pcDNA3.1-HMOX1重组质粒载体的构建与鉴定

目的：构建pcDNA3．1－HMOX1重组质粒载体。方法使用基因合成法合成HMOX1基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3．1载体的BamHⅠ和 NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。结果 pCDNA3．1－HMOX1重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因HMOX1的序列完全正确,重组质粒载体构建成功。结论成功构建pCDNA3．1－HMOX1融合基因并在DH5α大肠杆菌内表达,为进一步探讨HMOX1的生物学功能奠定了基础。     

pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。     

血清AFU对原发性肝癌诊断价值的meta分析

目的用meta分析的方法评价血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌(PHC)诊断中的价值。方法检索Cochrane Library、Pub Med、web of knowledge(Medline、BIOSIS Previews)、Springer link、Science Direct数据库,检索时间为1997年1月至2013年12月。中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网、万方、重庆维普等数据库,检索时间为19841月年至2013年12月。检索语言限定为中文和英文。收集研究血清AFU对PHC诊断价值的相关文献,对符合纳入标准的文献进行质量评价,采用meta-Disc 1.4软件进行分析,综合评价血清AFU在原发性肝癌诊断中的价值。结果共纳入20篇文献(中文15篇,英文5篇)。分析病例组2 114例,对照组5 718例。对入选20篇文献进行异质性检验,提示所纳入文献具有非阈值效应引起的异质性,因此选用随机效应模型进行meta分析。汇总灵敏度为0.77;汇总特异度为0.87;汇总阳性似然比为5.37;汇总阴性似然比为0.28;诊断比值比为20.47;受试者工作曲线(SROC)曲线下面积为0.87。结论血清AFU在PHC的诊断中具有较高的灵敏度和特异度,对其临床诊断具有较高的价值。     

2012-2013年中山市育龄期女性ToRCH 筛查结果分析

摘要:目的　探讨中山市育龄人群TORCH的感染现况,为全市优生优育工作提供数据支撑。方法　选取2012-2013年在全院产前诊断中心进行ToRCH筛查的32439例育龄期女性,酶联免疫法（ELISA）检测其血清anti-TORCH抗体。结果　32439例育龄期女性血清中anti-TORCH抗体阳性率分别为anti-TOX-IgM（0.77%）、anti-RV-IgM（1.07%）、anti-CMV-IgM（1.88%）、anti-HSVⅠ/Ⅱ-IgM（1.40%）、anti-HpvB19-IgM（3.79%）;anti-TOX-IgG（3.97%）、anti-RV-IgG（83.99%）、anti-CMV-IgG（91.56%）、anti-HSVⅠ/Ⅱ-IgG（88.19%）、anti-HpvB19-IgG（17.46%）;低龄组（18～35岁）与高龄组（36～45岁）anti-TORCH IgM阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）;IgG抗体中HSV-IgG、RV-IgG阳性检出率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　本地区育龄期女性对TORCH病原体普遍易感,应加强育龄期女性的TORCH 筛查力度。     

神经梅毒脊髓痨一例报导

患者,男,70岁,因“双下肢麻木无力一周”于2010年4月30日入院。一周前因淋雨感冒后出现双下肢麻木、无力,不能站立行走,伴有腹泻,糊状稀便,一日十数次,有失禁现象,小便正常,曾在当地卫生院输液治疗,病情元好转,遂转入我院治疗。     

HSPC238相互作用蛋白RPL5的初步筛选北大核心CSCD

目的:构建HSPC238诱饵载体,筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。方法:基因合成法合成HSPC238基因,sfi IA和sfi IB双酶切后与pGBKT7诱饵载体连接,获得诱饵质粒pGBKT7-HSPC238,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7共同转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-HSPC238的自激活作用,进一步从人胎肝c DNA文库中筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。结果:诱饵载体pGBKT7-HSPC238构建成功,经表型筛选检测无自激活作用,经酵母双杂交技术结合文献分析,从人胎肝c DNA文库中初步筛选发现核糖体蛋白L5(Ribosomal protein L5,RPL5)可能是HSPC238相互作用的目标蛋白之一。结论:成功构建pGBKT7-HSPC238诱饵质粒载体,且经酵母双杂交技术结合文献分析发现RPL5可能是与HSPC238相互作用的目标蛋白之一。     

HSPC238 在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达与意义

目的:检测HSPC238在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达。方法:收集76例宫颈癌、105例CIN及28例正常宫颈标本,采用免疫组织化学的方法检测HSPC238的表达,比较不同组织中HSPC238表达的差异。结果:正常组织和癌组织中的HSPC238的表达强度无显著差异(Z=-0.242,P0.05)宫颈上皮内瘤变组织(CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ)与正常组织有显著差异(χ2=19.159,P0.01),并且发现HSPC238的表达与CIN的分级存在显著相关性,随着CIN级别升高,染色程度降低(rs=-0.327,P0.01)。结论:HSPC238的低表达与宫颈肿瘤的发生发展可能有一定关系。     

HSPC238对肝癌细胞中RB基因表达的影响

目的观察HSPC238对肝癌细胞中RB mRNA和pRb蛋白水平的影响。方法将PcDNA3.1-HSPC238质粒和PLL3.7-HSPC238干扰载体分别转染HepG2细胞,用实时荧光定量PCR的方法检测RB mRNA的表达量;采用Western blotting法检测pRb蛋白的表达。结果和对照组相比,转染高表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb表达量也增加;相反地,和对照组相比,转染低表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb蛋白的表达量也减少。以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。结论在HepG2细胞中HSPC238对RB基因的表达存在正向调控作用。     

滤纸干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用

目的探讨干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称α-地贫)筛查中的应用价值。方法使用干血片毛细管电泳仪对46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本进行血红蛋白(Hb)电泳分析,检测HbA、HbF、HbA2和异常Hb的水平,对筛查表型阳性的病例召回进行基因分析。结果 46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本中检测出巴特血红蛋白(Hb Bart′s)阳性者2 598例,筛查阳性率5.56%(2 598/46 718);召回544例经基因分析确诊477例α-地贫基因携带者,故Hb Bart′s带筛查与基因确诊的符合率为87.68%(477/544)。进一步分析其临床表型与Hb Bart′s水平的关系可见,随着临床表型的加重,Hb Bart′s水平逐渐增加,且差异有统计学意义(P=0.000)。结论滤纸干血片毛细管电泳分析技术与基因分析有较好的一致性,可根据Hb Bart′s水平的多少初步判断α-地贫的临床分型。     

血清超敏C反应蛋白和同型半胱氨酸与缺血性脑卒中的相关性

目的:探讨缺血性脑卒中患者血清超敏C反应蛋白(hsCRP)和同型半胱氨酸(Hcy)水平与缺血性脑卒中病情严重程度的相关性。方法:选择131例缺血性脑卒中患者(脑卒中组),根据神经功能缺损程度评分标准分为轻型组59例、中型组41例和重型组31例;根据梗死面积分为腔隙性脑梗死组(55例)、小梗死组(46例)和大梗死组(30例)。另选择同期健康体检者(98例,健康对照组),检测所有研究对象血清hsCRP、Hcy水平,并分析其与缺血性脑卒中患者临床神经功能缺损程度及梗死面积的相关性。结果:缺血性脑卒中患者血清hsCRP、Hcy水平明显高于健康对照组(P均=0.001);与轻型组比较,中型组和重型组hsCRP[(4.43±0.42)mg/L比(6.78±1.48)mg/L比(9.52±1.73)mg/L]、Hcy[(17.49±1.32)μmol/L比(22.18±1.83)μmol/L比(26.01±2.37)μmol/L]水平明显升高,且重型组hsCRP、Hcy水平明显高于中型组(P均=0.001);与腔隙性脑梗死组比较,小梗死组和大梗死组hsCRP[(4.13±0.53)mg/L比(7.61±1.47)mg/L比(9.49±2.18)mg/L]、Hcy[(18.49±3.27)μmol/L比(22.53±4.28)μmol/L比(27.38±5.12)μmol/L]水平明显升高,且大梗死组hsCRP、Hcy水平明显高于小梗死组(P均=0.001),Pearson相关分析显示,缺血性脑卒中患者hsCRP、Hcy水平与临床神经功能缺损程度评分、梗死面积均呈明显正相关(r=0.253~0.641,P均0.01)。结论:血清超敏C反应蛋白、同型半胱氨酸水平是评估缺血性脑卒中患者病情严重程度的重要指标。