银杏达莫注射液对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用机制研究

目的探讨银杏达莫注射液(Gin)对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用机制。 方法选取36只Wistar实验大鼠，按随机数字表法分为正常组(N组)、肝缺血再灌注模型组(M组)和银杏达莫注射液干预组(T组)，每组12只，M组、T组采用夹闭肝固有动脉1 h再灌注1 h的方法模拟大鼠肝缺血再灌注模型。T组造模前1周开始每日按3.6 ml/kg腹腔注射Gin，N、M组造模前1周开始每日注射同量生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色检测肝组织细胞形态，Masson染色和天狼星红染色检测肝组织胶原纤维；免疫印迹(Western blot)检测肝组织B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)，Bcl-相关X蛋白(Bax)、Smad和蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平；聚合酶链式反应(PCR)检测肝组织中Bax、Bcl-2、Smad和Akt mRNA表达水平；免疫组织化学检测肝组织中Bax、Bcl-2、白介素6(IL-6)和IL-10的表达情况，以及检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。 结果HE染色显示，M组肝组织细胞损伤严重且炎症细胞多、细胞水肿明显；Masson和天狼星红染色表明，M组胶原纤维沉积较N组明显；3种染色结果均显示，T组肝组织炎性浸润、胶原纤维沉积程度均较M组轻。Western blot结果发现，以β-actin为内参，M组Bax、Bcl-2蛋白相对表达量(0.91±0.28，0.68±0.24)高于N组(0.22±0.19，0.23±0.12)(均P<0.01)，T组Bax蛋白相对表达量(0.48±0.11)低于M组(P<0.01)，Bcl-2蛋白相对表达量(0.89±0.25)高于M组(P<0.01)；以GAPDH为内参，M组Akt、Smad蛋白相对表达量(0.72±0.34，1.03±0.13)高于N组(0.17±0.09，0.57±0.26)(均P<0.01)，T组Akt蛋白相对表达量(1.47±0.89)高于M组(P<0.01)，Smad蛋白相对表达量(0.62±0.42)低于M组(P<0.01)。PCR结果显示，M组Bax、Bcl-2、Akt和Smad mRNA表达水平(0.76±0.03，0.55±0.06，0.96±0.09，1.58±0.16)均高于N组(0.29±0.04，0.36±0.05，0.64±0.06，0.53±0.14)(均P<0.01)，T组Bax和Smad mRNA表达水平(0.36±0.04，1.05±0.26)低于M组(均P<0.01)，Bcl-2和Akt mRNA表达水平(0.85±0.04，1.46±0.19)高于M组(均P<0.01)。免疫组织化学结果显示，M组Bax、Bcl-2、IL-6、IL-10阳性表达面积[(39.52±0.78)%，(4.62±0.94)%，(38.04±3.11)%，(6.48±1.14)%]均高于N组[(0.99±0.13)%，(0.96±0.12)%，(0.46±0.06)%，(0.47±0.17)%](均P<0.01)；T组Bax、IL-6阳性表达面积[(8.18±1.22)%，(6.05±0.92)%]低于M组(均P<0.01)，Bcl-2、IL-10阳性表达面积[(48.13±2.65)%，(31.91±4.86)%]高于M组(均P<0.01)。与N组SOD、MDA水平[(274.81±10.42)U/ml，(2.25±0.51)nmol/ml]相比，M组SOD水平[(113.24±8.52)U/ml]下降，MDA水平[(5.19±0.99)nmol/ml]升高(均P<0.01)。T组SOD水平[(221.51±6.25)U/ml]高于M组(P<0.01)，MDA水平[(3.91±0.86)nmol/ml]低于M组(P<0.01)。 结论银杏达莫注射液预处理可能通过PI3K/Akt和TGF-β/Smad信号通路介导的抑制细胞凋亡和纤维化发挥对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用。