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目的：探讨RAS蛋白家族在维持T-ALL细胞株体外生长中的功能。方法：纯化T-ALL细胞株DNA,利用PCR法扩增3个RAS基因（KRAS、NRAS、HRAS）的编码区。经T-A克隆后,Sanger法对KRAS、NRAS、HRAS基因编码区测序。将siRNA克隆到pSEH-361载体,在HEK-293T细胞中与pAMPHO和pVSVG一起包装成逆转录病毒,随后感染T-ALL细胞。qRT-PCR和Western blot检测基因表达情况。利用Annexin V-PE/7-AAD染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Hoechst 33258染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞周期分布情况。经抗体染色,荧光显微镜观察cleaved-Caspase 3蛋白的表达。结果：在T-ALL细胞株中,除Loucy和P12-ICH细胞KRAS基因发生c. 6187G> A(p. KRASG12D)突变,其余RAS基因均未发现错义突变。除PEER细胞（IC50=47.916μmol/L）外,泛RAS抑制剂Compound 3144对其它T-ALL细胞均有一定杀伤作用。同样,除PEER... 相似文献
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目的:建立流式细胞术-荧光原位杂交联用技术(Flow-FISH),探讨Flow-FISH技术在临床EB病毒(Epstein-Barr virus)感染性疾病中感染细胞亚型鉴定的临床前诊断价值。方法:通过Ficoll-paque离心分离法收集重庆医科大学附属儿童医院招募的9例EBV感染患者的外周血标本中单个核细胞;通过qRT-PCR检测细胞EBER1及EBER2表达;通过荧光标记抗体对细胞表面标志物进行检测,经固定破膜剂对标记后细胞进行固定及破膜处理后与FISH探针37℃条件下过夜杂交,通过流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞状态、表面抗原染色以及FISH探针与靶mRNA的结合。结果:优化固定破膜剂配方,建立0.2%Tween-20 4℃破膜15 min为破膜条件,此条件对细胞状态及表面抗原影响小,不干扰流式细胞术对细胞亚群判定。优化杂交液配方,探明20%甲酰胺和7%硫酸葡聚糖在37℃过夜条件下杂交为最优杂交条件,此条件下细胞形态及流式分群好,探针杂交效果佳。通过使用Flow-FISH技术能特异性区分各EBV+以及EBV-淋巴细胞系。通过Flow-F... 相似文献
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