对照组的12例(25.54%)(P<0.05);治疗组产后出血量明显低于对照组(P<0.05).治疗组产妇产后不良反应发生率为12.76%,明显优于对照组的34.08%(P<0.05).结论 米索前列醇具有较好的预防产后出血效果,能够明显降低产后出血量,值得临床推广.     

寨卡病毒prM蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

目的通过原核表达系统表达纯化寨卡病毒(zika virus,ZIKV)prM膜蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体。方法在对寨卡病毒膜蛋白prM进行生物信息学分析的基础上,去除其跨膜域,对该蛋白的密码子进行优化,化学合成基因序列并连接到表达质粒pET32a,重组质粒转化E.coli.BL21(DE3),并对其进行测序,然后进行原核诱导表达,诱导产物进行SDS-PAGE鉴定并用His柱纯化。纯化的重组蛋白用于免疫BALB/c雌鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法和Western blot检测血清抗体效价及特异性。结果原核表达系统成功表达了截短prM蛋白,相对分子质量(Mr)为37×10~3,与预期相符。经过His柱纯化后获得高纯度的目的蛋白;该蛋白免疫BALB/c雌鼠后诱导产生特异性多克隆抗体,ELISA效价为1∶819 200;Western blot显示制备的多克隆抗体能性识别prM蛋白。结论利用原核表达系统高效表达并纯化了prM膜蛋白,制备的多克隆抗体效价高,特异性强,为进一步研究该病毒的致病机制及建立ZIKV感染快速诊断方法奠定了基础。     

2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶的生物信息学分析北大核心CSCD

目的利用生物信息学方法分析预测2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶(Glucosamine 6-phosphate deaminase,NagB)的性质、结构与功能等信息。方法利用DNAStar、ProtParam、PredictProtein、PSORT、SignalP、TMHMM、SOMPA、PROSITE、SWISS-MODEL、SYBYL-X和ClustalX等在线分析软件对2型猪链球菌中的NagB理化性质、亚细胞定位、二级结构、三级结构及活性中心等进行分析。结果 NagB由378个氨基酸残基构成,无信号肽及跨膜区,是稳定的亲水性胞浆蛋白。二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主分别占46.30%和32.28%,三级结构模拟显示其为典型的二聚体结构,单体的活性中心可能由Ala52、Ser55、Arg106、Ser107、Ser110、Phe164、Met166、Glu242、Val364、Asn365、Arg366、Val367、Val368等多个核心氨基酸构成。结论生物信息学预测NagB含有2个SIS功能结构域(34-190aa;210-358aa),涉及磷酸糖的异构酶功能,NagB的特征信息为进一步研究其在S.suis 2生长增殖以及致病过程中可能发挥的作用奠定了基础。     

SsuDAT1I限制修饰系统在不同背景猪链球菌2型分离株中的分布北大核心CSCD

目的探索SsuDAT1I限制修饰系统在不同背景的猪链球菌2型(SS2)分离株中的分布规律。方法选取29个不同背景SS2分离株,通过分析其全基因组序列或PCR检测purH和purD基因间是否含有SsuDAT1Ⅰ插入序列,并分别用MobⅠ和DpnⅠ酶切SS2基因组以鉴定其5′-GATC-3′序列位点是否存在甲基化。结果 29株SS2中有6株携带SsuDAT1Ⅰ限制修饰系统,且均为无(弱)毒株;其他23株不带SsuDAT1Ⅰ的SS2中有22株为强毒株,仅有1株为1980年代在荷兰分离的弱毒株T15。酶切显示,含有SsuDAT1Ⅰ的SS2菌株的基因组DNA可被DpnⅠ完全酶切,但不能被MobⅠ所酶切;其他缺失SsuDAT1Ⅰ的SS2菌株的酶切图谱则完全相反。证明SsuDAT1Ⅰ系统可对SS2基因组的5′-GATC-3′位点进行甲基化修饰。结论作为SS2基因组获得的外来遗传元件,对SsuDAT1Ⅰ的鉴定有助于分析SS2菌株的系统进化关系和毒力强弱。     

6例圆头精子症患者临床分析

目的:探讨圆头精子症患者病因和临床表型特征。方法:收集6例圆头精子症导致不育患者和8例正常生育男性基本信息,进行外周血染色体、AZF、性激素、精液质量检查。结果:6例患者不育年限平均为4年,其中4例从事电焊、汽车喷漆、高温作业、接触化学物品职业,2例从事网络和电子商务;6例患者临床特征、染色体和AZF基因、性激素未见异常,3例患者圆头精子率100.00%,3例圆头精子率95.00%～99.50%,圆头精子症患者精子活力明显低于正常生育组(P<0.05)。结论:圆头精子症发生可能与外界环境有关,除具有圆头精子和精子活力低下外,无其他异常表型,建议采用辅助生殖技术助孕。     

多囊卵巢综合征患者卵泡液中肿瘤坏死因子水平对临床结局的影响

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡液中肿瘤坏死因子-α(TNF-ɑ)对卵母细胞成熟和发育的影响。方法选取2020年1-6月因输卵管梗阻就诊于厦门市妇幼保健院生殖医学科行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的PCOS患者30例为PCOS组,另选取同期月经周期规律患者30例为对照组。分别检测两组研究对象空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平,采用酶联免疫吸附法检测卵泡液中TNF-α水平,比较两组患者血液中代谢指标及卵泡液中TNF-α水平的差异,分析PCOS患者卵泡液中TNF-α水平与FINS、HOMA-IR、受精率及优胚率的关系。结果PCOS组患者LH、TG、TC、FINS、HOMA-IR及卵泡液中TNF-α水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组患者MII卵率高于PCOS组,差异有统计学意义(P<0.05);受精率高于PCOS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者卵泡液中TNF-α水平与FINS、HOMA-IR呈正相关关系(均P<0.05),与受精率、优胚率呈负相关关系(均P<0.05)。结论PCOS患者卵泡液中TNF-α水平与FINS、HOMA-IR呈正相关关系,与受精率、优胚率呈负相关关系,低度慢性炎症可能参与了PCOS的发生发展。