人 Dickkopf1 基因腺病毒载体的构建及感染黑色素瘤后 β-catenin 表达的研究

目的 构建高表达外源性Dickkopf1(DKK1)基因的重组腺病毒载体(Ad-DKK1);感染黑色素瘤细胞株后研究Wnt信号通路中主要信号分子β-catenin的表达变化. 方法 利用PCR技术扩增目的 基因DKK1;应用分子克隆技术和AdEasy系统重组腺病毒技术,把目的 基因亚克隆到穿梭质粒;经酶切和测序后,在BJAdeasy中同源重组;用PacⅠ酶切过的重组腺病毒DNA在HEK293中包装并扩增;实验分为5组:Ad-DKK1感染组、Ad-SimDKK1感染组、Ad-GFP感染组、Ad-RFP 感染组和空白细胞对照组.按照MOI值为80感染恶性黑色素瘤细胞株A375,观察细胞形态;RT-PCR法检测DKK1、β-catenin基因的表达,MTT法检测细胞活力. 结果 重组腺病毒Ad-DKK1经酶切鉴定与测序证实构建成功.感染A375细胞,感染率均大于80%,感染后细胞形态无明显改变.Ad-DKK1感染组DKK1的表达水平(1.638±0.067)与其他4组(0.718±0.086、1.424±0.125、1.414±0.089、1.423±0.088)比较差异具有统计学意义(P<0.05),其β-catenin的表达水平(0.590±0.011)与其他4组(0.895±0.012,0.749±0.024,0.754±0.012,0.759±0.014)比较差异具有显著统计学意义(P<0.01).MTT法检测细胞活力:Ad-DKK1感染组(0.370±0.014)与其他4组(0.412±0.017、0.398±0.006、0.395±0.007、0.426±0.016)比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 成功构建重组腺病毒Ad-DKK1,经其感染的恶性黑色素瘤细胞中DKK1的表达明显增强,β-catenin的表达显著降低,A375的细胞活力受到抑制.     

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9与骨形态发生蛋白2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架修复桡骨缺损的比较

背景:课题组采用新的重组腺病毒介导的基因表达手段,与传统方法比较具有高效、方便、安全等优点,可作为进入临床基因治疗应用的潜在有力手段.目的:比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白9(Adv-hBMP-9)与腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)分别复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架材料修复重建桡骨缺损的效果.方法:新西兰白兔36只,随机分成3组,制成双侧桡骨中段13 mm骨缺损模型.分别植入Adv-hBMP-9+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-hBMP-2+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-GFP+羟基磷灰石,聚酰胺骨.植入后进行大体观察、X射线摄片、组织学检测.结果与结论:BMP-9组骨缺损完全修复,BMP-2组骨缺损部分修复,而GFP对照组骨缺损修复明显欠佳.提示重组腺病毒介导的BMP-9对桡骨骨缺损后的成骨修复作用强于BMP-2.     

240例带状疱疹临床分析

目的:探讨带状疱疹的临床特征与治疗方法.方法:随机抽取2015年1月至2016年12月于我院门诊就诊的240例带状疱疹患者,对患者的临床资料进行分析.结果:该疾病多发于老年群体,并且多发病于春季与夏季,经过相应的治疗后患者的病症获得了好转.结论:带状疱疹的发病率将会随着年龄的增长而提升,并且该疾病具有较长的病程,需要使用合理的方法进行治疗.     

Wnt信号传导通路与恶性黑素瘤的相关性研究进展

恶性黑素瘤(Malignant Melanoma,MM)是一种高度恶性肿瘤,其特点为生长隐匿、转移早且迅速,预后差及死亡率高[1]。资料统计显示在所有原发皮肤恶性肿瘤中恶性黑素瘤虽然只占4%,但其致死率却占79%[2]。近年来全球范围累积发病率正以每年5%~7%的速度逐年上升,上升率超过了任何一种人类肿瘤。目前影响该病的因素尚不十分清楚,临床治疗仍以手术为主,并辅以放疗、化疗及免疫治疗,但疗效并不理想。Wnt信号传导通路作为细胞间信号传导途径之一,在细胞分化、增殖及肿瘤形成过程中起着举足轻重的作用。Wnt途径的异常与多种肿瘤的发生或转移有关,恶性黑素瘤的发生发展也与其关系密切。本文对Wnt信号传导通路的研究进展做一综述,重点介绍其在恶性黑素瘤中的作用。     

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9与骨形态发生蛋白2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架修复桡骨缺损的比较*◆

摘要 背景：课题组采用新的重组腺病毒介导的基因表达手段,与传统方法比较具有高效、方便、安全等优点,可作为进入临床基因治疗应用的潜在有力手段。 目的：比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白9(Adv-hBMP-9)与腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)分别复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架材料修复重建桡骨缺损的效果。 方法：新西兰白兔36只,随机分成3组,制成双侧桡骨中段13 mm骨缺损模型。分别植入Adv-hBMP-9+纳米羟基磷灰 石/聚酰胺骨、Adv-hBMP-2+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-GFP+羟基磷灰石/聚酰胺骨。植入后进行大体观察、X射线摄片、组织学检测。 结果与结论：BMP-9组骨缺损完全修复,BMP-2组骨缺损部分修复,而GFP对照组骨缺损修复明显欠佳。提示重组腺病毒介导的BMP-9对桡骨骨缺损后的成骨修复作用强于BMP-2。 关键词：人骨形态发生蛋白9;人骨形态发生蛋白2;腺病毒;纳米羟基磷灰石;聚酰胺;骨缺损;成骨作用 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.004