癌性胸腔积液端粒酶活性的检测

目的：探讨端粒酶活性水平检测对癌性胸腔积液的诊断价值。方法：采用Telomerase-PCR-ELISA法检测了30例癌性胸腔积液及21例良性胸腔积液的端粒酶活性水平，并与细胞学检查比较结果：癌性胸腔积液端粒酶活性阳性率76．6％，结核性胸腔积液20％（3／15），其他病因胸腔积液0％（0／6），癌性胸腔积液端粒酶活性高于细胞学检查率36．6％（P＜0．005），两者平行试验阳性率83．3％。结论：端粒酶活性的检测可能成为诊断癌性胸腔积液的重要辅助手段。     

人λ-干扰素在BHK-21中的表达及生物学活性的研究

目的:研究HuIFN-λ1和HuIFN-λ2真核细胞重组表达及其生物学活性.方法:用水疱性口炎病毒(VSV)刺激人宫颈癌HeLa细胞, 用RT-PCR克隆HuIFN-λ1和HuIFN-λ2基因, 与PCAGG-EGFP真核表达载体连接, 构建重组体PCAGG-HuIFN-λ1和PCAGG-HuIFN-λ2并进行鉴定, 后在BHK-21细胞进行表达, 采用VSV*GFP于人肺腺癌A549上进行表达产物抗病毒活性测定;并通过已构建的MDBK-Mxp-Luc细胞系对HuIFN-λ1和HuIFN-λ2诱导MxA抗病毒蛋白产生的特性进行研究.结果:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector和HuIFN-λ2-PMD18-T Vector的SacⅠ、XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ双酶切鉴定, 均出现610 bp大小的带, 测序示与GenBank上报道的序列完全一致.PCAGG-HuIFN-λ1活性104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2活性为102 IU/mL, 且PCAGG-HuIFN-λ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失(P＜0.05).结论:成功构建了PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 的真核表达载体并在BHK-21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关.     

老年患者多重耐药鲍曼不动杆菌感染的临床分析

鲍曼不动杆菌是非发酵革兰阴性杆菌,属于住院患者常见致病菌,主要引起呼吸道感染,现已成为医院内获得性肺炎的重要致病菌,尤其是免疫缺陷患者以及ICU病房患者,易感染鲍曼不动杆菌。近年来,随着广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂等广泛应用,多重耐药鲍曼不动杆菌感染率有逐年增加趋势。本文回顾性分析了江苏大学附属医院呼吸内科感染多重耐药鲍曼不动杆菌的老年患者的临床特征,现报道如下。     

锌原卟啉对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的影响

目的观察血红素加氧酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉（Znpp）对博莱霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型病理和病理生理改变的影响，探讨Znpp在BLM诱导肺纤维化发病中的作用。方法健康sD大鼠60只随机分三组：生理盐水（Ns）组、BLM组、Znpp组。气管内注入BLM制作肺纤维化模型。分别在第7天、第14天、第21天和第28天，每组处死5只大鼠，取肺组织HE染色，观察其病理改变；检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及中性粒细胞百分比、转化生长因子-β（TGF—β）和总胆红素含量；检测肺组织中还原型谷胱甘肽（GSH）和羟脯氨酸（HYP）含量。结果病理显示BLM组和Znpp组肺组织在早期炎症阶段两者之间炎症程度无明显差异，但后期肺纤维化阶段时，BLM组纤维化程度显著高于Znpp组。用Znpp干预后没有抑制炎症细胞浸润肺组织，但有效抑制了TGF—β、总胆红素和HYP水平，减少了GSH耗竭。结论应用Znpp可以显著减轻BLM致大鼠肺纤维化，但其作用机制并不通过抑制早期炎症反应，而是通过其抗损伤、抗氧化、抗纤维化机制发挥治疗作用。     

高碳酸血症对急性肺损伤的保护作用及其机制

急性肺损伤（ALI）是全身炎症反应综合征在肺部的表现,可进一步发展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）,其发病机制目前仍不十分清楚,亦无确切有效的治疗方法,其病死率高达30%～40%。高碳酸血症（HCA）是小潮气量（4～6ml/kg）保护性肺通气治疗ALI/ARDS的并发症,现有的研究认为,HCA本身对ALI/ARDS有保护作用,HCA抑制核因子κB（NF-κB）的活化,阻断炎症反应的信号转导和炎症介质的级联反应;抑制活性自由基团的产生,保护组织抗氧化功能,是这种保护作用的重要机制。吸入一定浓度的CO2气体诱导HCA的形成有望成为临床防治ALI/ARDS的新方法,即治疗性高碳酸血症。     

肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL基因的表达

目的:检测大鼠肺纤维化时肺组织细胞凋亡及Fas/FasL 基因的表达,探讨细胞凋亡在肺纤维化过程中的作用.方法:通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR 和Western Blot法检测肺组织细胞凋亡、Fas/FasL mRNA以及蛋白的表达.结果:肺纤维化模型复制成功;模型组肺组织细胞凋亡率、Fas/FasL mRNA和蛋白表达均显著高于对照组.结论:细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的上调在博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的过程中起了重要作用.     

高碳酸血症对大鼠急性肺损伤Na+-K+-ATP酶活性的影响

目的: 研究高碳酸血症(HPC)对急性肺损伤(ALI)时肺泡Na -K -ATP酶活性的影响.方法: 将24只SD大鼠随机分为3组,每组8只:正常对照组(Ⅰ组);ALI组(Ⅱ组);ALI HPC组(Ⅲ组).用0.2 mol/L盐酸(2 ml/kg)气管内滴入建立大鼠急性肺损伤模型,吸入8% CO2气体建立高碳酸血症模型.以肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数和蛋白浓度、肺湿干重比(W/D)、血和BALF中TNF-α浓度及IL-8浓度为评估肺损伤的指标;以Na -K -ATP酶活性变化为评估HPC疗效的指标.结果: Ⅲ组BALF细胞计数(1.02±0.48),W/D(7.24±0.58),BALF蛋白浓度(0.25±0.16)和IL-8浓度(29.95±7.11)比Ⅱ组相应指标(1.79±0.73;8.60±1.24;0.53±0.35;59.52±36.00)明显降低(P＜0.01);Ⅲ组血TNF-α浓度(83.86±46.93)、IL-8浓度(80.00±24.72)比Ⅱ组相应指标(161.57±54.12;110.00±15.92) 明显降低(P＜0.01);Ⅲ组Na -K -ATP酶活性(13.23±1.20) 比Ⅱ组(10.77±2.21)明显增高(P＜0.01).结论: HPC对ALI时肺泡Na -K -ATP酶的活性有保护作用, 这可能是HPC对盐酸诱导的大鼠ALI保护作用的重要机制.     

TIL细胞对不同肿瘤细胞的细胞毒活性研究

B7分子是提供协同刺激信号的重要分子，包括B7－1（CD80）、B7－2（CD86），其相应配体为CD28、CTLA－4。B7－1分子与CD28结合后能诱导协同刺激信号的产生，癌性胸水来源的淋巴细胞体外用重组人IL-2（rhIL－2）激活后，对肿瘤细胞也具有较强的细胞毒性；也被认为是一类TIL。本文观察了B7分子在TIL细胞的细胞毒中的作用，发现B7－1基因转化MDA-453肿瘤细胞后，能增强TIL细胞对此转化肿瘤细胞的细胞毒活性。     

尿激酶对肺纤维化干预作用及对MMP-9和TIMP-1的影响

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)对肺纤维化的干预作用和对MMP-9/TIMP-1的影响.方法:SD雄性大鼠45只,随机分成3组:干预组(博莱霉素 尿激酶)、模型组(博莱霉素 生理盐水)和对照组.所有大鼠第28天处死.经HE、Masson胶原染色评价肺组织肺泡炎和肺纤维化程度.酶联免疫吸附法( ELISA)检测肺泡灌洗液中MMP-9、TIMP-1含量.结果:(1)肺泡炎程度评价:模型组为(1.7±0.6)分,干预组为(0.9±0.7)分,对照组为(0.2±0.4)分,模型组与干预组、对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)肺纤维化程度评价:模型组为(2.0±0.8)分,干预组为(1.1±0.7)分,组间差异有统计学意义(P＜0.01).(3)TIMP-1含量:模型组(1 240.8±90.3) pg/ml,对照组(1 078.3±31.6)pg/ml,干预组 (1 163.6±69.6) pg/ml,模型组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);模型组与干预组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:尿激酶能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能是通过抑制TIMP-1途径起作用.     

重组鼠IL-28的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的: 获取重组鼠IL-28(mIL-28)纯化蛋白,制备多克隆抗体.方法: 用PCR技术扩增鼠IL-28成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-30,构建融合表达载体pET-30a-mIL-28,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达IL-28融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后免疫6～8周龄鸡,制备多克隆抗体,采用ELISA 检测抗体效价.结果: 成功构建了表达载体pET-30a-mIL-28,DNA序列测定结果与预期结果一致.在37℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-28融合蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,发现其与融合蛋白的理论计算值一致,免疫鸡后收获抗血清, ELISA 显示抗体效价具有高度特异性.结论: 获得了重组鼠IL-28纯化蛋白,制备了鼠IL-28多克隆抗体,为进一步深入研究IL-28的生物活性及其应用打下基础.