载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发央RNA(shRNA)表达载体，作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体，观察shRNA对融合蛋白的抑制作用，筛选出有效靶位。方法 利用pAVU6 27质粒，设计并掏建4个shRNA表达载体，与融合表达载体共转染AD293细胞，荧光显做镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用。同时，逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性。结果 成功掏建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体；4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达，其中以579位点最有效，荧光表达抑制率为69．8％，RNA水平抑制率为74．6％。结论 筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位。     

抑制HBV复制的小干扰RNA的重组腺病毒构建与鉴定

目的构建可同时表达绿荧光蛋白（GFP）和针对HBVS区基因的小干扰RNA（siRNA）的重组腺病毒,并研究该siRNA在体外对HBV的抑制作用。方法采用PCR技术自质粒pEGFP-C1中扩增含CMV启动子的GFP表达框,自质粒pAVU6＋4sh579中扩增含U6启动子的针对HBV S 区579-597位基因的siRNA表达框,分别将两个表达框克隆至穿梭载体质粒pShuttle内,与质粒pADEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,将阳性重组体DNA转染至人胚肾细胞株HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中初步观察其对HBV复制的抑制疗效。结果构建了可同时表达GFP和siRNA的重组腺病毒,其可在HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中对HBV-DNA、HBsAg和HBeAg的表达具有抑制作用。结论成功构建了可同时表达GFP和针对HBV的siRNA的重组腺病毒,并在体外实验中证实了其对HBV复制具有抑制作用。     

基于地理信息系统社区结核病规范管理研究

目的:利用结核病地理信息系统为社区卫生服务设计标准化的结核病网络管理程序,实现社区结核病管理规范化。方法:应用地理信息和网络技术,按结核病防治管理规范建立信息系统,实施社区网络联动的结核病重点人群预警、转诊、追踪、督导服药、访视、密切接触者筛查、质量控制和分析评估。结果:信息系统2009-2011年中发出社区结核病预警1 148起,重点人群预警1 114起,发现聚集性事件4起;社区卫生服务中心报告疑似肺结核1 613例,转诊率为99.81%,辖区内患者追踪到位率91.88%;发现涂阳肺结核患者5 559例,筛查密切接触者21 217例,筛查率为98.74%,筛查发现有肺结核可疑症状者236例,患者62例;2008-2010年新发涂阳肺结核患者5 020例,治愈率为91.89%,系统管理率为98.90%。社区信息质量控制结果通过软件生成数据报表和图表。结论:结核病地理信息网络系统应用对社区结核病规范化、智能化和科学化的实时管理提供了有效的支持。     

一起大学校园内诺如病毒ＧⅡ型 胃肠炎暴发的流行病学调查 潘

摘要：为了解杭州市某大学急性胃肠炎暴发疫情波及范围,并确定疾病暴发的病原学病因以及流行病学病 因。根据病例定义开展病例搜索,进行个案流行病学调查。采用描述性流行病学和病例对照研究方法分析 病例发病的危险因素。样本采用ＲＴ ＰＣＲ 检测诺如病毒（ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｅｓ,ＮＶ）核酸。结果显示,２０１４年 １１月２６日～１２月５日西湖区某校共发生诺如病毒胃肠炎病例８２ 例,罹患率为１．１１％;病例主要集中在 １２月１～３日,占总病例数的８０．７２％;病例以学三楼和学二楼为主,占５９．０４％;病例临床表现以呕吐 （６１例,７４．３９％）和腹泻（４４例,５３．６６％）为主。生活用水使用井水的罹患率（１．６４％） 是使用市政自 来水的罹患率（０．２３％）的７．１３倍。病例对照研究结果显示同宿舍或同伴中有同学出现呕吐症状是独立危 险因素（犗犚＝５．０１,９５％犆犐＝１．４４～１７．４５,犘＝０．０１１）。实验室检测结果发现９份患者肛拭子诺如病毒核 酸阳性。根据病例临床表现、流行病学调查以及实验室检测结果判断该起疫情为诺如病毒ＧⅡ 型引起的急 性胃肠炎暴发,暴发的主要原因可能为食用受污染的井水,同时,接触传播也是主要的传播途径。 关键词：诺如病毒;急性胃肠炎;暴发;井水 中图分类号：Ｒ１８３．４　　文献标识码：Ｂ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１７）０１ ００６９ ０３     

杭州市西湖区１例人感染Ｈ７Ｎ９禽流感 死亡病例的调查分析

关键词：人禽流感;Ｈ７Ｎ９亚型;流行病学
中图分类号：Ｒ５１１．７　　文献标识码：Ｂ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１７）０３ ０２４０ ０２     

浙江省杭州市实施第五轮全球基金耐多药结核病防治项目情况分析

为加快结核病控制进程,规范耐多药结核病防治工作,杭州市自2008年10月开始实施第五轮中国全球基金耐多药结核病防治项目,现就项目实施情况分析报告如下。1资料和方法1.1资料第五轮全球基金耐多药结核病防治项目月报表和季报表以及现场督导资料。1.2方法结核病诊治定点机构对耐...     

tRNAval-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用

目的：以tRNA^val-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法：针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位，以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNA^val启动子的shRNA表达框（SEC），分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒（pC-EGFP）共转染AD293细胞，转染后48h，流式细胞术检测融合基因荧光表达情况，半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG2．2．15细胞，72h后放免法检测细胞培养上清HbsAg、HbeAg水平，RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果：共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒（pC-GFP）荧光强度和HBV C mRNA表达，其中SEC-492i抑制效率最佳，而SEC-282i相对较差。选定的492i表达框（SEC-492i）及282ishRNA表达框（SEC-282i），均呈剂量依赖性抑制hepG2．2．15细胞HbeAg分泌和HBV pgRNA水平，其中SEC-492i抑制HbeAg和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282i。结论：在选定的5个siRNA靶位中，以492i靶位RNAi效率最高。tRNA^val-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选，有进一步推广应用价值。     

腺病毒载体在抗HBV基因治疗中的应用

HBV持续感染是导致慢性肝炎后肝硬化、肝细胞癌等疾病的重要原因,尚缺乏能彻底治疗的手段。基因治疗是近年迅速发展的一种治疗HBV感染的方法。理想的基因治疗载体是基因治疗的一个重要方面。腺病毒载体由于其特有的一些优点在抗HBV的基因治疗中受到重视。文中就腺病毒载体在抗HBV基因治疗中的应用作了综述。     

浙江省杭州市肺结核患者耐药监测结果分析

目的了解杭州市耐药结核病疫情现状及特点,为及时调整杭州市结核病控制策略提供依据。方法收集2011年杭州市登记所有涂阳患者痰标本,采用传统生化反应法进行菌型鉴定,采用世界卫生组织推荐的改良罗氏培养基比例法,进行异烟肼(Isoniazid,H)、利福平(Rifampicin,R)、乙胺丁醇(Ethambutol,E)、链霉素(Streptomycin,S)、氧氟沙星(Ofloxacin,O)和卡那霉素(Kanamycin,KM)的药物敏感性试验。利用结核病管理信息系统,收集患者人口学资料。结果全年共报告1845例涂阳患者,开展痰培养并培养阳性1394例,其中菌群鉴定为结核分枝杆菌并有药敏试验结果者1184例。1184例患者中对4种一线抗结核药物(H、E、R、S)的总耐药率为31.33%,总耐多药率为11.57%。广泛耐药率为0.90%,其中耐多药患者中,耐氧氟沙星者占29.93%,耐卡那霉素者占3.65%。一线药物耐药率由高到低依次为H(19.51%)、S(17.15%)、R(16.98%)和E(5.07%),复治患者耐药率明显高于初治患者。结论杭州市耐药结核病疫情相对较重,需进一步研究耐药病例合理的化疗方案,重点加强对初、复治患者的管理,从源头上减少耐多药甚至广泛耐药的发生。     

杭州市西湖区3例人感染H7N9禽流感患者流行病学调查

2013年3—4月开始我国安徽、江苏、浙江、上海等省（市）陆续报告了人感染H7N9禽流感病例,这是全球首次发现人类感染这一亚型的禽流感病毒,引起了世界性广泛关注。为总结在人感染H7N9禽流感防控中的经验教训,现将杭州市西湖区3例人感染H7N9禽流感病例流行病学调查情况报告如下。