弓形虫微线蛋白16抗原表位区的预测及酵母表面展示

目的应用生物信息学软件预测弓形虫微线蛋白16(TgMIC16)B/T细胞抗原表位并对抗原表位区进行酿酒酵母菌的表面展示。方法利用DNAStar和IEDB对TgMIC16进行B细胞抗原表位预测,利用SYFPEITHI和BIMAS预测其T细胞抗原表位。参照预测结果,采用pCTCON2/EBY100展示系统对抗原表位区进行酵母表面展示,利用间接免疫荧光(IFA)和流式细胞仪检测表达情况。结果 TgMIC16存在潜在的B/T细胞抗原表位且集中在aa343-625区域;该抗原表位区成功展示到酵母细胞表面,最佳诱导时间为24~36h。结论为下一步酵母载体疫苗的研制及疗效评价奠定基础。     

脉冲氙光灯对传递窗消毒效果的研究

摘要 目的 研究脉冲氙光灯对传递窗及舱内物体表面消毒的效果。方法 采用载体定量杀菌试验方法,对一种脉冲氙光消毒传递窗舱内物体表面的消毒效果进行观察。结果 脉冲氙光消毒传递窗消毒作用1 min、3 min、5min和10 min,对受试金属片及纸片两种载体表面金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及大肠杆菌的杀灭对数值均>3,符合2002年版《消毒技术规范》要求;而脉冲氙光消毒传递窗消毒作用1 min、3 min、5 min和10 min,对受试金属片和纸片载体表面枯草芽孢杆菌黑色变种和白色念珠菌的杀灭对数值均<3,但杀灭率均在90%以上。结论 脉冲氙光消毒传递窗对舱内物体表面细菌繁殖体具有杀灭效果,对舱内物体表面枯草芽孢杆菌黑色变种和白色念珠菌的也具有一定的杀菌作用;且该消毒方式作用时间较短,可以实现对舱内多种物体表面的快速消毒。     

弓形虫TgMIC16多克隆抗体制备 纯化 及其在亚细胞定位中的应用

目的 制备并纯化弓形虫微线蛋白16（TgMIC16）兔源多克隆抗体,并利用制备的多克隆抗体对该蛋白进行亚细胞定位。方法 利用原核表达、纯化的TgMIC16重组蛋白与等体积弗氏佐剂混合,背部皮下、多点注射免疫新西兰大白兔,于第3次加强免疫后的第14天收集兔血清,Protein A亲和纯化柱纯化,用ELISA和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测抗体效价和抗体特异性。用弓形虫RH株速殖子感染人包皮成纤维（HFF）细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,采用间接免疫荧光（IFA）检测TgMIC16 在感染细胞中的定位。结果 间接ELISA 结果显示,制备的TgMIC16多克隆抗体滴度为1∶512 000;Western blotting 结果显示,TgMIC16抗体特异性良好;IFA结果显示,TgMIC16定位在弓形虫微线体。结论 本研究制备并纯化了抗弓形虫TgMIC16兔源多克隆抗体,并成功应用于TgMIC16在弓形虫微线体的免疫荧光定位。