大肠埃希菌耐药率及耐药趋势的探讨

目的 利用“ＷＨＯＮＥＴ４”软件监测大肠杆菌对几类常用抗生素在１９９５年～１９９８年４年间耐药性的变迁。方法 采用常规鉴定技术鉴定细菌,Ｋ－Ｂ法测定抑菌环直径,利用“ＷＨＯＮＥＴ４”软件对结果进行录入和分析。结果 大肠杆菌对丁胺卡那在１９９６年和１９９８年的耐药率有显著差异（Ｐ〈０．０５）,丁胺卡那其他年份的耐药率及其他六种抗生素各年份间的耐药率无显著性意义（Ｐ〉０．０５）。庆大霉素、先锋Ｖ、头孢     

HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者外周血中TCR γδT细胞促炎细胞因子的产生及与临床指标的相关性分析

目的探讨HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)外周血中TCRγδT(γδT)细胞的比例及产生IFN-γ、TNF-α及IL-17等促炎细胞因子的能力,分析它们与临床指标间的相关性。方法入选26例HBV-ACLF患者、40例慢性HBV感染患者(CHBV)、25例健康对照者,用流式细胞仪方法检测外周血中γδT细胞的频率及产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17细胞的比例,采用SPSS 13.0统计软件分析各组间各细胞比例的差异及细胞比例与临床指标的相关性。结果 HBV-ACLF患者外周血中γδT细胞占总T细胞的比例的中位值为4.8%,低于CHB患者(10.7%)与健康对照者(10.3%),差异有统计学意义(P<0.01)。在体外经刺激后,IFN-γ阳性的γδT细胞在HBV-ACLF组的比例中位值为73.9%、CHBV组为70.9%,高于健康对照组(45.3%,P<0.01);HBV-ACLF患者中TNF-α阳性的γδT细胞中位值为26.7%,显著高于CHBV患者(11.5%)及健康对照组(11.7%,P<0.01);产生IL-17因子的γδT在HBV-ACLF组中中位值为0.7%,高于CHBV组(0.3%)及健康对照组(0.3%,P<0.01)。经Spearman Correlation相关性分析,HBV-ACLF组中TNF-α+γδT细胞的比例与ALT或AST水平呈负相关。结论虽然HBV-ACLF患者外周血中总的γδT细胞比例降低,但产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17的能力显著增强,可能参与了HBV-ACLF发病过程中炎症因子急剧升高的过程。     

泌尿道感染菌群分布及耐药性分析

目的:研究我院肾内科2001～2002年2年期间从临床尿标本病原菌(489株)的菌群分布和药敏情况,为合理应用抗生素提供依据.方法:细菌按常规方法分离鉴定,药敏采用K-B法.结果:489株菌中革兰氏阴性杆菌307株,占62.5%,主要以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌为常见;革兰氏阳性球菌182株,占37 5%,主要以肠球菌和血浆凝固酶阴性的葡萄球菌为主.药敏试验表明:革兰氏阴性杆菌共同敏感的药物是亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦;革兰氏阳性球菌共同敏感的药物是万古霉素、替考拉宁.结论:泌尿道感染以大肠埃希菌和肠球菌为主,定期系统的细菌耐药监测对临床用药具有重要意义.     

临床微生物带教实践总结

临床微生物学是一门对专业知识和实践技能都具有较高要求的专业学科。如何提高微生物教学质量和效果，需要带教教师在教学实践中不断总结、归纳适合于自己的教学方法。本微生物室通过几年的教学实践，总结了自己独有的一套思路及方法。     

青霉素结合蛋白2a胶乳凝集试验快速检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (Methicillinresistantcoagulase negativeStaphylococcus,MRCoNS)是医院感染的重要病原菌 ,青霉素等 β 内酰胺类抗生素对之临床无效。MRCoNS耐 β 内酰胺类抗生素的主要机制是产生低亲和力的新型青霉素结合蛋白PBP2a ,该蛋白由mecA基因编码。本文对PBP2a筛选法[1] 与PCR检测mecA基因的方法进行比较 ,评价其可靠性和临床应用价值 ,以寻找适合医院实验室检测MRCoNS的简单而可靠的方法。1　材料与方法1 .1菌株　 1 1 9株凝固酶阴性葡萄球菌为我院 2 0 0 1年8月至 2 0 0 2年 5月临床分离株 ,主要源…     

重复序列片段基因扩增用于阴沟肠杆菌的分型研究

目的 用重复序列片段基因扩增方法对阴沟肠杆菌进行分型研究。方法 选用肠杆菌科基因间的重复序列(ERIC)进行扩增,对阴沟肠杆菌进行分型研究,并与其抗生素耐药特征进行比较。结果 阴沟肠杆菌分成6种不同基因型,不同基因型有不同的耐药特征。结论 本法简便易行,重复性好,适合于临床分离的病原菌的分型及医院感染的分子流行病学研究。     

丙型肝炎病毒5′非翻译区 DNA 序列在 HepG2细胞中的启动子活性

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组5′非翻译区(5′UTR)DNA 序列在 HepG2细胞中 的启动子活性，以了解 HCV 的复制调控机制。方法 分别构建 HCV 基因组5′UTR DNA 正反向序列驱动 虫荧光素酶基因表达的质粒5′UTR-Luc(+)/(-)和5′UTR DNA 序列驱动绿色荧光蛋白基因表达的质粒5′ UTR-EGFP(+)/(-)，分别转染 HepG2细胞，用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平，逆转录 聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因 m R N A 水平，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达水平，并与相应 对照作比较，来证实 HCV 基因组5′UTR DNA 序列的启动子活性。结果 5′UTR-Luc(+)有明显的虫 荧光素酶表达，但比 pGL3 control 表达水平低(Luc/R为0．690±0．086，Luc/RL 为4．210±0．340)，而5 ′UTR-Luc(-)和 pGL3 enhancer 无明显虫荧光素酶表达(Luc/RL 分别为0．095±0．008和0．044±0． 005)；逆转录聚合酶链反应结果与之相符，5′UTR-Luc(+)检测到虫荧光素酶基因 mRNA，而5′UTR- Luc(-)则未检测到。5′UTR-EGFP(+)观察到较强绿色荧光，而5′UTR-EGFP(-)无荧光表达。 结论 HCV 基因组5′U TR DNA 序列具有明显的启动子活性，能启动下游基因的表达，在 HCV 基因组复 制过程中有重要作用。     

抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。     

一种乙型肝炎病毒转录后调节基序的体外合成方法

目的 探索T7 RNA聚合酶体外转录方法制备乙型肝炎病毒（HBV）转录后调节基序（HPRE）。方法 用聚合酶链反应法从含HBV全基因组的模板中扩增HBV HPRE基因，重组人pGEM—11zf载体，并用T7 RNA聚合酶对其进行体外转录。结果 成功地构建含HPRE基因的重组质粒，并成功地用体外转录方法制备了高纯度的HPRE。结论 T7 RNA聚合酶体外转录方法可用于制备高纯度的HPRE，为以后的深入研究奠定了基础。