HBV适应性杂交细胞株的建立和初步研究

目的方法诱导HepG₂细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞。对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测。实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照。结果经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功。HepCHLine3在形态学上与HGPRT^-HepG₂细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG₂和人原代肝细胞的基因数。传代培养的HepCHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg。对照组的HepG₂和人原代肝细胞相应结果为阴性。提示该细胞携带并分泌HBV DNA。结论该杂交细胞兼具HepG₂细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞的诱导分化

目的:探讨大鼠骨髓间充质细胞向肝细胞祥细胞的诱导分化,观察诱导分化细胞的形态和分子生物学特性,及其对急性肝损伤大鼠的治疗作用.方法:分离、培养并纯化大鼠骨髓间充质细胞.培养基中加入肝细胞生长因子(HGF)、纤维生长因子-4(FGF-4)及上皮细胞生长因子(EOF),分别于7、14、21、28 d观察细胞形态变化,采用RT-PCR方法检测细胞白蛋白(ALB)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、细胞角蛋白-18(CK-18)的mRNA表达.将诱导分化28 d的细胞经DAPI染料染色后,经门静脉注入同种异体大鼠体内,经24、48、72及168 h分批处死大鼠,观察大鼠肝组织内荧光细胞的分布.大鼠腹腔注射硫代乙酰胺制作急性肝衰竭模型,将1×106及5×106个诱导分化细胞经门静脉注入大鼠体内,经48、168 h采血查肝功,168 h处死大鼠,取肝组织病理学检查.结果:大鼠间充质细胞经上述3种细胞因子诱导后,形态和生物学行为方面都发生向肝细胞样细胞方面的转化,经门静脉注入大鼠体内后,有大量该种细胞在肝组织内分布,24 h荧光细胞最多,随时间延长逐渐减少,可持续7 d.骨髓间充质细胞的诱导分化细胞经门静脉注入肝损伤模型大鼠体内后,大鼠肝功能有所好转,注入1×106细胞大鼠ALT由注入前238.0±113.5 U/L,48 h后降至189±68.4 U/L,168 h后降至149.0±54.2 U/L,TBIL由注入前2.9±1.6 μmol/L,48 h至3.0±1.4 μmoI/L,168 h至1.3±0.3 μmol/L;注入5×106个细胞者(ALT)由注入前238.0±113.5 U/L,48 h后降至169.7±46.0U/L,168 h后降至103.7±46.0 U/L,TBIL由注入前2.9±1.6μmol/L,48 h至2.9±1.3μmol/L,168 h至0.9±0.3 μmol/L.结论:大鼠骨髓间充质细胞可在某些细胞因子的诱导作用下发生类肝细胞样转化,将转化细胞经门静脉植入同种异体大鼠体内后可在肝组织内存活并对大鼠肝损伤有一定修复作用.     

Graves病甲亢伴甲状旁腺腺瘤致高钙血症一例

1 病例介绍 患者女,65岁,因"乏力、呕吐、消瘦"于2007年5月4日入院.患者入院前40 d无明显诱因出现乏力、呕吐,伴低热、头痛、头晕、消瘦,体质量下降约20 kg.入院前2 d出现意识模糊,近20 d血压升高.     

流行性出血热患者血清细胞因子相关性研究

目的：明确流行性出血热患者发病过程中细胞因子TNF—α、IL-1、IL-6的动态变化与相关性。方法：75份血清采自住院各病期流行性出血热患者，应用EUSA法检测血清TNF—α、IL-1和IL-6含量，直线相关分析细胞因子间相关性。结果：血清TNF-α与IL-1含量呈明显正相关（γ=0．9270，P〈0．05），血清TNF—α与IL-6含量呈明显正相关（γ=0．8986，P〈0．05），血清IL-1和IL-6水平呈明显正相关（γ=0．9301，P〈0．05）。结论：在流行性出血热发病过程中，炎症细胞因子存在相互促进的作用，以网络形式发挥作用。     

慢性乙型肝炎肝组织ICAM-1、HBsAg、HBcAg的表达及分析

目的探讨ICAM-1、HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎肝组织中的表达及其在发病机制中的意义.方法免疫组化SABC法检测慢性乙型肝炎肝组织中ICAM-1、HBsAg、HBcAg的表达.结果在慢性乙肝中,随着炎症活动度的增高,ICAM-1表达增强,HBcAg表达减弱,HBsAg表达由胞浆显色为主逐渐转为胞膜显色为主.结论肝细胞ICAM-1、HBcAg的表达在慢性乙肝的炎症反应中起重要作用.肝细胞中HBsAg的表达在一定程度上反映了病毒的复制活动.     

戊型病毒性肝炎的免疫指标变化

目的研究戊型病毒性肝炎患者免疫指标的变化,探讨其发病机理。方法流式细胞仪检测细胞免疫指标,散射比浊试验检测体液免疫指标。全自动生化分析仪检测肝功生化指标,观察患者肝功与细胞免疫及体液免疫之间的关系。结果戊型病毒性肝炎患者肝细胞损害程度(ALT、AST、TBil升高程度)与细胞免疫特别CD4 T淋巴细胞有负相关关系,ALT、AST与CD8 T淋巴细胞有正相关,与体液免疫指标(IgG、IgA、IgM、C3、C4)无明显相关。结论戊型病毒性肝炎病情与细胞免疫有相关性,与体液免疫反应无明显相关。     

HBV携带者肝细胞体外培养的研究

目的:体外培养HBV携带者人原代肝细胞,研究细胞内HBV的复制情况及持续时间,为临床抗病毒试验治疗奠定基础.方法:分离HBV携带者人原代肝细胞进行体外培养.14 d后,测绘细胞的生长曲线和细胞核型分析.分别用巢式PCR和ELISA法对细胞匀浆及培养上清液进行HBV-DNA和HBsAg、HBeAg的检测.结果:HBV携带者人原代肝细胞和培养上清液可检测到HBV-rcDNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg.细胞培养3周时开始出现大量死亡.结论:该细胞体外培养期间仍能保持对HBV感染和复制的特性,为体外研究HBV感染情况奠定了基础.     

导入人端粒酶逆转录酶基因致人外周血淋巴细胞长期生存和增殖的研究

用外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因导入正常人外周血淋巴细胞,延长细胞生存期并增强其增殖能力。将含有外源性hTERT基因的质粒导入人外周血淋巴细胞,RT-PCR检测hTERTmRNA在细胞内的表达,间接免疫荧光检测细胞内hTERT蛋白,并观察转染后细胞的生物学特征。结果:RT-PCR检测到转染后细胞内hTERT基因在mRNA水平稳定表达以及胞内存在的hTERT蛋白,细胞生存期延长,增殖旺盛,细胞生物学特征正常。因此,外源性hTERT基因表达可使正常人外周血淋巴细胞生存期延长、增殖旺盛,并保持正常细胞生物学特征。