游离胆固醇经P38-MAPK信号途径激活未折叠蛋白反应诱导巨噬细胞凋亡

目的:探讨p38-MAPK信号通路对未折叠蛋白反应的影响及在游离胆固醇(FC)诱导巨噬细胞凋亡中的作用。方法:收集小鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养,使用100μg/mL乙酰低密度脂蛋白及10μg/mL胆固醇乙酰转移酶抑制剂-58035促进FC聚集,以p38特异性抑制剂SB203580进行干预,Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-bolt检测磷酸化p38和CHOP表达。结果:普通培养基孵育的巨噬细胞无磷酸化p38和CHOP表达,只有少量细胞凋亡;而在促进FC聚集条件下孵育的巨噬细胞磷酸化p38和CHOP表达明显,8 h后凋亡细胞为(21.8±0.6)%;使用SB203580干预后无磷酸化p38表达,CHOP表达减少,凋亡细胞为(6.9±0.3)%。结论:FC聚集是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因,p38通过激活未折叠反应参与这一过程,而SB203580通过抑制p38活性对FC诱导的巨噬细胞凋亡具有保护作用。     

小檗碱对p38MAPK通路及COX-2mRNA表达的作用

目的研究中药小檗碱是否通过p38MAPK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达。方法取人外周静脉血分离及培养单核细胞,分为对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+小檗碱25μmol/L组、LPS+小檗碱50μmol/L组、LPS+小檗碱100μmol/L组。分别在培养后0.5、6、12、24h提取细胞,行RT-PCR法测定COX-2mRNA水平,行Westernblot法测定p38MAPK、p-p38MAPK及COX-2蛋白水平。同时加入选择性p38MAPK抑制剂,分别测定COX-2mRNA及蛋白水平。结果与对照组相比,LPS组COX-2mRNA及蛋白表达明显增强(P<0.01)。与LPS组相比,小檗碱组COX-2mRNA及蛋白表达明显抑制(P<0.05),且随着浓度增加,抑制作用更明显,在给药后12h,小檗碱对COX-2抑制作用最强,但是与LPS组相比,小檗碱组p38MAPK活性水平无明显统计学差异(P>0.05)。加入p38MAPK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显(P<0.05)。结论小檗碱能抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白水平,并呈浓度依赖性,p38MAPK与人外周血COX-2表达有关,而小檗碱对p38MAPK活性蛋白表达无明显抑制作用。     

游离胆固醇激活未折叠蛋白反应诱导巨噬细胞凋亡

目的探讨游离胆固醇激活未折叠蛋白反应以及对巨噬细胞凋亡的影响。方法取小鼠腹腔巨噬细胞进行培养,然后分别以普通培养基、普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白、普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白再加胆固醇移动抑制剂分组孵育,Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-bolt检测下游转录因子C/EBP同源蛋白表达。结果普通培养基孵育的巨噬细胞无C/EBP同源蛋白表达,只有少量细胞凋亡;而普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白孵育的巨噬细胞C/EBP同源蛋白表达明显,细胞凋亡也达到21.83%±2.47%;同时使用胆固醇移动抑制剂干预后,C/EBP同源蛋白无表达,而细胞凋亡比单纯促进游离胆固醇聚集状态孵育组显著减少。结论过多的游离胆固醇聚集是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因之一,未折叠蛋白反应参与这一过程,而特异性胆固醇移动抑制剂U18666A可以有效阻止游离胆固醇进入内质网激活未折叠蛋白反应诱导巨噬细胞凋亡。     

小檗碱通过ERK,JNK信号转导途径对COX-2的抑制作用

目的：研究中药小檗碱是否通过ERK,JNK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.方法：取人外周静脉血分离及培养单核细胞,分为对照组、LPS组、LPS＋小檗碱25μmol/L组、LPS＋小檗碱50μmol/L组、LPS＋小檗碱100μmol/L组.分别在培养后30min,6,12,24h提取细胞,行RT-PCR法测定COX-2mRNA水平,行Western Blot法测定ERK,p-ERK,JNK,p-JNK及COX-2蛋白水平.同时加入选择性ERK,JNK抑制剂,分别测定COX-2mRNA及蛋白水平.结果：与LPS组相比,小檗碱组COX-2mRNA及蛋白表达明显抑制（P〈0.05）.与LPS组相比,小檗碱组ERK活性水平有统计学差异（P〈0.05）.但是与LPS组相比,低、中浓度小檗碱组（25,50μmol/L）JNK活性水平无统计学差异,高浓度小檗碱组（100μmol/L）JNK活性水平有明显统计学差异（P〈0.05）.加入ERK,JNK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显（P〈0.05）.结论：小檗碱能抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白水平,其作用程度呈浓度依赖性.小檗碱可能通过ERK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.高浓度小檗碱可能通过JNK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.     

小剂量Aspirin对动脉粥样硬化兔主动脉斑块炎症反应和COX-2表达的影响

目的探讨小剂量阿司匹林对兔动脉粥样硬化主动脉斑块炎性过程和COX-2表达的影响。方法24只雄性新西兰兔随机分为对照组(喂食普通兔料)、高脂模型组(喂食高脂饲料)、阿司匹林组(喂食高脂饲料并给与小剂量阿司匹林干预),饲养12周后处死动物,取主动脉进行病理学检查,测定斑块面积,采用免疫组化方法观察各组巨噬细胞的表达情况,Western-bolt分析COX-2的表达。结果病理学大体观察发现,对照组、高脂模型组和阿司匹林组主动脉壁脂质斑块面积占整条主动脉内壁面积的百分比分别为0%、(59.62±10.74)%、(48.33±7.85)%,各组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)。阿司匹林组斑块区巨噬细胞含量、COX-2表达明显低于高脂模型组。结论小剂量阿司匹林干预可以通过抑制病灶区的炎症反应、COX-2的表达来有效减轻高脂饮食所致的新西兰兔动脉粥样硬化的严重程度。     

ERK信号转导途径在小檗碱抑制脂多糖诱导的COX一2表达中的作用

目的探讨小檗碱是否抑制脂多糖诱导的COX-2mRNA及蛋白表达,以及小檗碱是否通过ERK信号转导途径抑制cOx-2的表达。方法取健康志愿者外周血,分离及培养单核细胞,分为五组,分别为对照组;脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）组;LPS＋小檗碱25μmol／L组;LPS＋小檗碱50μmol/L组;LPS＋小檗碱100μmoL／L组。分别在培养后30min,6h,12h,24h提取细胞,行RT—PCR法测定COX-2mRNA水平,行westemblot法测定ERK、P—ERK及COX-2蛋白水平。同时加入选择性ERK抑制剂,分别测定C0X-2mRNA及蛋白水平。结果与对照组相比,LPS组COX-2mRNA及蛋白表达明显增强（P〈0．01）。与LPS组相比,小檗碱组COX-2mRNA及蛋白表达明显抑制（P〈0．05）,且随着浓度增加,抑制作用更明显,在给药后12h,小檗碱对COX-2抑制作用最强。与LPS组相比,小檗碱组ERK活性水平有明显统计学差异（P〈0．05）。加入ERK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显（P〈0．05）。结论小檗碱能抑制人外周血单核细胞cOx-2mRNA及蛋白水平,其作用程度呈浓度依赖性,小檗碱对ERK活性蛋白表达有明显抑制作用。小檗碱可能通过ERK信号转导途径抑制人外周血单核细胞C0x_2mRNA及蛋白表达。     

JNK及p38MAPK在小檗碱抑制人外周血单核细胞COX-2表达中的作用

目的 研究中药小檗碱是否通过JNK,p38MAPK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白表达.方法 取人外周静脉血分离及培养单核细胞,分为5组,分别为对照组;LPS组;LPS联合小檗碱25 μmol/L组;LPS联合小檗碱50μmol/L组;LPS联合小檗碱100 μmol/L组.分别在培养后30min,6 h,12 h,24 h提取细胞,行RT-PCR法测定COX-2mRNA水平.行Westernblot法测定JNK,p-JNK,p38MAPK,p-p38MAPK,及COX-2蛋白水平.同时加入选择性JNK,p38MAPK抑制剂,分别测定COX-2 mRNA及蛋白水平.结果 与对照组相比,LPS组COX-2 mRNA及蛋白表达明显增强(P<0.01).与LPS组相比,小檗碱组COX-2 mRNA及蛋白表达明显抑制(P<0.05),且随着浓度增加,抑制作用更明显,在给药后12 h,小檗碱对COX-2抑制作用最强.但是与LPS组相比,低、中浓度小檗碱组(25 μmol/L及50 μmol/L)JNK活性水平无明显统计学差异(P>0.05),高浓度小檗碱组(100 μmol/L)JNK活性水平有明显统计学差异(P<0.05).但是与LPS组相比.小檗碱组p38MAPK活性水平无明显统计学差异(P>0.05).加入JNK,p38MAPK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显(P<0.05).结论 高浓度小檗碱可能通过JNK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白表达.p38MAPK与人外周血COX-2表达有关,而小檗碱对p38MAPK活性蛋白表达无明显抑制作用.