运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

目的运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株。方法构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株。通过RT-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclinB1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线。结果在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclinD1表达亦明显下降(P<0.05)。结论pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长。     

过氧化物酶染色阴性的急性非淋巴细胞白血病免疫诊断特点及其临…

作者报道一组急性白血病过氧化物酶染色阴性而无淋系相关抗原表达，但与一种以上髓系相关ＭｏＡｂ反应的ＰＯＸ阴性急性非淋巴细胞白血病患者的免疫学特征。此组患者较同期化疗的急性淋巴细胞白血病、ＰＯＸ（＋）ＡＮＬＬ反应差（Ｐ＜０．０１），病程短（Ｐ＜０．０２），提示ＰＯＸ（－）ＡＮＬＬ应按难治性急性白血病处理。     

日本血吸虫分泌蛋白基因Sjsp16的克隆与表达

目的　克隆和表达日本血吸虫新的分泌蛋白Sjsp16的编码基因。　 方法　根据EST测序的结果设计引物 ,从含有Sjsp16基因的cDNA克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 pET2 8中表达 ,然后用生物信息学的方法对蛋白结构功能进行预测。　结果　成功克隆和表达了日本血吸虫分泌蛋白基因Sjsp16,生物信息学分析提示该基因编码蛋白的N端带有一个信号肽序列 ,是一个分泌蛋白 ,含有一个ML功能结构域 ,具有 4种潜在的功能作用位点 ,即 1个N 糖基化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 3个肉豆蔻酰化位点。　结论　Sjsp16基因编码蛋白为具有脂质识别和结合功能的分泌蛋白 ,可能为潜在的血吸虫病药物靶点或疫苗候选分子。     

表遗传学与肿瘤

通常认为遗传学上的基因突变是肿瘤发病机制中的关键事件,尤其是抑癌基因的体细胞突变与肿瘤的发生有着密切的关系。但是,近年来随着对肿瘤认识的深入,人们发现DNA序列以外的调控机制异常在肿瘤的发生、发展过程中更为普遍,也更为重要。这种调控机制被称为表观遗传学（Epigenetics）,研究没有DNA序列变化的,可遗传的表达改变。例如基因启动子区CpG岛甲基化模式的异常与许多肿瘤的发生有着密切的关系。除了DNA甲基化调控形式外,表观遗传学还包括基因组印迹、染色质组蛋白修饰、隔离蛋白以及非编码RNA（包括microRNA）等DNA序列本身以外的各种调控方式。本文将就表观遗传学调控机制与肿瘤发生的关系作一简要综述。     

Mep1A基因在肝癌中的表达及其功能研究

目的 研究甲基多巴α亚基(Mep1A)基因在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞生长的影响,为了解肝癌发病的分子机制奠定理论基础.方法 利用半定量PCR方法和real-time PCR方法检测Mep1A基因在人正常组织和47例癌与癌旁组织中的表达情况,运用RNA干扰和过表达技术观察分析肝癌细胞的克隆形成,通过流式细胞术检测这些细胞周期的变化.结果 在47例癌与癌旁组织中,半定量PCR结果显示Mep1A在33.3%(10/30)的癌组织中高表达,real-time PCR结果显示Mep1A在51.1%(23/45)的癌组织中表达高于癌旁组织2倍以上.在Huh7细胞株中干扰Mep1A基因后,细胞克隆形成能力降低,G2/M期明显增多.过表达Mep1A基因后,在Focus细胞株中细胞克隆形成能力提高,G1/S期细胞增多.结论 Mep1A基因在维持肝癌细胞恶性性状方面可能起到重要的作用,可能是一个新的肿瘤相关基因,对其深入研究可能会发现肝癌发病的新机制,并作为肝癌治疗的分子标记物和潜在的靶点.     

siRNA封闭IGF1R增加人肝癌细胞对丝裂霉素敏感性的研究

目的:探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor receptor,IGF1R)的短发夹环RNA质粒(pSUPER-siRNA-IGF1R)增加人肝癌细胞株SMMC7721对丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用及可能的机制。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段并构建pSUPER-siRNA-IGF1R表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株。丝裂霉素处理后,通过CCK-8法检测肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,Western印迹检测凋亡相关基因的变化。结果:丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用明显增强,凋亡指数明显升高(P<0.05)。实验组野生型p53蛋白,bax蛋白表达比对照组明显上调,而bcl-2蛋白表达明显下降。结论:构建的pSUPER-siRNA-IGF1R具有RNA干扰作用,并能增强丝裂霉素诱导的细胞凋亡。     

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患者及其家系UGT1A1基因突变的分析

目的:分析1例遗传性高非结合胆红素血症Crigler—Najjar综合征Ⅱ型(CN—Ⅱ)患者及其家系尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)的突变特征,研究其遗传特点和诊断。方法:采用肝功能试验、低热卡试验、肝脏病理组织学和苯巴比妥诱导试验治疗等方法确诊1例CN—Ⅱ,追踪并抽取该先证者及其家系11例成员的外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增UGT1A1基因第1～5外显子基因片段,用直接DNA测序法筛查UGT1A1基因突变。结果:该先证者UGT1A1基因的第5外显子第486密码子发生了T→G碱基的错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者为该突变的纯合子,其父母、妹妹及三位祖父为该突变的杂合子。其余4例未患病成员均未发现UGT1A1基因突变。结论:Tyr486Asp突变是本例CN—Ⅱ家系的致病性基因,该突变不影响UGT1A1基因启动子区苯巴比妥酸的应答元件,其遗传规律符合常染色体隐性遗传。经查询人类基因文库证实,本例CN—Ⅱ基因突变类型在我国是首例,国外尚未见到相同的家系分析报告。     

白细胞介素1β转化酶家庭与细胞凋亡

白细胞介素1β转化酶(interleukin-1β-converting enzyme,ICE)家族在细胞凋亡过程中起关键作用,迄今已发现5个成员:ICE、CPP32、Nedd-2/Ich-1、Ich-2/ICErel Ⅱ和ICErel Ⅲ,它们的高表达能引起细胞凋亡,同时也受一些物质的调控。本文即对ICE家族及与细胞凋亡关系作一综述,以阐明ICE家族作用机制。