SEN病毒D亚型ORF1-C端基因的克隆、表达和鉴定

目的:获得SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,并进行表达,为进一步研究及诊断、治疗应用奠定基础.方法:用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-DORF1C端基因,测序验证后,构建了pQE30-SENV-D重组表达质粒,并经过转化E.coli M15,IPTG诱导表达,Western blot分析表达结果.结果:获得了正确序列的SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,表达出Mr约为38×103的蛋白.表达蛋白能与患者血清中相应的抗体结合,发生抗原抗体反应.结论:成功获得并表达了SENV-D-ORF1-C端蛋白,并经Western blot印迹法证实能与阳性血清中的抗体发生抗原抗体反应,有可能用于检测SENV-D抗体.为今后进一步研究有助于疫情监测及早期发现感染者的抗体奠定了坚实的基础.     

突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析

目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

我国不同肝炎患者及献血员中SENV-D/H感染流行病学调查

目的了解SEN病毒(SENV)D亚型和H亚型在我国不同肝炎患者和献血员中的感染情况。方法采用巢式聚合酶链反应对收集的270例健康献血者和484例各型肝炎患者(包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者)进行SENV-D亚型和H亚型DNA检测。结果无偿献血者中SENV-D的感染率为25.9%,SENV-H为24.4%;急性甲肝患者中SENV-D的感染率为14.5%,SENV-H为32.7%;慢性乙肝患者中SENV-D的感染率为46%,SENV-H为45.2%;在丙肝患者中SENV-D和SENV-H感染率均为65%;在非甲-非戊型肝炎患者中SENV-D的感染率为51.2%,SENV-H为43.9%。结论SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式,但并不是肝病发生的原因。     

天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达

目的：构建天花粉蛋白（TCS）突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法：借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇（YFF81-83）并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot鉴定。最后用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果：成功构建了TCS突变体（TCSYFF81-83ACS）,并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论：TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。     

肝炎患者及献血员中SENV—D／H感染情况分析

目的 了解SEN病毒D亚型和H亚型在不同肝炎患者和献血员中的感染情况.方法 采用巢式聚合酶链反应检测献血员及甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者血清SENV-D、SENV-H亚型DNA.结果 无偿献血员SENV-D感染率为25.9%,SENV-H为24.4%;急性甲肝患者SENV-D感染率为14.5%,SENV-H为32.7%;慢性乙肝患者SENV-D感染率为46.0%,SENV-H为45.2%;丙肝患者SENV-D和SENV-H感染率均为65.0%;非甲非戊型肝炎患者SENV-D感染率为51.2%,SENV-H为43.9%.上述人员SENV-D/H感染率比较,差异均有显著性(P<0.01).结论 乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者中SENV-D/H的感染率高于无偿献血员和甲肝患者.     

Experimental study on therapy of ultraviolet blood irradiation and oxygenation in acute soman intoxication in rabbits

Objective： To study the therapy effect of ultraviolet blood irradiation and oxygenation （UBIO） on blood AChe activity and lung injury due to acute soman intoxication in rabbits. Methods ：Forty rabbits were randomly divided into 4 groups： normal control group, intoxication group, routine therapy group and UBIO therapy group. Blood AChe activity and artery blood gas were analyzed 2 h after intoxication. ACP and AKP activities in BALF were determined respectively. Results： Blood AChe activity in intoxication group was lower than that in normal control group （P〈0.05）. BALF ACP and AKP activities in intoxication group were higher than that in normal control group. Blood AChe activities in UBIO therapy group increased and were higher than that in intoxication and routine therapy groups. Compared with intoxication group, BALF ACP and AKP activities were decreased （P〈0. 05） in UBIO therapy group, while artery blood pH, PaO2 and SaO2 increased （P〈0. 05）. Conclusion.. UBIO therapy can elevate blood AChe activity and alleviate lung injury induced by soman intoxication. So it may be a new way to treat acute soman intoxication.     

低剂量γ射线辐照外周血单个核细胞对细胞因子表达的影响

目的:探讨低剂量辐射对外周血单个核细胞细胞因子表达的刺激效应.方法:人外周血单个核细胞采用1 Gyγ射线照射,吸收剂量率为17 Gy/min,并在培养过程中不同时间采用ELISA方法检测上清液中IL-2、TNFα及IFN-γ含量.结果:经γ射线照射24 h后培养上清中IL-2、TNFα及IFN-γ含量明显升高,与对照组比较有明显差异(P<0.05),并随培养时间延长,各细胞因子含量会进一步升高.结论:低剂量辐射对外周血单个核细胞中IL-2、TNFα及IFN-γ表达具有刺激效应.     

煤烟污染的玉米危害性实验研究之一

早在1775年英国医生Pott提出,扫烟筒工人容易患阴囊癌,后来探明其原因与长期持续地接触煤烟有关。此后在煤烟、焦油和各种发动机废气中发现了许多致癌物质,所以煤烟废气的污染引起人们的注意,先后有人进行了各种化学分析和动物实验,但是用煤烟污染的玉米长期喂养大鼠,观察其危害的实验尚未见报导。黑龙江省无霜期短,秋粮水份高,尤其玉米可高达35％,故入库前需要经过烘干降水。我省目前绝大部份是沿用过去遗留下来的无烟煤直接烘干法,即将无烟煤燃烧产生的热烟气直接加热玉米半小时到数小时,这种煤烟污染的玉米能否对生物体产生危     

人类血小板抗原基因分型参考品的制备及鉴定

目的构建22型人类血小板抗原(HPA)基因分型参考品(质控DNA),并对其进行测序鉴定。方法提取人血液基因组DNA,以其为模板,通过特异性引物扩增出各HPA(1a~16a)基因片段,胶回收后克隆至pUCm-T载体,随后转化E.coliDH5α,提取质粒酶切鉴定并测序;再以构建成功的HPA-1a~16a质粒为模板,通过定点突变获得HPA-1b~16bw基因片段,经克隆、转化后,作酶切鉴定并测序。结果获得了HPA-1a~16a、HPA-1b~16bw基因片段,克隆出各型HPA基因分型参考品质粒,其序列与GenBank中公布的数据完全一致。结论各型HPA基因分型参考品质粒的成功构建,解决了基因频率较低型别(HPA-1b~16bw)质控DNA难以获得的实际问题,为HPA基因分型方法的研究奠定了基础。     

AendB亚型的鉴定及输血1例

患者，男，40岁，因“原发性胆汁性肝硬化”收入我院，入院后常规输血前检测，RBC2．54×10^12／L，PLT69×10^9／L，Hb40g／L，WBC6．0×10^9／L。急需输血纠正贫血，血型检测正反不相符，正定型为B型，反定型为AB型，经进一步血型血清学及唾液型物质检测为AendB亚型，现报告如下。