携带抗P-选择素单抗靶向微泡和对比超声评价肾缺血再灌注损伤

目的探讨携带抗小鼠P-选择素单抗的靶向超声微泡（MBp）和对比超声（CEU）评价肾缺血再灌注损伤的可行性。方法12只实验小鼠随机均分为2组：缺血再灌注（IR组）和假手术组（SH组）,应用＂亲和素-生物素＂桥连法构建MBp。所有小鼠分别随机（间隔30min）经静脉弹丸注射给予普通脂质微泡（MB）和MBp,10min后行肾CEU检查,测量肾显影的声强度（VI）,最后进行肾组织免疫组化检测。结果第一帧CEU图像显示MBp及MB在IR组缺血再灌注肾分别可见显著及轻度的超声显影,而两者在SH组假手术肾均无明显的超声显影。VI值在IR组MBp较IR组MB及SH组MBp均明显增大（P〈0.05）;而在IR组MB较SH组MB轻度增大（P〈0.05）。免疫组化检测显示缺血再灌注肾血管内皮P-选择素表达较假手术肾明显增加。结论应用MBp行CEU检查可有效评价小鼠肾缺血再灌注损伤,将可用于评价微血管炎症或相关的血管内皮反应。     

亲和素桥连构建携抗P选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定

目的 体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的町靠性.方法 不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照.结果 加入FITC荧光亲和素孵育,生物紊化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级).以两个浓度梯度(1:4和1:16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1:4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级).结论 抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法.     

建立大鼠提睾肌微动脉血栓模型的一种新方法

目的 通过光化学法建立一种新的和临床病理机制相似的大鼠提睾肌微动脉血栓模型.方法 15只SD雄性大鼠,分为5组,以提睾肌微动脉为靶血管,分别通过股静脉注入0.2～0.6mL的异硫氰酸荧光素-右旋糖苷(FITC-dextran),以落射荧光显微镜100W汞灯经蓝光照射靶位置,同时在显微摄像系统观察血栓形成的情况和测量不同时间点血管的狭窄程度.结果 在照射时间为3、6、9min时,0.4～0.6mL组比0.2mL、0.3 mL组的血管狭窄程度更严重(P<0.05);除0.2 mL组外其他组均可形成血管闭塞,0.4～0.6 mL组的血管完全闭塞时间明显少于0.3mL组(P<0.01).结论 静脉注射FITC-dextran经光化学法建立大鼠提睾肌微动脉血栓模型是一种简单、可靠的方法 ,为微循环实验提供了一个新的方法 .     

超声造影评价多巴胺对肾血流灌注的影响

目的 应用超声造影(CEUS)定量评价多巴胺对肾血流灌注的影响.方法 分别在基础状态及3种不同剂量(3,8和16μg·kg-1·min-1)的多巴胺作用下,对10只实验犬行CEUS检查.CEUS采用经静脉微泡连续输注法进行,评价肾皮质与肾髓质的平台声强度(A),造影剂再充填速率(β)和A·β.结果 在低、中剂量多巴胺作用时,肾皮质的β值和A·β值较基础状态明显增加,且随剂量的增加而增加越多(P＜0.05);在高剂量多巴胺作用时,β值和A·β值较基础状态也有明显增加(P＜0.05),但与低、中剂量多巴胺相比,增加程度减少(P＜0.05);而肾皮质的A值仅在中等剂量多巴胺作用时较基础状态有明显增加(P＜0.05);3种剂量多巴胺作用下,肾皮质的β值与A·β值之间有良好的正相关(r=0.85,P＜0.05).3种剂量多巴胺作用时,肾髓质血流灌注各参数变化与相应肾皮质血流灌注各参数的变化相似;各参数的肾皮质/肾髓质比值与基础状态时相应各参数肾皮质/肾髓质比值间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 多巴胺作用下肾皮质与肾髓质血流量增加主要是由于红细胞在毛细血管中流动速度的增加所致;CEUS能准确地定量评价肾血流量.     

携IgG单抗靶向超声造影剂的构建及其靶向效能的体外评价

目的 构建携羊抗小鼠IgG单抗靶向超声造影剂(UCA-IgG)及体外评价其靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建UCA-IgG,体外荧光法鉴定IgG单抗与生物素化造影剂特异结合.利用平行板流动腔在不同时间点、不同浓度小鼠IgG包被和不同剪切应力下,测定相应的UCA-IgG的结合数目及达到半数解离时的剪切应力.设不同浓度小鼠包被的平行板流动腔为实验组,羊抗小鼠IgG封闭组和空白组为对照组.结果 UCA-IgG发出明亮的绿色荧光,而普通脂质造影剂无荧光显示.实验组UCA-IgG结合数量随包被浓度的增高而增加(P<0.05),并与结合时间呈明显正相关(P<0.05),然而与剪切应力呈现双向性(P<0.05).而两对照组均未见明显的UCA-IgG结合.UCA-IgG达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大(P<0.05).结论 在不同血流动力学条件下UCA-IgG可与小鼠IgG特异有效结合,携羊抗小鼠IgG单抗造影剂可为其他特异靶向超声造影剂的体外研究提供有力的支持.     

组织多普勒定量评价高血压与冠心病伴或不伴左室肥厚患者心脏舒缩功能

目的　评价高血压与冠心病伴或不伴左室肥厚患者心脏舒缩功能,以及DTI评价高血压与冠心病左室舒张功能的准确性。方法 对正常人组(n=15例),高血压组（n=30例,15 例非左心室肥厚（non-LVH）和15例左心室肥厚（LVH）) 及冠心病组（n=33例,15 例非左心室肥厚（non-LVH）和18例左心室肥厚（LVH）)分别测量:① 二尖瓣口舒张早期充盈速度(E) 和舒张晚期充盈速度(A); ② 二尖瓣环心肌组织等容收缩期峰值速度（Vs）、舒张早期峰值速度（Ve）和舒张晚期峰值速度（Va）,以及用猪尾导管直接测量LVEDP。结果　与对照组相比,高血压组和冠心病组Ve/Va、E/A均显著减小（P＜0.05）;冠心病LVH组的Ve/Va、E/A与高血压LVH组的比较无明显差异（P＞0.05）,而冠心病non-LVH组的Ve/Va、E/A比高血压non-LVH组的均减小（P＜0.05）。冠心病组的Vs明显低于对照组和高血压组的Vs（P＜0.05）,而对照组和高血压组的Vs比较则无明显差异（P＞0.05）。Ve/Va与LVEDP的相关性高于E/A与LVEDP的相关性。结论　高血压和冠心病患者伴或不伴左室肥厚均存在左室舒张功能降低,然而左室收缩功能降低仅见于冠心病患者,DTI是评价左室舒张功能的良好方法。     

靶向超声造影成像的研究进展

靶向超声造影成像是一门新兴的将超声造影技术与靶向超声微泡造影剂相结合,对体内组织器官微观病变进行分子水平探测与成像的方法.靶向超声造影是目前超声造影的前沿性课题,随着超声造影剂在临床的不断应用与实践,使得超声诊断学与治疗学发生了跳跃式的前进.     

流式细胞术定量评价携抗P-选择素单抗靶向超声微泡配体结合效率

目的 流式细胞术定量评价应用生物素(B)-亲和素(S)-生物素(B)桥连技术构建的携抗P-选择素靶向微泡(MB-BSBp)的配体结合效率.方法 以未标记荧光的MB-B作对照,用不同荧光物质分别标记MB-BSBp不同部位, 应用流式细胞仪分析各组微泡的荧光强度并定量配体结合率.C57小鼠8只建立肾脏缺血再灌注模型载体评价靶向微泡成像质量.结果 MB-B与FITC-streptavidin的结合率达99%;DTAF-二抗与MB-BSBp的结合率为(59.66±2.30)%,明显高出荧光二抗与MB-BS和MB-B的结合,比率分别为(29.87±1.68)%和(26.50±3.86)%(P<0.05).结论 抗P-选择素单抗通过生物素桥连法有效装配在MB-B表面,流式细胞术可能是定量评价靶向微泡配体结合效率的有效方法.     

携IgG单抗靶向超声造影剂的构建及其靶向效能的体外评价

Objective To construct targeted ultrasound contrast agent carried goat anti-mouse IgG antibody (UCA-IgG) and evaluate the effectiveness of its targeted adhesion using parallel plate flow chamber. Methods The ultrasound contrast agent targeted to mouse IgG was designed by conjugating monoclonal antibodies against mouse lgG to the lipid monolayer shell of the agent using biotin-streptavidin. The binding of IgG antibodies to the ultrasound contrast agent were identified by fluorescence in vitro. The attachment and detachment of UCA-IgG to mouse IgG immobilized on a culture dish were assessed in a parallel-plate flow chamber. While the plate lacked mouse IgG,or blocked with large number of goat anti-mouse IgG were served as two control groups. Results UCA-IgG issued a bright green fluorescence, while the contral lipid ultrasound contrast agent didn't show fluorescence. The number of UCA-IgG bound to mouse IgG of experimental group was greater than two control groups,increased with increasing coverslips surface antibody concentrations (P<0. 05),and there was significant positive correlation between the number of UCA-IgG bound to mouse IgG and time of combination (P<0.05). The adhesion rate of experimental group increased with shear stress before 0. 5×10-5 N/cm2 (P<0.05) and then decreased (P<0. 05). There was limited adherence of control groups to the UCA-IgG. The stess of half-maximal detachment was increased with increasing coverslips surface antibody concentrations (P<0.05). Conclusions UCA-IgG could adhere to mouse IgG in the physical conditions. It may provide strong supports for studying other targeted ultrasound contrast agent preliminary and fatherly in vitro.     

组织多普勒成像定量评价左室舒张功能

目的 应用组织多普勒成像技术(DTI)与左室舒张末压(LVEDP)对比评价左室舒张功能,探讨DTI评价左室舒张功能的临床价值.方法 选取33名患者,分为左室肥厚组(LVH)与非左室肥厚组(non-LVH),另选取15名健康人作为对照组,分别行超声多普勒及DTI检查,多普勒超声测量二尖瓣口舒张早期充盈速度(E)和舒张晚期充盈速度(A)及E/A,DTI模式测量二尖瓣环舒张早期运动速度(Ve)、舒张晚期运动速度(Va)和Ve/Va,以及用猪尾导管直接测量LVEDP.结果 实验组Ve/Va和E/A均比对照组显著减小(P<0.05),且LVH组Ve/Va比non-LVH组减小更为显著(P<0.05),而LVH组E/A与non-LVH组相比差异无显著性(P>0.05).LVEDP与Ve/Va、E/A呈负相关(r分别为-0.92和-0.79,P<0.05),室间隔厚度(IVSd)与ve/Va、E/A呈负相关(r分别为-0.67和-0.49,P<0.05),Ve/Va与LVEDP的相关性高于E/A与LVEDP的相关性.结论 DTI可作为评价左室舒张功能的可靠方法.