梅毒螺旋体、心磷脂IgG抗体检测在梅毒诊断中的应用分析

目的探讨梅毒螺旋体、心磷脂IgG抗体检测在梅毒诊断中的应用价值。方法收集河北燕达医院2017年7月至2018年9月常规人群血清标本24 378例,应用美国雅培Architect i2000全自动化学发光仪,采用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)对24 378例标本进行梅毒血清学筛查测定。对于Architect i2000中S/CO值≥20的强反应性结果,选用梅毒螺旋体凝胶颗粒凝集试验(TPPA)及快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)复检;对于Architect i2000中S/CO值在1～10的弱反应性结果,选用TPPA及西门子ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪化学发光免疫法(CLIA)复检,TPPA阳性标本加做免疫印迹梅毒螺旋体、心磷脂IgG抗体(WB-TP-IgG)复测。结果 24 378例梅毒筛查患者中梅毒特异性抗体阳性294例,非特异性抗体阳性74例,发病人数占人群总数的0.003%(74/24 378);初筛Architect i2000CMIA中S/CO值≥20的反应性结果与复检方法结果比较,257例强阳性反应结果与TPPA结果符合率为100.0%,与RPR结果符合率为28.8%;Architect i2000CMIA初筛S/CO值在1～10的反应性结果193例,选用ADVIA Centaur CLIA和TPPA两种梅毒特异性抗体检测方法复检,TPPA检测阴性结果直接判读,112例TPPA阳性加做WB-TP-IgG复核,比较4种梅毒特异性抗体检测方法,以WB-TP-IgG检测结果为标准,确证试验显示37例为阳性(33%)。结论通过对常规人群梅毒血清学检测方法比较,对于临床弱反应性结果建议直接选用蛋白免疫印迹法WBTP-IgG作为确证试验,避免出现假阳性结果而导致医疗纠纷,同时减少患者心理压力及家庭矛盾。     

A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定

目的:对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位.方法:以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆.结果:dot-ELISA检测结果表明Fba_(100-112)肽段与McAb2的结合能力最强.经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果.阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高.结论:通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100～112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合.为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础.     

血清外泌体Glypican-1在乳腺癌中的表达水平及临床应用价值

目的 探讨乳腺癌血清外泌体Glypican-1（GPC-1）的表达水平及其临床应用价值。 方法 选择河北医科大学第四医院确诊的乳腺癌48例和乳腺良性占位18例，同期健康体检者17名作为健康对照组；采用聚乙二醇8 000沉淀法提取血清外泌体，使用透射电镜和蛋白印迹对外泌体形态和分子表型进行鉴定；Western blot检测各组血清外泌体GPC-1表达水平；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价血清外泌体GPC-1对乳腺癌的诊断效能；以最佳截断值0.961将乳腺癌组分为GPC-1阳性组和GPC-1阴性组，分析其与临床特征的关系；采用Wilcoxon秩和检验分析乳腺癌组治疗前后血清外泌体GPC-1表达变化；以病理诊断为金标准，采用Kappa一致性检验评价血清外泌体GPC-1、血清肿瘤标志物、超声、钼靶射线四种诊断方法对乳腺癌的诊断价值。 结果 乳腺癌组血清外泌体GPC-1表达水平［1.065(0.501)］高于乳腺良性占位组［0.652(0.117)］和健康对照组［0.625(0.139)］，差异有统计学意义（H=32.051，P＜0.05）；ROC曲线下面积为0.900（95%CI:0.833~0.967），最佳截断值0.961，能够有效筛查乳腺癌患者；乳腺癌组中GPC-1阳性在不同TNM分期、淋巴结浸润和Ki-67高表达组间差异有统计学意义（P均＜0.05）；乳腺癌组治疗前血清外泌体GPC-1表达水平［1.065(0.501)］高于治疗20 d后血清外泌体GPC-1表达水平［0.844(0.195)］，差异有统计学意义（Z=856.0，P=0.006）；血清外泌体GPC-1检测方法的Kappa值为0.485>0.4，与病理检查比较一致性中等，且优于其他三种检测方法。 结论 乳腺癌组血清外泌体GPC-1表达上调,且与多个不良临床特征相关，并在治疗后显著下降，具备作为乳腺癌诊断和治疗效果评价指标的潜力。     

假性低血糖1例分析

对假性低血糖1例分析如下. 1 病历摘要 男,85岁.患左肾盂癌及冠心病,脑动脉硬化等多种老年性疾病,无糖尿病史.因腹痛伴有左侧腰部疼痛,急诊入院.入院后,子抗感染、镇痛及其他对症支持治疗.但病情持续进展,先后出现左肩关节,双肺,肝脏先等多器官转移;肺部感染和腹腔积液等,患者病情进行性恶化,终因呼吸循环衰竭,抢救无效死亡.实验室检查:入院时WBC 10.28×109/L,PLT 382×109/L,生化血糖(Glu)4.86 mmol/L.     

A族链球菌表面蛋白Fba单克隆抗体的制备及其对应表位的初步鉴定

目的：制备抗A组溶血性链球菌（GAS）表面蛋白Fba（fibronectin-binding proteins a）的单克隆抗体（mAb）,并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法：以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对Fba的杂交瘤细胞株,以Western blot鉴定mAb的特异性,并将获得的mAb与Fba＋GAS和Fba-GAS分别行全菌ELISA、与Fba的分段表达蛋白行Western blot,初步鉴定mAb针对的表位所在区域。结果：获得了稳定分泌抗Fba-mAb的杂交瘤细胞株,其中一株mAb能特异结合天然Fba＋链球菌,且该单抗针对的表位包含了Fba蛋白的第104-108位氨基酸,该位点也是链球菌Fba蛋白结合补体调节蛋白FH的位点。结论：成功地制备了抗GAS表面Fba蛋白的mAb,其中一株mAb对应的表位为位于菌体表面的天然表位,并检测出了该mAb对应的表位所在区段,这为深入研究GAS的致病机制提供了有力工具。     

人表皮生长因子受体-2及雌激素受体与乳腺癌的关系

乳腺癌与人表皮生长因子受体-2及雌激素受体关系密切,这两种受体也是乳腺癌的分类标准和治疗靶点。在大多数乳腺癌患者中,人表皮生长因子受体-2信号途径和雌激素受体信号途径参与了细胞的增生存活过程。而且在乳腺癌病例中,人表皮生长因子受体-2和雌激素受体呈现出一定程度的负相关。这说明这两种受体活化后有一些联系。本文简要综述了人表皮生长因子受体-2和雌激素受体的联系以及这种联系在乳腺癌治疗中的意义。     

免疫印迹法检测 TPN15，TPN17，TPN45和 TPN47抗体表达在梅毒诊断中的应用评估

目的　通过对4 种血清学梅毒实验方法比对,评估免疫印迹法检测TPN15,TPN17,TPN45 和TPN47 抗体表 达在梅毒诊断中的应用。方法　于2018 年6 月~2019 年6 月,收集河北燕达医院28 417 例梅毒筛查样本,综合化学发 光微粒子免疫（CMIA）检测结果S/CO 值、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）结果及快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 检测结果进行分组,确认实验以梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验（TP-WB）平行测定3 组标本。相关分析采用Pearson r 距离法;数据分类可视化采用主成分分析法。采用Medcalc 软件进行ROC 曲线统计分析,计算曲线下面积,确定 CMIA 法对梅毒诊断效能最大时的S/CO 最佳截断点;不同诊断方法计数资料的比较采用卡方检验。结果　以TP-WB 结果为参照,ROC 曲线分析发现,当CMIA 法S/CO 截断值为 6.79 时,敏感度为 79.41%,特异度为 96.05%,此时曲线 下面积最大为 0.911,即6.79 为 CMIA 法的最佳诊断截断值。TPN15,TPN17,TPN45 及TPN47 抗体表达水平与S/CO 比值均呈正相关（P <0.05）,相关系数r 分别为0.87,0.81,0.87 及0.76。当标本中免疫印迹法检测TPN15,TPN17, TPN45 和TPN47 抗体均阳性且着色强度数值高反应性（50~170）时,四种检测方法阳性符合率、总符合率为100%, 显示评价方法和比对方法具有高度一致性（P ＜ 0.01）。结论　活动性梅毒患者TPN15,TPN17,TPN45 和TPN47 抗 体表达均阳性且着色强度高反应性,梅毒抗体单阳梅毒特异性抗体TPN17 和TPN47 抗体表达减少且抗体着色强度降低, 阳性率显著减少（P ＜ 0.05）。梅毒抗体结果可疑患者中TPN15,TPN17,TPN45 和TPN47 抗体表达明显减少,梅毒 血清CMIA 法筛查S/CO 在6.79 以下时,建议进一步采用梅毒免疫印迹检测法进行确证。     

四种梅毒血清学检测方法在梅毒抗体不确定样本的分析及评价

目的探讨应用于梅毒抗体不确定样本的四种梅毒检测方法的分析及评价。方法纳入于2018年1月～2019年1月期间,河北燕达医院应用美国雅培Architect i2000全自动化学发光仪化学发光微粒子免疫检测法(CMIA),对梅毒筛查结果为1≤S/CO10的弱反应性的190例人群为研究对象,收集患者的临床资料和实验数据,应用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、CMIA梅毒实验室检测方法分别对敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、误诊率以及漏诊率进行分析比对。结果 Architect i2000 CMIA初筛S/CO值1～10反应性结果190例,选用TPPA,RPR及TP-WB三种梅毒检测试验方法复核,对四种梅毒试验检测方法进行比较,以梅毒抗体免疫印迹法(TP-WB)检测结果为确认实验标准,检出56例阳性,134例阴性。确证试验显示为56例阳性(占29.5%)。CMIA与TPPA阳性符合率为75.3%(143/190);TPPA结果与TP-WB阳性符合率为28.4%(54/190),误诊率为66.42%(89/134),漏诊率为3.57%(2/56),阴性预测值为95.74%(45/47),RPR现正感染阳性预测值100%(2/2),阴性预测值为100%(188/188)。结论在梅毒血清临床样本筛查中出现弱反应性结果时,对于检测弱反应性结果不一致的标本应首选用免疫印迹法检测确证,避免临床诊断中漏诊或者误诊发生。     

A族链球菌表面蛋白Fba保护性区段的鉴定

目的 将A族链球菌表面蛋白Fba分段克隆、表达,免疫动物并攻毒,以鉴定各区段诱导的保护性免疫并确定保护性最强的区段.方法 根据Fba蛋白的结构特点将其划分为4个重叠区域,以A族链球菌(GAS)的SSI-9为模板,PCR扩增4段蛋白的基因,克隆、表达后,Western印迹鉴定蛋白表达.4段蛋白纯化后分别免疫小鼠,同时设PBS对照组.ELISA检测各免疫组血清IgG水平,并用致死量的GAS(M+Fba+)攻击免疫3次后的小鼠,计算各组保护率.数据行方差检验和Fisher精确概率法.结果 成功构建原核表达质粒pGEX-2T/FbaAl、pGEX-2T/FbaA2、pGEX-2T/FbaA3和pGEX-2T/FbaA4,成功表达了4段蛋白.Fba蛋白免疫小鼠后,实验组血清IgG随免疫次数的增加呈逐渐增高趋势.第3次免疫后,与PBS对照组比较,FbaA2蛋白组效价升高最为明显,达1∶102 400(F=1290.2,P<0.01).攻毒后,FbaA2蛋白组8只小鼠中有4只得到保护,FbaAl、FbaA3及FbaA4蛋白组各8只小鼠中,仅2只得到保护(P<0.05).结论 成功构建、表达了Fba分段蛋白;初步确定FbaA2段可诱导较强的保护性免疫应答.     

肺癌患者血清 CEA、SCC-Ag、CYFRA21-1及 NSE 与三种肺癌病理分型间的相关性研究

目的：探讨肺癌患者血清肿瘤标志物癌胚抗原（ CEA）、鳞状细胞癌抗原（ SCC-Ag）、细胞角蛋白19片段（ CYFRA21-1）和神经元特异性烯醇化酶（ NSE）与三种肺癌病理分型间的相关性及其临床意义。方法通过统计学方法对56例确诊肺癌患者治疗前的血清癌胚抗原（ CEA）、鳞状细胞癌抗原（ SCC-Ag）、细胞角蛋白19片段（ CYFRA21-1）和神经元特异性烯醇化酶（ NSE）阳性率结合病理分型进行分析。结果癌胚抗原（ CEA）在腺癌组阳性率为65骀．00％,明显高于鳞癌和小细胞肺癌组（ P ＜0．01）;鳞状细胞癌抗原（SCC-Ag）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）在鳞癌组阳性率分别为47．37％、57．89％,明显高于腺癌组和小细胞肺癌组（ P ＜0．01）;神经元特异性烯醇化酶（ NSE）在小细胞癌组阳性率为76．47％,明显高于鳞癌和腺癌组（ P ＜0．01）。结论癌胚抗原（ CEA ）、鳞状细胞癌抗原（ SCC-Ag）和细胞角蛋白19片段（ CYFRA21-1）是较好的非小细胞肺癌肿瘤标记物。癌胚抗原（ CEA）与腺癌之间有明显相关性。鳞状细胞癌抗原（SCC-Ag）和细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）与鳞癌之间有明显相关性。神经元特异性烯醇化酶（ NSE）与小细胞癌有明显相关性。对不宜手术的肺癌患者,四种肿瘤标记物对患者病理分型有较好的提示作用,并能对临床的针对性治疗提供一定的帮助。