乙肝核心抗原DNA疫苗的构建及其免疫原性分析

构建ＨＢＶ核心抗原ＤＮＡ疫苗,并探讨基实验动物内的表达及其免疫原性。方法：采用ＰＣＲ法从ＨＢＶ全基因ＤＮＡ中获得核心抗原ＤＮＡ片段,并将其重组到ｐｃＤＮＡ３载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树Ｊｕ,并检测其抗ＨＢｃＩｇＧ。结果：构建了乙肝核心抗原候选核酸疫苗ｐｃＤＮＡ３－ＨＢｃ。免疫接种该疫苗后第２周抗ＨＢｃＩｇＧ水平开始升高,小鼠至第９周,树Ｊｕ至第７周升至峰值。结论：构建ｐｃＤＮＡ３－ＨＢＣｄ     

毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究

目的 研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法 对表达产物行SDS—PAGE,FPLC离子交换层析和分子筛，等电聚焦，脱磷酸反应，N端氨基酸测序，小鼠免疫接种。结果 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大，易于纯化，等电点较理论值低，重组cC1已被磷酸化，N端携带了来自载体的4个氨基酸，免疫原性较原核的明显增强。结论 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化，尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强，表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因1484插入G变异与中国人肥胖相关

目的 确定蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTPIB）基因1484插入G（insG）变异是否与中国人肥胖相关。方法 选取上海地区中国人305例，用PCR／SacⅡ酶解法检测1484insG突变，突变的样本全部进行DNA序列分析。结果 正常对照组、单纯性肥胖、肥胖合并2型糖尿病组各发现8例、10例、16例PTP1B1484insG突变，正常对照组的1484insG突变率与单纯肥胖组、肥胖总组比较差异无统计学意义。但正常对照组与肥胖合并2型糖尿病组比较差异有统计学意义（P〈0．05），单纯肥胖组与肥胖合并2型糖尿病组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 PTP1B基因1484insG突变与中国人肥胖伴2型糖尿病有相关性，可能是中国肥胖人群发生2型糖尿病的遗传因素之一。     

大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32的抗凝血活性分析

目的：比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法：采用白陶土训分凝血活酶时间（KPTT）法体外检测凝血指标，并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果：两种表达体系制备的蛋白对KPTT有明显延长作用，且1mg/kg的蛋白均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓形成。结论：两种表达体系制备的Annexin32均有抗凝血及抑制血栓形成的作用。     

Evaluation of a sulfonated DNA probe (sulfoprobe) for diagnosis of falciparum malaria

In this study,the DNA probe pPF14 was nonradioactively labelled by sulfo-modifica-tion,and used in a dot blot hybridization assay for detection of P.falciparum.The resultsshowed that the sulfoprobe successfully detected 25pg purified DNA and 0.001% parasitemia ofcultured P.falciparum,and did not react with human leukocyte DNA.In the study of 179clinical blood samples of malaria patients from Yunnan province,the DNA probe results corre-lated well with blood smear ones.Of 107 P.falciparum samples determined by microscope ex-amination,99 were positive by sulfoprobe (92.5%);Of 72 P.vivax samples,1 was crosslyreacted;no cross reactions were found with any of 48 normal blood samples.It is indicated thatsulfoprobe may be useful in specific diagnosis and epidemiological investigation of P.falciparuminfection.     

人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用

目的：观察IL－2表达质粒对副肌球蛋白（AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法：将人的IL－2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3－IL－2重组质粒，然后接种C57BL／6小鼠（分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组），ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平；用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应，用ELISA法检测其分泌的IL－2和IL－4的水平，最后在仔猪中进行攻击实验，观察pcDNA3－IL－2质粒的免疫刺激作用。结果：注射疫苗后，pcDNA3－IL－2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG物IgG2a的水平，增强了脾细胞的增殖反应，提高了其分泌IL－2的水平，但对IL－4的水平产生轻微影响，仔猪攻击实验中，共同注射IL－2基因组提高了仔猪的相对保护率，结论：对于副肌球蛋白核酸疫苗而言，人的IL－2表达质粒是一种很好的免疫佐剂。     

肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎发病易感性和临床病变程度的影响

背景：肿瘤坏死因子α基因多态性与强直性脊柱炎发生与发展的关系是近年强直性脊柱炎遗传学研究的热点。目的：探讨肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性对强直性脊柱炎发病易感性和病变程度的影响。设计：病例-对照观察。单位：第二军医大学长海医院风湿免疫科。对象：随机选择1999-01／2003-12在第二军医大学长海医院风湿免疫科就诊的强直性脊柱炎患者108例，各对象间均无血缘关系。男女比为5．3：1；年龄13～71(30&;#177;12)岁，根据骶髂关节破坏程度X射线片评估为Ⅰ～Ⅳ级。另从解放军上海血站(长海医院)随机选取100名健康献血者作为对照，年龄19～56(33&;#177;9)岁，男女比为4．9：1，参与者均知情同意。方法：每例参与者取外周血，加乙二胺四乙酸A抗凝后进行肿瘤坏死因子-α基因启动子的聚合酶链反应扩增和纯化；对聚合酶链反应产物测序，并用Chromas 1．62软件展示分析DNA测序结果。②以X射线骶髂关节片分级和肿瘤坏死因子α-308位点(G／C)和(G／A)的对应值评估其对疾病程度的影响。主要观察指标：以DNA直接测序法对-238和-308位点进行基因分型，并分析基因类型与疾病临床表现之间的关系。结果：①肿瘤坏死因子α-238G／G基因型和-238G／A基因型：强直性脊柱炎组有106例(98．1％)和2例(1．9％)，正常对照组有95例(95．0％)和5例(5．0％)，两组间比较无显著性差异。②肿瘤坏死因子α-308．1．1(G／G)基因型和-308．1．2(G／A)基因型：强直性脊柱炎组有89例(82．4％)和19例(17．6％)，正常对照组中有85例(85．0％)和14例(14．0％)。两组比较亦无显著性差异。③根据骶髂关节X射线分级判定疾病严重程度与肿瘤坏死因子α-308位点G／G和G／A基因型之间的关系：强直性脊柱炎患者X射线片Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级时，(G／G)型为3／35／40／11例，(G／A)型为1／12／6／0例。两组差异比较意义显著(GMH：4．77，P&;lt;0．05)。结论：在观察对象中未发现肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性相关，但根据骶髂关节损害程度X射线分级说明肿瘤坏死因子α基因启动子-308位点的多态性对强直性脊柱炎的严重程度有影响。     

膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达

目的:构建膜联蛋白32(annexin32,Anx32)和低相对分子质量单链尿激酶(ScuPA32k)的融合基因,并在大肠杆菌系统内作表达.方法:利用重叠区扩增法进行基因拼接,然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达,Western 印迹验证表达产物.结果:重叠区扩增得到1.8 kb融合基因,该基因在原核表达系统内得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的26％,Western 印迹证明表达产物正确.结论:用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便.     

猪囊尾蚴抗原cC1在大肠杆菌中的克隆及高效表达

[目的 ]在大肠杆菌中克隆及高效表达猪囊尾蚴抗原cC1。 [方法 ]将cC1cDNA片段以BamHI和PstI克隆到pGEM 3Z载体 ,改换限制性内切酶位点成BamHI和PstI,加上人工接头PstI BamHI XhoI后 ,克隆到pGEX 5T ,构建重组原核表达载体pGE X5T cC1。 [结果 ]培养 3h、IPTG诱导 6h ,cC1表达量最高 ,表达量占细菌总量的 5 7% ,Westernblotting结果表明猪囊尾蚴抗原cC1蛋白与囊尾蚴病猪血清有特异性的结合条带。 [结论 ]猪囊尾蚴抗原cC1在大肠杆菌中获得高效表达。     

猪囊尾蚴副肌球蛋白cDNA中CpG序列的免疫激活作用

目的　探讨猪囊尾蚴副肌球蛋白 (又称为AntigenB ,AgB)cDNA中CpG序列的免疫激活作用。　方法　以pcDNA3 AgB质粒疫苗、CpG序列突变的pcDNA3 AgB′质粒疫苗、pcDNA3载体质粒和AgB蛋白质分别免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,2wk后开始用ELISA检测小鼠血清中IgG和IgG2a的效价。　结果　免疫接种的第 2周起实验组IgG与IgG2a效价开始升高 ,至第 4周达到峰值。其中以pcDNA3 AgB组升高最为显著 (P <0 0 5 )。　结论　pcDNA3 AgB核酸疫苗所诱导的小鼠免疫反应 ,不仅具有其表达产物AgB蛋白的抗原作用 ,AgBcDNA中的CpG序列也具有免疫激活作用。