射频肝损伤血清诱导兔骨髓干细胞向肝细胞样分化

目的:观察射频肝损伤血清能否诱导自体骨髓间充质下细胞(MSCs)向肝样细胞分化,以寻求一种自体肝组织的修复方法.方法: 射频治疗灭活40%兔肝脏组织,于36 h后取全血及骨髓.用体外细胞培养技术从骨髓血中分离、纯化兔骨髓MSCs后,于自体射频肝损伤血清中培养,流式细胞仪测定细胞周期并观察其增殖及生长特征,免疫荧光法鉴定细胞性质及功能.结果: 原代、传代培养及流式细胞仪结果显示,兔骨髓MSCs具有活跃的增殖能力,并在射频肝损伤血清诱导下向肝样细胞分化.2 wk后免疫荧光染色可见分化后细胞表达肝细胞标志物CK18和白蛋白.结论: 射频肝损伤兔血清可促进自体骨髓MSCs增殖并向肝样细胞诱导分化.在射频治疗同时行肝样细胞移植修复肝损伤具有可能性.     

荷瘤兔骨髓间充质干细胞在射频消融自体血清诱导下向肝样细胞的分化

目的:鉴于目前对体外培养诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的条件掌握尚不成熟,尤其是无血清培养.实验拟将临床常用微创治疗同细胞移植结合,观察荷瘤兔骨髓间充质干细胞在射频消融兔肝肿瘤自体血清诱导下向肝样细胞的分化,寻求一种自体肝组织的修复方法.方法:实验于2006-09/2007-09在西安交通大学医学院中心实验室完成.实验室为教育部基因与环境研究重点实验室.[1]实验材料:健康新西兰大白兔,二三月龄,雌雄不限,体质量1.5～2.0kg,由西安交通大学医学院动物试验中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.荷瘤种兔包块由西安交通大学第一医院介入中心刘亚民教授馈赠.[2]实验方法:取荷瘤种兔瘤组织块,在兔在肝脏右叶做一直径为2~3mm的隧道,将肿瘤组织块植入隧道底部制备肝肿瘤动物模型.射频消融治疗灭活荷瘤兔肝脏肿瘤及边缘1cm正常肝脏组织,于72h后取全血及骨髓.应用体外细胞培养技术自骨髓血中分离、纯化兔骨髓间充质干细胞后,取P2细胞在4种不同培养基培育:对照组:含体积分数为0.1胎牛血清的低糖DMEM培养液;射频兔肝肿瘤治疗血清组:无血清低糖DMEM培养液加入射频兔肝肿瘤治疗血清;射频肝肿瘤治疗血清热灭活组:无血清低糖DMEM培养液加入射频肝肿瘤治疗灭活血清;生长因子组:含0.1胎牛血清的低糖DMEM培养液加入肝细胞生长因子及表皮细胞生长因子.[3]实验评估:倒置显微镜下观查细胞形态变化,流式细胞仪测定细胞周期并观察其增殖及生长特征,免疫荧光法检测肝细胞标志物白蛋白及CK18表达,鉴定细胞性质及功能.结果:[1]原代、传代培养及流式细胞仪结果显示,射频肝肿瘤治疗兔血清及肝细胞生长因子、表皮生长因子对兔骨髓间充质干细胞的诱导能明显促进细胞的增殖,S G2 M期细胞百分数明显增高,2周后免疫荧光染色可见分化细胞表达肝细胞标志物CK18和白蛋白.[2]射频肝肿瘤治疗兔灭活血清及胎牛血清能使兔骨髓间充质干细胞生长,但不如射频肝肿瘤治疗兔血清及肝细胞生长因子、皮细胞生长因子促进细胞增殖明显(P<0.01),传代培养2周,细胞形态未见明显变化,未见肝细胞标志物CK18和白蛋白表达.结论:肿瘤射频消融兔血清可激活、诱导自体骨髓间充质干细胞增殖并向肝样细胞分化,使射频消融肿瘤治疗的同时行肝样细胞移植修复肝损伤成为可能.     

家族性高胆固醇血症合并极高危ASCVD 1例

本研究报道了1例29岁男性家族性高胆固醇血症(FH)患者,血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)异常升高、合并黄色瘤且早发冠心病。遗传学分析显示该患者发生了低密度脂蛋白受体(LDLR)编码基因的复合杂合突变,属一种极其罕见的基因突变类型,该变异导致LDLR自身表达、摄取及结合LDL-C功能受损,使前蛋白转化酶枯草溶菌素9型(PCSK9)抑制剂效果不佳。基于遗传学诊断,个体化的给予患者PCSK9抑制剂、最大可耐受剂量他汀和依折麦布,并成功接受了冠状动脉介入治疗。     

葡萄糖-胰岛素-钾极化液对犬重度心肌缺血/再灌注后心律失常和心电图的影响

目的探讨葡萄糖-胰岛素-钾合剂（GIK）对犬重度心肌缺血/再灌注（MI/R）后心律失常和心电图的影响。方法制备犬重度MI/R模型。再灌注前5min静脉分别输注生理盐水、GIK或GK（葡萄糖-钾液）。观察动物心电、血糖等的变化。结果犬重度MI/R引起心律失常,包括室性早搏、室速和室颤。再灌注期间静脉输注生理盐水、GIK或GK,未观察到室性心律失常发生率和严重程度有显著差异。但GIK可缩短再灌注期间心电图QRS波群时间。其中,再灌注4hQRS波群时间显著缩短,由对照组0.077±0.006s缩短至GIK组0.058±0.003s（n=6,P<0.01）。GK组与对照组比较无显著差异（n=6,P>0.05）。结论GIK对犬重度MI/R引起的室性心律失常无显著改善作用,但可缩短缺血/再灌注心脏的QRS波群时间,提示胰岛素可能影响MI/R心室除极。     

葡萄糖-胰岛素钾液对心肌缺血/再灌注犬血液流变学和血糖的影响

目的:观察近年推荐使用的大剂量葡萄糖胰岛素钾液（GIK）对急性心肌缺血/再灌注（MI/R）犬血液流变学特性的影响。方法:定量狭窄冠状动脉左前降支（血流量降低80%）制作犬心肌缺血/再灌注模型。将24只杂种犬随机分为GIK组、葡萄糖钾液（GK）组及生理盐水对照组（n=8）。再灌注同时分别静脉输注GIK、GK、生理盐水（2ml·h-1·kg-1）。在狭窄冠脉前和再灌注即刻及再灌注后1h、2h、4h抽取冠状静脉窦血,测定血液流变学和血糖变化。结果:缺血50min时各组犬血细胞比容、全血高切粘度、全血低切粘度较缺血前均有不同程度增高（P<0.05）。GIK组再灌注后各时间点血糖和血液流变学指标与缺血前及生理盐水对照组相比均无显著差异。GK组再灌注后2h和4h时血细胞比容（HCT）较生理盐水对照组增高（P<0.05）。再灌注后GIK组与生理盐水组血糖无明显升高,GK组再灌注后2h和4h血糖较对照组分别增加76%和92%（P<0.01）。结论:急性心肌缺血可致血液流变学特性显著改变,主要表现为HCT、ηbh、ηbl增高。本研究所用GIK的剂量不会导致血糖明显变化,且对MI/R过程中犬血液流变学无明显影响;本研究结果还提示,单独输注高糖可能对急性心肌缺血患者不利。     

计量认证在医学实验室中的应用

医学实验室作为检验人体生理数据的部门,在疾病的诊疗过程中起着举足轻重的作用,对表现生理体征数据计量的是否准确,直接影响到疾病的诊疗。因此,加强对医学实验室的计量管理是非常必要     

葡萄糖-胰岛素-钾液对缺血/再灌注心肌的保护作用

目的:观察极化液（葡萄糖-胰岛素-钾液,G IK）对急性心肌缺血/再灌注（M I/R）犬心脏功能、冠脉血流量及心肌损伤的影响,分析胰岛素在G IK上述效应中的作用。方法:制备犬M I/R模型,心肌定量缺血（左前降支血流量降低80%）50 m in,再灌注4 h。24只杂种犬随机分为G IK、葡萄糖-钾液（GK）和盐水对照组（n=8/组）,再灌注前5m in输注G IK、GK、生理盐水。观察冠脉血流量及血流动力学指标;检测不同时间血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性;再灌注4 h后测量并计算心肌梗死范围。结果:与盐水对照组相比,G IK明显增加左前降支冠脉血流量（CBFLAD）,改善再灌注后左室收缩及舒张功能,降低血清CK、LDH,减少心肌梗死范围,而GK无上述作用。结论:再灌注时输注G IK可促进再灌注心脏功能恢复及减轻心肌损伤,该作用可能与G IK增加冠脉血流量有关;胰岛素是G IK上述作用的关键成分。     

兔骨髓来源肝细胞修复射频消融肝损伤

目的:探讨骨髓源性肝细胞(BMDH)能否在一定程度上改善肝功能,寻求一种新的肝损伤修复细胞来源和移植途径.方法:新西兰大白兔36只分为3组:假手术组(A),RF手术组(B),RF手术+BMDH移植组(C),每组12只.GFP标记BMDH,植入RF肝损伤再生模型损伤区,手术前、手术后第3,5,7,14日取血测定肝功能,光镜和共聚焦显微镜观测1,2,3 wk绿色荧光表达及分布.结果:BMDH可向成骨细胞分化,能表达白蛋白、CK18,具有成熟肝细胞的部分功能.C组较B组肝功能恢复较快,术后3 wk仍可见绿色荧光表达.结论:骨髓源性肝细胞可修复RF治疗后肝功能损伤.     

极化液给予时机对缺血/再灌注犬心脏功能及心肌损伤的影响

目的:探讨不同时间开始给予极化液（葡萄糖-胰岛素-钾液,G IK）对犬心肌缺血/再灌注（M I/R）后心脏功能及心肌细胞损伤的影响。方法:制备犬M I/R模型,心肌定量缺血（左前降支血流量降低80%）50 m in,再灌注4 h。分别于:①再灌注前30 m in（再灌注前）、②再灌注即刻（再灌注时）、③再灌注后1 h（再灌注后）给予G IK。观察对动脉血压、心率、左室压的影响及测定心大静脉血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性,再灌注结束后检测心肌梗死率或细胞凋亡指数。结果:与再灌注后组相比,再灌注前组和再灌注时组可明显改善再灌注后左室收缩及舒张功能,降低血清CK、LDH活性,减少心肌梗死范围[分别为（5.9±1.1）%和（5.2±0.8）%vs（9.1±1.2）%,均P<0.01]、抑制心肌细胞凋亡的发生[（4.6±0.9）%和（3.7±1.1）%vs（8.9±2.3）%,均P<0.05]。结论:再灌注早期给予G IK可降低M I/R引起的心肌细胞损伤,促进再灌注后心脏功能的恢复,在再灌注后1 h给予G IK对心脏的上述保护作用则明显减弱。