低剂量内毒素预处理保护内毒素介导的小鼠急性肝损伤及其机理探讨

目的研究低剂量内毒素(LPS)预处理对LPS介导的小鼠急性肝损伤的影响。方法LPS通过腹腔注射小鼠;丁基亚磺酰亚胺（BSO）处理耗尽小鼠肝脏谷胱苷肽(GSH)含量;血浆天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定用全自动生化分析仪;基因表达测定采用RT PCR。结果① 低剂量LPS预处理降低高剂量LPS诱导的小鼠肝功能损伤;② 低剂量LPS刺激肝脏GSH含量升高;LPS预处理组GSH水平显著高于高剂量LPS处理组;③ BSO预处理后,LPS预处理组与高剂量LPS组的血浆ALT和AST水平没有差别;④ LPS处理导致转硫途径关键酶——胱硫醚β合酶活性以及GSH合成途径关键酶——γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶表达升高。结论低剂量LPS通过上调肝组织中GSH合成相关基因表达,增加GSH的含量,减轻高剂量LPS诱导的肝脏损伤。     

应用ARMS法检测16例云南省少数民族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因型

葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (Ｇ6ＰＤ)缺乏症呈全球性多民族分布。我国主要分布在长江以南地区 ,不同地区的不同民族发病率不同。目前全球已鉴定的Ｇ6ＰＤ基因突变型有 12 2种以上[1] ,各种基因突变型分布有地区和民族异质性。我国已鉴定的基因突变型有 14种 ,均为单个碱基置换的点突变[2 ] 。云南省是多民族省份 ,又属Ｇ6ＰＤ缺乏症高发区 ,由于各少数民族地区经济文化差异和人口流动性较小 ,形成相对封闭和独立的居住群体 ,为了解这些民族Ｇ6ＰＤ缺乏症患者的基因突变型的情况 ,我们筛选出我省 16例纯种少数民族患者 ,采用突变特异性扩增系统 (…     

结直肠癌发生的分子病理学基础

结直肠癌发生是遗传学和表观遗传学改变累积的结果.基因组不稳定导致基因突变和DNA甲基化模式改变是结直肠癌发生的主要分子事件.鉴定不同患者中导致结直肠癌发生的关键基因突变及甲基化表型,对结直肠癌进行分子病理分型和诊断,是进行个体化治疗和靶向治疗的前提.     

淫羊藿素通过PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌H460细胞增殖

目的:探讨淫羊藿素（icaritin）通过PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色实验检测,不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）淫羊藿素处理H460细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞凋亡的影响,Western blot实验检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Cleaved-Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:淫羊藿素可抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖,并表现为剂量和时间依赖性（P＜0.05）。0、5、10、20μmol/L淫羊藿素处理H460细胞24h后,H460细胞凋亡率分别为（4.90±1.20）%、（13.5±2.32）%、（16.47±1.90）%和（27.43±3.15）%,P＜0.05。淫羊藿素可下调PI3K、AKT的表达水平,降低AKT的磷酸化(p-AKT)水平,上调Cleaved-Caspase-9表达水平(P＜0.05)。结论:淫羊藿素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制H460细胞增殖。     

转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用

目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响.方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞.将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化.分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05);转染后48 h和72 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225).结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用.     

重组可溶性Tie2对结肠癌生长及肝转移的抑制作用

目的探讨以Tie2为靶点的基因治疗对结肠癌生长及肝转移的抑制作用。 方法构建表达Tie2胞外可溶性片段(sTie2)的慢病毒载体pLenti-sTie2,建立BALB/C小鼠结肠癌皮下成瘤模型及肝转移模型。经尾静脉注射重组病毒载体,在不同时间点分别测量皮下移植瘤体积、经ELISA法检测小鼠血中sTie2的表达水平。2周后处死小鼠,观察肝转移的情况,并取瘤组织检测血管形成和细胞凋亡指标。采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析。组间的比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。 结果经pLenti-sTie2重组慢病毒治疗3 d后,小鼠体内可较高表达sTie2[(1.38±0.19)～(1.52±0.12)g/L],与空病毒组相比,pLenti-sTie2重组慢病毒能显著抑制移植瘤的生长及结肠癌肝转移灶的形成(P<0.05)。组织病理检测和DNA ladder法检测发现,肿瘤血管生成同样得到有效抑制,促进肿瘤细胞凋亡。 结论为基于Tie2为靶点的抗血管形成治疗结肠癌及结肠癌肝转移患者提供了实验依据。     

肺癌的表观遗传研究进展

肺癌分子生物标志物早期检测是一种有效发现并且影响治疗癌症的有效分子工具。表观遗传在肺癌的发生、发展过程中起着重要的作用。表观遗传机制的研究从根本上改变了我们传统对于肺癌的发现,诊断及治疗的观点。表观遗传为肺癌的生物标记发展,早期发现和治疗风险评估提供新的见解。     

云南籍葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变研究

目的研究云南籍葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）基因突变型特点，探讨检测G6PD缺乏症基因突变型的有效方法．方法应用硝基四氮蓝（NBT）纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查，等位基因特异抗突变系统（ARMS），聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR—SSCP），变性梯度凝胶电泳（DGGE）和DNA测序分析46例云南籍G6PD缺乏症患者的G6PD基因突变类型．结果46例样本经PCR—ARMS法发现nt-1388G→A18例（39．13％），nt-1376G→T2例（4．30％）；经PCR—SSCP法发现有22例样本有电泳迁移率异常，其DNA测序结果与PCR—ARMS法的结果吻合，并发现2例nt-1311c→T；经PCR—DGGE法分析G6PDexon12发现有30例样本发现异常泳动条带，DNA测序证实26例（56．52％）为nt-1388G→A，4例（8．7％）nt—1376G→T．而PCR—DGGE法分析G6PDexon2未发现有异常泳动条带的样本．结论（1）nt—1388G→A、nt—1376G→T是云南省主要的基因突变型也是中国人中最常见的两种突变型，揭示中华民族有着共同的起源；（2）在检测突变的PCR—ARMS法、PCR—SSCP法和PCR—DGGE法三种方法中，以PCR—DGGE法结合DNA测序，阳性检出率高，简便、快捷、灵敏、结果准确可靠．     

云南傣族和瑶族G6PD缺乏的基因突变分析

目的 分析云南傣族和瑶族两种少数民族G6PD缺乏的基因突变型，了解云南少数民族G6PD缺乏症的分子遗传特征。方法 应用突变难扩增系统、PCR-单链构象多态性分析、DNA自动测序技术，检测分析云南21例傣族、15例瑶族G6PD缺乏病例。Exon12及部分Intron11的C6PD基因突变。结果 傣族中发现G1376T突变3例、G1388A突变13例，瑶族中发现G1376T突变8例、G1388A突变3例。其中在云南傣族13例G1388A突变中有5例复合IVS-11 C93T突变，瑶族8例G1376T突变中2例复合IVS-11 C93T突变。首次报道上述两种复合型突变在云南傣族和瑶族中的存在。结论 云南少数民族中G6PD缺乏症具有明显的遗传异质性，G1388A复合IVS～11 C93T突变、G1376T复合WS—11C93T突变在云南一些民族中有较高的发生率。