ALEX1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定

目的:探讨构建Arm重复蛋白1(ALEX1)基因过表达慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞系SK-BR3后观察ALEX1的表达,为研究ALEX1在乳腺癌中的作用及机制奠定基础。方法:利用DNA重组技术将ALEX1基因插入到慢病毒穿梭质粒LV5中,获得重组慢病毒质粒V-ALEX1,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,用Lipofectamine 2000将重组质粒和慢病毒包装质粒系统(p Gag/Pol、pRev、p VSV-G)转染293T细胞中包装成重组慢病毒颗粒,经流式细胞术测定重组慢病毒滴度。将成功包装的ALEX1过表达慢病毒载体(LV5-ALEX1)和阴性对照载体(LV5-NC),感染SK-BR3细胞(MOI为10)48~72 h,Realtime PCR和Western blot法分析ALEX1表达情况。结果:酶切鉴定结果显示:产生约1 500 bp的片段,片段大小与ALEX1基因cDNA大小一致。DNA测序比对说明测序结果与预期ALEX1基因序列完全一致,证实ALEX1基因正确插入载体中,成功构建ALEX1基因过表达载体。经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为4.25×10~8TU/ml的重组慢病毒LV5-ALEX1。Realtime PCR和western blot结果显示:与感染LV5-NC的SK-BR3细胞相比,LV5-ALEX1感染可明显增加ALEX1 mRNA及蛋白的表达水平。结论:成功构建ALEX1基因过表达慢病毒载体,ALEX1基因过表达慢病毒能够感染乳腺癌SK-BR3细胞,可使外源基因获得稳定过表达。     

检验申请界面中的质量探讨

目的探讨该院经历的4种检验申请界面对检验科分析前质量的影响。方法分别采用手写、纸质勾选、电脑检索、个性化组合作为的医生申请界面,监测在各种申请界面下检验结果阳性率,标本采集合格率及医生满意度3个指标,分析医生对检验项目的选择与申请、医生对检验标本的采集、医生对实验室的服务的认可等3个方面探讨申请界面对分析前质量的影响。结果手写化验单的医生满意度84.9%,检验结果阳性率为45.0%,医生采集标本合格率90.4%;纸质勾选开单界面的医生满意度82.9%,检验结果阳性率为47.9%,医生采集标本合格率89.2%;以拼音电脑检索为申请界面的医生满意度80.3%,检验结果阳性率为53.9%,医生采集标本合格率88.8%;以个性化组合菜单为单界面的医生满意度92.5%,检验结果阳性率为53.9%,医生采集标本合格率97.2%。结论个性化的检验申请界面有助于提高检验前分析质量。     

非配套商品定量试剂的分析性能验证

目的用行业标准验证在封闭系统中应用非配套的商品定量试剂的分析性能。方法根据《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》要求,对更换的非配套商品定量试剂盒进行精密度、准确度、线性范围等3个性能进行验证。结果总蛋白、清蛋白、糖、尿素、肌酐、钾离子、钠离子、氯离子、总钙的不精密度均小于《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》中规定指标的1/3;偏倚均小于《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》中规定指标的1/2。线性范围能满足临床需求。结论非配套试剂在封闭系统的分析性能满足行业标准。     

尿液收集成套产品的研制与应用分析

目的研制一种一次性成套尿液收集器,将尿液收集、密封储运和直接上机检验进行一体化设计,解决目前国内临床尿液收集、运送、上机等方面的问题。方法参加试验的患者均分别使用3种方式进行尿液收集,N1方式:使用软质塑料尿杯接尿液,由患者或家属倒尿液进试管中;N2方式:使用硬质杯尿杯接尿,由检验科人员倒入尿液试管中;N3方式:使用新研制的成套产品。通过对3家医院参与体验的患者进行问卷调查,收集患者满意度调查与分析,进行院感监测、尿液标本合格率等方面进行比较。结果 3家医院240例患者使用后,满意度调查显示N3方式满意度最高,为96.7%,远远高于其他两组;N3方式标本不合格率最低,为2.08%,远低于其他两组。对检验科体液操作台细菌培养结果进行检测,N3组菌落数[(0.97±0.40)cfu/cm2]低于N1组[(3.36±0.46)cfu/cm2],N3组低于N2组[(3.22±0.39)cfu/cm2],差异有统计学意义(P0.05)。对尿沉渣仪样本装载平台细菌培养结果进行检测,结果显示,N3组菌落数[(1.04±0.39)cfu/cm2]低于N1组[(4.42±1.65)cfu/cm2],N3组低于N2组[(4.00±1.78)cfu/cm2],差异有统计学意义(P0.05)。结论该研制项目采取一体化设计的一次性成套尿液收集器要求明确、操作简单、收集方便、自动回弹密封、送检规范、标本唯一、适合不同机型、可直接上机检测等,产品有很好的推广价值。