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1.
目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游,脂质体转染COS-7细胞,G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误,转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光,特征性地分布于细胞质膜,及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征,为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。 相似文献
2.
含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原,研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用[^3H]-TdR掺入法研究CpG ODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ELISPOT和[^3H]-TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应。结果 ODN1826在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖,经4次免疫,在“肽+ODN1826+IFA”组中,4 相似文献
3.
小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达 总被引:6,自引:1,他引:5
目的 克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的PIA基因以制备肿瘤DNA疫苗,方法 用RT-PCR方法制备PIA基因,以哺乳细胞高效表达质粒pCI-neo为载体,构建重组DNA疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的T7和T13启动了序列为测序引物,用自动测序仪测定鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化293细胞,用RT-PCR法鉴定转化细胞中PIA基因的表达。结果 正确构建了PIA/pCI-n 相似文献
4.
20 0 2年 3月以来 ,我们对肾输尿管结石行体外冲击波碎石 (ESWL)的患者 ,在西医总攻疗法的基础上加用三金汤加减治疗 ,效果满意 ,现报道如下。1 临床资料治疗组 4 8例 ,男 30例 ,女 1 8例 ;年龄 1 8~ 6 2岁 ,平均年龄 34.2± 2 .5岁 ;病程 2~ 1 0 8d,平均 30 d;肾结石 6例 ,输尿管结石 1 2例 ,肾结石合并输尿管结石 30例 ,合并肾积水 4 5例 ;结石直径 0 .6± 2 .5 cm。对照组 32例 ,男 2 0例 ,女 1 2例 ;年龄 1 4~ 5 6岁 ,平均年龄 2 9.2± 2 .5岁 ;病程 4~ 96 d,平均2 7d;肾结石 9例 ,输尿管结石 1 0例 ,肾结石并输尿管结石 1 3例 ,… 相似文献
5.
6.
目的优化纯化HBV患者血清中HBV颗粒的技术方法。方法在蔗糖介质中,分别以100 000 g和70 000 g进行不连续蔗糖梯度(60%,45%,35%,25%,15%)离心5 h,离心后,分段吸取6份收集液,PCR荧光定量检测各组分HBV滴度;收集前5份收集液进行超滤,去蔗糖,PCR荧光定量检测HBV超滤液;电镜观察70 000g纯化后的HBV超微形态;70000 g纯化后的HBV颗粒感染树鼩肝细胞,检验70 000 g纯化后的HBV感染活性。结果100 000 g离心造成大量HBV在离心过程中损失,收获率只有21%,70 000g离心不仅降低了离心中的病毒损失,而且可有效对HBV和血清进行分离,收获率达到78%以上,较100 000g还提高3.7倍多。电镜可观察到纯化后病毒液中有大量的病毒颗粒;纯化后的HBV颗粒感染活性良好,可有效感染原代树鼩肝细胞。结论70 000 g不连续蔗糖梯度离心可有效分离纯化HBV病毒,较100 000 g收获率明显提高,纯化后的HBV不但具有典型的HBV特征,还具有良好的生物学感染活性。 相似文献
7.
目的 构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法.方法 构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与,12细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位.结果 构建了B2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定.结论 β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定. 相似文献
8.
目的:鉴定乳腺癌分化肿瘤抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。方法:采用量化基序法初步预测NYBR-1的HLA-A2限制性CTL表位;分子动力学方法进一步筛选量化基序法中评分最高的3个表位肽;HLA-A2亲合力鉴定预测的结果。结果:分子动力学和HLA-A2亲合力实验均证明,在量化基序法预测的3个候选CTL表位中,NY-BR-11043-1051与HLA-A2亲合力最佳。结论:NY-BR-11043-1051可能为乳腺癌分化抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。 相似文献
9.
目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD27和CD28的表达,初步探讨其分化表型。方法采集分离健康人和慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC),利用多种荧光标记抗体标记细胞表面分子,再用流式细胞仪检测CD8 和CD4 T淋巴细胞表面CD27和CD28分子的表达。结果31例慢性乙型病毒性肝炎患者CD8 CD27 CD28 T细胞占CD8 T细胞(41.13±24.89)%,低于28例健康对照组的(71.93±14.47)%(P<0.05)。而CD8 CD27-CD28-T细胞占CD8 T细胞(42.16±10.98)%,显著高于健康对照组的(9.16±5.24)%(P<0.01)。慢性乙型病毒性肝炎患者CD4 CD27 CD28 T细胞(80.89±7.93)%和健康对照组(83.17±8.31)%比较,差异无统计学意义。结论健康人外周血T淋巴细胞以CD27 CD28 早期分化表型为主。而慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中不同的亚群分化特征又有所不同,CD4 T淋巴细胞的分化表型仍然以CD27 CD28 早期分化表型为主,而CD8 T淋巴细胞中早期分化表型明显减少,晚期分化表型(CD27-CD28-)显著增加。 相似文献
10.
酮内酯作为第3代大环内酯类抗生素,不仅对耐药菌有良好的活性,而且克服了诱导耐药性,成为了大环内酯类药物的研究热点。针对6-O-芳基酮内酯衍生物,本文运用二维定量构效关系(2D-QSAR)和分子全息定量构效关系(HQSAR)两种方法,以49个化合物作为训练集构建构效关系模型。所建2D-QSAR和HQSAR模型的相关系数r2分别为0.849和0.975,交叉验证系数q2分别为0.803和0.926。通过测试集验证表明所建模型均具有较好的预测能力(r2分别为0.782和0.878)。研究结果可为大环内酯类抗生素药物进一步的优化设计提供理论指导。 相似文献