1例家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变体功能研究

目的分析基因突变对低密度脂蛋白受体(LDLR)功能的影响,探讨其对家族性高胆固醇血症(FH)的可能致病机制。方法对1名FH患者进行基因检测,构建真核细胞表达载体,经定点诱变获得突变受体质粒,并将突变受体质粒转染入人胚肾(HEK293)细胞中,用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察突变蛋白细胞定位,用流式细胞术检测突变蛋白表达及内吞活性变化。结果基因测序显示该名患者发生了LDLR基因Y398X突变;CLSM结果显示突变蛋白部分滞留于内质网中;流式细胞术结果显示细胞表面LDLR表达量减少至5.5%,内吞活性减少至20.1%。结论在临床确诊的FH患者中检测到LDLR致病性基因Y398X突变,在中国为首次报道。该突变造成LDLR转运缺陷,从而导致血浆中胆固醇代谢障碍,继而诱发FH的发生。     

基于LC-MS的除湿胃苓汤加减治疗脾虚湿蕴型慢性湿疹的血清代谢组学研究

目的 基于液相色谱-质谱法(LC-MS)研究除湿胃苓汤加减治疗脾虚湿蕴型慢性湿疹的代谢机制。方法 选取10例脾虚湿蕴型慢性湿疹患者给予除湿胃苓汤加减治疗并收集患者治疗前后血清,分别纳入患者治疗前血清组、患者治疗后血清组;另选取10例健康无湿疹症状及病史的健康人血清作为健康对照血清组进行对照。比较治疗前后慢性湿疹患者的湿疹面积及严重程度指数(EASI)评分。将三组应用LC-MS进行血清样品的分离和数据采集,以主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法筛选出相关差异代谢物,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)和人体代谢组数据库(HMDB)等开放数据库对差异的标志物进行代谢通路分析。结果 患者治疗后血清组的EASI评分(1.81±0.45)分明显低于患者治疗前血清组的(8.16±1.41)分,差异有统计学意义(t=13.567, P=0.000<0.01)。三组血清样本的代谢模式存在显著差异,基于变量重要性投影(VIP)>1.7和P<0.05的原则筛选出12个代谢标志物,苹果酸、油酰基肉碱显著上升, L-蛋氨酸...     

低密度脂蛋白受体基因全长cDNA 序列分析法检测1例家族性高胆固醇血症患儿基因突变

目的建立低密度脂蛋白受体(LDLR)基因全长cDNA序列分析方法并对1例家族性高胆固醇血症(FH)患儿进行基因检测。方法设计7对LDLR基因cDNA引物并验证;对1例临床诊断为FH的患儿进行家系调查和临床体检,提取外周血DNA和RNA,DNA扩增结合测序分析LDLR基因并找出其突变位点;RNA经PCR反转录为cDNA后扩增LDLR基因,将扩增产物进行正、反双向核苷酸序列分析,并与GenBank中LDLR基因的正常序列对比找出突变位点后与传统DNA测序方法结果比对。结果 LDLR基因全长cDNA序列分析方法检测LDLR基因为2 583个碱基,与标准序列完全一致;本例患儿确诊为"FH纯合子",cDNA测序结果与传统DNA测序结果相符,均为第2外显子终止突变和第6外显子点突变及框移突变。结论 LDLR基因全长cDNA序列分析法检测FH患儿突变,与传统DNA方法检测结果相符,可为FH的基因诊断提供新的方法依据。     

高三酰甘油血症合并急性心肌梗死男性患者载脂蛋白A5基因甲基化研究

目的探讨高三酰甘油血症(HTG)合并急性心肌梗死(AMI)男性患者载脂蛋白A5(apo A5)基因甲基化对apo A5表达水平的影响。方法选取HTG合并AMI男性患者为病例组,选取HTG合并颈动脉粥样硬化(As)男性患者为对照组,每组各18例。用Illumina人类全基因组DNA甲基化450K芯片检测两组患者外周血DNA甲基化变化,用生物信息学方法分析比较两组间apo A5基因的甲基化差异;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测apo A5 mRNA表达水平;ELISA法检测血浆apo A5水平。结果全基因组甲基化芯片初步筛选结果显示,与对照组相比,病例组apo A5基因表现为高甲基化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,病例组apo A5 mRNA及apo A5表达水平低于对照组[(0.037±0.016)vs(1.000±0.093),(156.6±16.8)μg/L vs(197.3±32.3)μg/L,t分别为18.970和2.502,P均0.05]。结论 HTG合并AMI男性患者apo A5的mRNA和apo A5蛋白表达水平均降低与该基因甲基化水平增高有关,apo A5基因甲基化异常可能参与HTG患者的As进展。     

左旋维C联合Q开关Nd:YAG激光1 064 nm治疗更年期女性黄褐斑疗效观察

目的:分析左旋维C联合Q开关Nd:YAG 1 064 nm激光治疗更年期女性黄褐斑患者的疗效。方法:选择2017年7月-2019年2月于笔者医院皮肤科诊治的86例女性更年期黄褐斑,随机分为对照组和观察组,每组43例。对照组采用Q开关Nd:YAG 1 064 nm激光治疗,每个月治疗1次;观察组在对照组的基础上采用超声导入联合口服左旋维C治疗,超声导入1次/周,口服3次/天,3粒/次,两组均持续治疗6个月。比较两组患者治疗总有效率、治疗前后黄褐斑面积及颜色、激素水平和治疗后不良反应发生率。结果:观察组总有效率(93.02%)显著高于对照组(74.42%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清FSH、E₂、LPO、MSH水平、黄褐斑面积及颜色评分较治疗前降低,且观察组降低程度较对照组更明显(P<0.05);血清SOD水平较治疗前升高,且观察组升高程度较对照组更高(P<0.05);观察组不良反应发生率(6.98%)低于对照组(25.58%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与单独使用Q开关Nd:YAG 1 064 nm激光治...     

人真皮微血管内皮细胞的原代培养及低氧/复氧模型的建立

目的:培养人真皮微血管内皮细胞,建立人真皮微血管内皮细胞低氧/复氧模型。方法:采用酶消化及联合磁珠分选法,得到人真皮微血管内皮细胞(HDMECs),体外培养传至P5代,采用Ⅷ因子免疫荧光及CD309、CD34流式细胞学进行鉴定。用缺氧Buffer加低氧舱的方法低氧处理P5代HDMECS。实验分为四组,Con组不做任何处理、H8组低氧8小时组,H8R12组低氧8小时复氧12小时组、H8R24组低氧8小时复氧24小时组。TUNEL(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)染色法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western Blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:联合法分离的细胞,经过2次CD31磁珠分选后,可见细胞短梭形,呈铺路石样。细胞传至P5,Ⅷ因子免疫荧光染色阳性率为(95±2.61)%。流式细胞仪检测CD309阳性率为(95.4±1.34)%;CD34阳性率为(42.5±3.23)%。TUNEL染色、Western Blot结果显示:H8组的细胞凋亡率和活化的Caspase-3表达高于Con组(P<0.05),H8R12组、H8R24组细胞凋亡率和活化的Caspase-3表达高于H8组(P<0.05)。结论:本研究采用磁珠分选的办法成功培养了HDMECs,并且建立了HDMECs低氧/复氧模型,为临床研究游离皮瓣缺血再灌注损伤机制提供实验基础。