新型冠状病毒肺炎核酸检测中的假阴性分析及对策

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的疫情引发了全世界的关注。早期诊断对COVID-19的治疗、患者预后尤为关键。临床检验中发现早期的COVID-19患者核酸检测多次呈假阴性,特别是不同时间多次阴性结果后转为阳性,给临床诊断和疾病控制带来极大困扰。该文立足于疫情的早日防控,从临床、检验的不同视角,从标本采集、检测方法、产品稳定性等多方面剖析产生假阴性的可能原因,并且结合临床实践和检测技术,从整合特异性实验室指标,规范标本采集方式和过程,严格检测试剂的监管和审批等方面提出行之有效的方案,旨在为切实降低检测假阴性或假阳性率提供临床参考,为COVID-19临床准确诊断及疫情防控提供有力支撑。     

表面等离子体免疫传感器同步定量尿液中多种微量蛋白的研究

目的探讨并建立表面等离子体免疫传感器芯片同步定量尿液中多种微量蛋白的方法。方法采用EDC/NHS方法将微量白蛋白(MA)、α-1微球蛋白(A1M)、β-2微球蛋白(B2M)、尿IgG的单克隆抗体固定于免疫传感器芯片之上,并用表面等离子体共振传感器(surface plasmon resonance,SPR)检测样本中微量蛋白的含量。利用4种微量蛋白的标准血清建立标准曲线,然后对其进行灵敏度、特异性等指标的方法学评价。以免疫散射比浊方法为参考方法,检测125例临床患者24 h尿液样本的微量蛋白浓度,比较2种方法检测相同样本时的结果差异。结果该表面等离子体共振免疫传感器芯片具有良好的操作性能和检测特异性。其标准曲线的R2均在0.98以上。其检测灵敏度分别是A1M为5μg/L,B2M为7.3μg/L,MA为11.5μg/L,IgG为22μg/L。所有4项指标可在20 min之内同步完成。与微量蛋白检测的经典方法免疫散射比浊法相比,两者的相关性和一致性较高。结论表面等离子体免疫传感器芯片可实现尿液中多种微量蛋白的快速、准确、同步定量。     

核酸探针长度对量子点微生物传感器的影响

目的探讨并明确量子点核酸传感器检测微生物核酸样本时探针长度对杂交效率和检测结果的影响。方法首先合成金黄色葡萄球菌16S rDNA探针,然后在其5′端添加不同长度的重复碱基序列,分别合成5条长度不同的以胸腺嘧啶结尾的探针;采用巯基法固定金黄色葡萄球菌16S rDNA探针于石英晶体微阵列上,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品频率漂移量以判断不同核酸长度时的杂交效率,并用荧光显微镜观察形成不同双链复合物的荧光强度和荧光效率,以此判断不同碱基序列长度探针对荧光效率和杂交效率的影响,并运用SPSS软件对数据进行统计分析。结果对于普通的短链核酸杂交反应,随着探针长度增加,杂交效率呈现依次递增的趋势,当离子强度为40mmol/L时,杂交效率和荧光强度增加最快,其后再增加探针长度,杂交效率增加速度变缓。结论探针长度是影响杂交效率的主要原因之一,通过增加探针长度可以提高杂交效率和荧光强度,但同时也会增加二聚体产生概率,故应根据实际需要设计长度适合的探针。     

检验医学临床教学中综合能力培养的探讨和实践

<正>新时期检验医学在现代医学中的作用越来越明显,与医院的医疗、科研和教学水平密切相关。检验医学的快速发展,尤其是自动化程度的不断提高和床旁快速诊断技术的应用,导致临床实验室对检验医学人才的需求也在发生巨大的变化,具体表现为科室人员素质的提高和人员数量的减少[1]。尤其随着社会的发展,患者对检验医师的需求从最初的"只做检查项目,     

量子点荧光双杂交技术检测铜绿假单胞菌的实验研究

目的建立量子点荧光双杂交核酸检测平台,并实现铜绿假单胞菌(PAE)的快速、准确检测。方法采用巯基法固定铜绿假单胞菌的16S rDNA探针于石英晶体金膜上,加入检测样本进行首次杂交,清洗后加入量子点标记的第二探针进行第2次杂交,最终通过荧光强度以判断PAE是否存在。结果该量子点双杂交检测平台具有良好的性噪比,其荧光强度与扩增产物的稀释倍数成线性负相关,当PAE扩增产物的稀释倍数在<10 000倍时具有良好的线性曲线;特异性实验表明,该方法可以将PAE与同源的多种细菌相区分,证明了其高度特异性,方法学比较实验证明,双探针杂交方法的灵敏度和特异性均>90.0%,已能初步满足临床检测需要。结论该量子点荧光双杂交核酸检测平台,可有效将PAE与同源的多种细菌相区分,为临床微生物的快速检测提供了一种新的技术方案。     

量子点微生物传感器核酸检测中离子强度的优化

目的探讨并建立量子点核酸传感器检测微生物样本时缓冲液中最佳阳离子价态及最优离子强度。方法采用巯基法固定金黄色葡萄球菌16S rDNA探针于石英晶体微阵列上,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品频率漂移量以确定最佳离子强度,并用荧光显微镜观察不同反应体系中杂交完成后的荧光强度和荧光效率,以此判断单价和二价阳离子对荧光效率和杂交效率的影响,并运用SPSS软件对数据进行统计分析。结果该量子点传感器检测平台具有良好的性噪比;对于普通的短链核酸杂交反应,随着离子强度增加,杂交效率呈现先增后减的趋势,当离子强度为20mmol/L时,杂交效率达到峰值,荧光强度约为0.95AU;对于MgCl2缓冲液,当离子强度为15mmol/L时,杂交效率达到最大,约为0.82AU;对于CuCl2缓冲液,离子强度为15mmol/L时,杂交效率达到峰值,约为0.72AU。结论单价阳离子NaCl缓冲液是基于荧光检测的微生物传感器的首选,其最佳离子强度为20mmol/L,缓冲液体系中应尽量避免添加二价阳离子。     

量子点的光学特征及其在检验医学中的应用

量子点是一种新型的半导体荧光纳米材料。其发射光谱随着粒径大小的变化而变化，量子点的发射峰窄而对称，重叠小，并且所发荧光强度是普通无机染料的数十至百倍，无明显漂白现象等优点使得其自从发现伊始至今即在检验医学领域发挥了极其重要的作用。现就其光学特性及检验医学中的应用作一综述。