人卵泡抑素基因真核表达载体构建和体外表达

目的:体外构建携带人卵泡抑素基因(FS)cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞(BHK21)中的表达。方法:从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FScDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒。经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒。pEGFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白(GFP)的荧光表达。结果:成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FScDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_013409.1)同源性为100%;成功构建pEGFP-FS重组表达质粒,将其转染BHK21细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:本实验成功构建了人FS的pMD-FS重组克隆质粒和pEGFP-FS重组表达质粒,为进一步研究FS对哺乳动物卵泡发育的影响奠定了基础。     

囊胚培养及移植的临床结局分析

体外受精-胚胎移植技术是辅助生殖治疗过程中治疗不孕症的主要方法,经过20多年的发展和改善,仍面临妊娠率低、多胎发生率高的问题,提高妊娠率和降低妊娠风险一直是医务人员追求的目标.由于囊胚期胚胎移植可以更好地选择胚胎的发育潜力,使可供移植的胚胎得到筛选,有利于胚胎着床,故囊胚培养和移植已成为许多生殖中心提高妊娠率、降低多胎发生率的重要手段之一.本研究回顾性分析囊胚期胚胎移植和卵裂期胚胎移植的临床结局,探讨单囊胚移植的应用前景.     

IVF/CISI-ET对PCOS患者临床结局的影响

目的分析体外受精(IVF-ET)或卵泡浆内单精子注射(ICSI)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者临床结局的影响。方法回顾性分析2010年至2012年在本中心接受IVF-ET/ICSI治疗的112名PCOS不孕患者122个新鲜周期的临床资料,分为妊娠组和非妊娠组。计算比较各组的一般情况、促性腺激素(Gn)用量、Gn使用时间、HCG日的E2、LH、P值、HCG日的子宫内膜厚度、获卵数、受精率、优胚率及卵巢过度刺激综合征(Ovarian hyperstimuation syndrome,OHSS)发生率等。结果妊娠组的Gn用量、HCG日的E2水平及获卵数显著少于非妊娠组(P0.05),而两组间的Gn使用时间、HCG日的LH、P值、HCG日的子宫内膜厚度、受精率、优胚率等无明显差异(P0.05);当HCG日的E2水平大于3000 pg/mL时妊娠率明显下降(P0.05),OHSS的发生率升高(P0.05)。结论 PCOS患者在辅助生殖临床治疗中,促性腺激素(Gn)使用量的增多,导致HCG日的E2水平增高,其获卵数相应增多,但妊娠率亦会降低,而HCG日的E2水平对体外受精-胚胎移植的结局有一定的预测作用。     

玻璃化与程序化两种不同胚胎冻融方法的临床应用效果比较

目的探讨玻璃化与程序化冻融胚胎的临床应用价值。方法回顾分析广西壮族自治区人口和计划生育研究中心的609个胚胎冷冻周期,其中366个程序化胚胎冻融周期与243个玻璃化冻融周期,比较两种不同冻融方法的胚胎复苏率、胚胎移植率、胚胎种植率、临床妊娠率等指标。结果玻璃化冷冻法与程序化冷冻法比较,其胚胎复苏率（94.75%,74.13%）、解冻移植率（97.94%,87.98%）、种植率（28.88%,16.94%）和临床妊娠率（42.86%,30.75%）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论玻璃化冷冻法比程序化冷冻法更适于人类胚胎的冷冻保存。     

双色荧光原位杂交检测男性不育患者精子X和Y染色体

目的建立男性不育患者精子核双色荧光原位杂交技术（FISH）的检测方法。方法将20例男性不育患者精子标本经低渗液处理、固定后制片,用二硫苏糖醇（DTT）使精子去凝集,变性后与双色荧光标记（CEPX、Y）探针杂交。结果20例患者的6672个精子中,X染色体精子率为47．78％,Y染色体精子率为47．24％,性染色体数目异常的精子率为4．53％,有效杂交率为99．55％。结论成功地建立了检测人精子X和Y染色体的检测方法。     

地屈孕酮在冻融胚胎移植激素替代周期中的应用

目的：比较口服地屈孕酮与肌肉注射黄体酮应用于冻融胚胎移植（FET）激素替代黄体支持的临床效果。方法回顾性分析在本中心接受激素替代（HRT）内膜准备方案行FET治疗周期患者的临床资料。月经第3日起口服雌二醇片2mg,第14日超声监测。内膜≥8mm时,加用口服地屈孕酮60mg转化内膜（A组）,或肌注油剂黄体酮80mg（B 组）,5d后解冻第5d 胚胎。结果共完成689个 FET 激素替代周期, A、B 两组临床妊娠率分别为42%、35%,种植率分别为27.3%、24.1%,流产率分别为20.1%、15.7%,组间比较差异均无统计学意义（P＆gt;0.05）。结论 FET 激素替代周期中口服地屈孕酮简单方便,临床结果理想,可以替代肌肉注射油剂黄体酮。     

短时受精后补救ICSI的临床应用研究

目的:探讨降低体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中受精失败的有效方法。方法:对行IVF治疗的600个周期进行短时受精观察,于受精后5h左右去除卵丘细胞,观察卵子第二极体的排出情况;对第二极体排出率低于1/2的周期追加观察至受精后9h,如果存在可疑受精低下及全卵受精失败,则予以早补救卵细胞浆内单精子注射(ICSI)治疗(观察组);选择同时期连续进行ICSI治疗的患者共49个周期(对照组);比较两组的受精及妊娠情况。结果:两组的正常受精率、多精受精率、正常卵裂率及优质胚胎率差异有统计学意义(P<0.01);临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IVF-ET中短时受精后早补救ICSI不影响临床妊娠率,对预防及降低受精失败有重要意义。     

移植胚胎数对体外受精-胚胎移植临床结局影响探讨

目的:探讨移植胚胎数对体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization and embryos transfer;IVF-ET)临床结局的影响。方法:选择2008年1～12月在中心行IVF-ET或ICSI-ET治疗的1302周期,按移植胚胎数目分为移植1枚组、移植2枚组、移植3枚组,比较3组间的临床妊娠率、胚胎种植率、双胎率、多胎率、流产率、活产率。结果:3组中2枚组的临床妊娠率、胚胎种植率、活产率最高,2枚组和3枚组的临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05),但多胎妊娠率显著低于3枚组(P<0.01),2枚组和3枚组比较有较高的活产率而较低的流产率(P均<0.05)。结论:在IVF-ET周期中,减少移植胚胎数可能会降低临床妊娠率,但移植2枚胚胎能够有效降低三胎以上多胎妊娠的发生。     

体外受精后提前去除卵丘细胞对临床结局的影响

目的观察提前去除卵丘细胞对胚胎质量的影响,进一步探讨其临床应用价值。方法将2009年79月行体外受精胚胎移植治疗的患者随机分为两组,试验组共137个周期,于授精后5h去除卵丘细胞;对照组共146个周期,于授精后16～18h去除卵丘细胞。两组均于授精后16～18h观察受精情况,72h对胚胎进行评分,选择1～3枚优质胚胎进行胚胎移植。分别比较两组的年龄、不育年限、获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率。结果两组的优质胚胎率差异有统计学意义（P〈0.01）;但年龄、不育年限、获卵数、受精率、卵裂率、胚胎种植率和临床妊娠率比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论体外受精中提前去除卵丘细胞优质胚胎增加,有助于提高临床累积妊娠率。