核转录因子NF-κB对大鼠血管球囊损伤后新生内膜形成的作用

目的 探讨核因子κBp65亚基的反义和诱骗性寡核苷酸单独或联合作用对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和细胞基质金属蛋白酶的影响.方法 建立SD大鼠颈动脉球囊损伤模型.随机分为7组,每组分为6个时相点(6 h和1、3、5、7、14 d),每个时相点3只大鼠.结果 球囊损伤后7 d,模型组、正义组、诱骗对照组血管内膜/中膜比达到高峰,较正常组、反义组、诱骗组、反义+诱骗组显著升高(P＜0.05).球囊损伤后第3天,免疫组化检测细胞增殖标记物BrdU的掺入,与模型组相比,反义组、诱骗组、反义+诱骗组BrdU标记指数明显降低(P＜0.05).Western blot印迹法显示核因子κBp65蛋白表达在血管损伤后7 d达高峰.大鼠颈动脉损伤后7 d,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)蛋白表达在反义组、诱骗组、反义+诱骗联合治疗组均较各自对照组降低.结论 球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖在不同时相点有动态变化;核因子κB反义和诱骗性寡核苷酸可抑制MMP-9的表达.     

女性缺血性心脏病的研究进展

传统的危险因素不能有效地评估女性冠状动脉疾病风险,性别因素影响了缺血性心脏病（IHD）病理生理、临床表现、诊断治疗等多个方面.在女性IHD中阻塞性冠状动脉疾病少见,微血管功能障碍可能是主要机制,评估内皮功能可能提高女性IHD诊断的准确性.女性IHD缺血症状显著而频发,常不典型,死亡率较高.相同的治疗策略可以使女性IHD获益,但其死亡率仍高于男性,因此,还需要更多的研究以确定女性IHD最佳的治疗方案.     

核因子kappaB的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子-α诱导的细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨人脐静脉内皮细胞中，核因子kappaB(NF-kB)的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的细胞间粘附分子(ICAM)-1表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304，脂质体介导法转染寡核苷酸，以流式细胞仪检测转染效率，电泳迁移率转换试验检测诱骗性寡核苷酸与NF-kB转录因子的亲和力及特异性，并以RT-PCR和流式细胞仪测定其对TNF-α诱导的粘附分子ICAM-1表达的影响。结果 诱骗性寡核苷酸能与NF-kB特异结合，并可显著下调TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达。结论 NF-kB的诱骗性寡核苷酸可显著下调NF-kB调控的与动脉粥样硬化相关的粘附分子的表达，为核酸药物防治动脉粥样硬化的临床应用提供一些前期资料。     

核因子-κB的反义及诱骗性寡核苷酸联合作用对内皮细胞间黏附分子-1表达的影响

目的探讨在人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)ECV304中,核因子(NF)-κB的反义及诱骗性寡核苷酸联合作用对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的细胞间黏附分子-1(ICAM一1)表达的影响。方法采用反义和诱骗性寡核苷酸分别和联合干预ECV304,流式细胞仪检测寡核苷酸转染效率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪荧光活细胞测定和免疫组织化学染色法分别从mRNA和蛋白质水平检测TNF-α诱导的ICAM-1表达。结果脂质体介导的转染法能有效地将单链、双链寡核苷酸转染至ECV304中。联合转染反义及诱骗性寡核苷酸的ECV304细胞的ICAM-1 mRNA表达较TNF-α诱导者降低42.58%(P<0.05),ICAM-1在细胞表面的表达降低85.46%(P<0.05),且下调幅度均显著大于反义寡核苷酸或诱骗性寡核苷酸的单独作用(P值均<0.01)。免疫组织化学染色也获得同样结果。结论NF-κB的反义及诱骗性寡核苷酸可显著下调NF-κB调控的与动脉粥样硬化相关的黏附分子表达,且联合作用效果强于单独作用,这可能为核苷酸干预防治动脉粥样硬化提供新的思路。     

NF-κB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的探讨NF-κB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验共分六组.阳离子脂质体转染法将NF-κB寡核苷酸导入血管平滑肌细胞,检测细胞凋亡、细胞内NF-κBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况.结果血管平滑肌细胞转染NF-κB反义或诱骗寡核苷酸后,细胞凋亡增强,凋亡时间延长.反义组NF-κBp65蛋白质表达较正义组降低(P<0.05);反义+诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗,但与诱骗组相比NF-κBp65的蛋白质表达降低(P<0.05).反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低(P<0.05).结论 NF-κB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,使细胞凋亡增强;NF-κB反义寡核苷酸及反义+诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-κB生成.     

Breakdance斑马鱼杂合子的早衰表型研究

目的 有心律失常表型的Breakdance突变斑马鱼（bretb218）已被证实是人类同源基因kcnh2的纯合子突变体.它的杂合子tb218＋/-虽没有明显的心律失常表型,却表现出早衰的态势.本研究旨在了解该杂合子斑马鱼的早衰表型,建立衰老研究的脊椎动物模型,并为进一步探索kcnh2基因突变与早衰的关系奠定基础.方法 生存曲线记录斑马鱼的预期寿命：用脊柱弯曲度和脊柱弯曲比值2个参数评估斑马鱼形态学的改变;挑战性游泳耐力试验评估斑马鱼的运动能力;心电图检测电生理活动的改变.结果 杂合子tb218＋/-斑马鱼的生存率从20月龄起急剧下降,至40月龄时仅为8%,远低于野生型斑马鱼的80%;tb218＋/-斑马鱼与野生型斑马鱼的脊柱弯曲度差异从8月龄起开始显现,20月龄后更明显,32月龄tb218＋/-斑马鱼的脊柱弯曲度与60月龄野生型斑马鱼相当;挑战性游泳耐力试验发现,8月龄和20月龄tb218＋/-斑马鱼的运动能力与野生型相当,但在32月龄时,其运动能力较同龄野生型斑马鱼降低56.44%;心电图检测发现,tb218＋/-斑马鱼的心率随年龄增长而下降的幅度较野生型大,QTc间期在各月龄段均略长于野生型,尤其在8月龄时,但并未发现随月龄增长而延长的趋势.结论 杂合子tb218＋/-斑马鱼呈现早衰态势,包括生存期缩短,脊柱弯曲早现,运动能力下降,心率随月龄增长的下降幅度增大及部分月龄段的QTc间期明显延长;这些表型可能与kcnh2基因的突变相关;该鱼系有望成为早衰研究的颇有价值的脊椎动物模型.     

核因子kappaB的反义核酸对人内皮细胞间粘附分子-1表达的影响

目的　采用反义核酸技术观察核因子kappaB(NF κB)的合成及其对所调控的粘附分子表达的影响 ,阐明其作用机制并证明其有效性。方法　设立正义、反义核酸组和对照组 (单用肿瘤坏死因子 α刺激 )。观察FITC标记的寡核苷酸在内皮细胞内的摄取情况及采用流式细胞仪检测反义核酸对NF κB表达的影响 ;采用RT PCR、免疫组织化学法和流式细胞仪检测转染后细胞间粘附分子 (ICAM ) 1的表达情况。结果　反义核酸组NF κB的表达较对照组下降 35 .94%,较正义核酸组下降 47.14%(P <0 .0 5 ) ;反义核酸组人血管内皮细胞I CAM 1的mRNA表达及其在细胞表面的表达水平较对照组分别降低 12 .2 3%和 71.37%,较正义核酸组分别降低 18.16 %和 71.82 %(P <0 .0 5 )。结论　NF κB的反义核酸能有效降低NF κB的复制及合成 ,从而显著下调人血管内皮细胞ICAM 1的表达 ,其正义核酸无此效应。     

糖尿病血脂异常的首要治疗目标是降低LDL-C

越来越多的研究发现,糖尿病患者发生主要冠脉事件的危险性与已患冠心病者等同,即10年内患“硬性”冠心病(即心肌梗死、冠脉死亡)的可能性大于20％。对芬兰人群7年的随访研究发现,糖尿病患者心肌梗死的发生率远高于非糖尿病患者,且致死性心肌梗死的发生率也大大高于后者。糖尿病已成为冠心病的等危症。     

核因子κB的反义寡核苷酸对肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的：探讨人脐静脉内皮细胞（HUVECs）ECV304细胞株中，核因子κB（NF—κB）的反义寡核苷酸（AODNs）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导血管细胞黏附分子（VCAM-1）表达的影响。方法：将培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304分为3组，其中2组用脂质体介导法转染寡核苷酸（ODNs）分别转染AODNs、正义寡核苷酸（SODNs）：另1组（阳性对照组）不转染ODNs。流式细胞仪荧光活细胞计数检测转染效率及NF-κB的表达情况，逆转录-聚合酶链反应、流式细胞仪检测及免疫组织化学染色测定AODNs对TNF—α诱导的VCAM—1表达的影响。结果：脂质体介导的转染方法能将ODNs有效地转染至HUVECs中，且AODNs可有效抑制NF-κB的复制合成。NF—κBP65的AODNs可使TNF—α刺激的人脐静脉内皮VCAM-1mRNA表达下调33．08％，蛋白质水平的表达下调48．27％，并与免疫组织化学染色显示结果一致。结论：NF—κB的AODNs可显著下调NF—κB调控的、与动脉粥样硬化相关的黏附分子表达。     

肌球蛋白轻链激酶与冠心病的相关性研究

目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)间的相关性。方法:将72例行冠状动脉造影术的患者根据造影结果分为对照组及CHD组,CHD组患者根据病情再分为急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)和稳定性CHD 2个亚组。采集对照组患者入院24 h内及造影后24 h内血样和CHD组患者入院24 h内、造影后24 h内及入院第5天血样,应用双抗体夹心ABC-ELISA法测定其血清MLCK水平。结果:血清MLCK水平与血脂、血糖水平相关,且对CHD有一定诊断价值;院内发生不良事件的CHD患者血清MLCK水平显著升高,且ACS患者血清MLCK水平高于稳定性CHD组,而后者高于对照组(P均<0.05)。同时,血清MLCK与高敏C反应蛋白(hsCRP)间呈显著正相关。结论:血清MLCK水平可能与炎症反应及动脉斑块的不稳定性相关,对CHD的诊断和院内预后评估有一定价值。