临床生物化学和生物化学检验在教学中实施设计性、开放性、综合性实验课的重要性

<正>临床生物化学和生物化学检验是医学检验专业的一门理论性和实践性都很强的重要专业学科。临床生物化学实验课是生物化学教学过程中的重要环节,它在培养学生的综合能力和提高综合素质上具有不可替代的作用。但是,传统的临床生     

多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中8内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K—B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测口内酰胺类耐药基因。结果47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和0XA51的阳性率分别为91．5％（43株）、93．6％（44株）、93．6％（44株）和95．7％（45株）。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对8内酰胺类抗生素耐药可能与8内酰胺类耐药基因的表达相关。     

婴幼儿反复呼吸道感染与血清免疫球蛋白及补体水平关系的探讨

目的:探讨婴幼儿反复呼吸道感染(RRI)与机体免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)及补体(C3、C4)水平的关系。方法:采用免疫比浊法对100例RRI患儿和100例正常对照组进行血清IgG、IgM、IgA、C3、C4水平检测。结果:RRI患儿组IgG、IgA水平明显低于正常对照组(P<0.01);C3水平明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:RRI患儿存在免疫功能异常,IgG、IgA、C3的检测可作为RRI的实验室诊断指标,同时对RRI快速诊断治疗和预后有重要的临床价值。     

婴幼儿反复呼吸道感染与血清免疫球蛋白及补体水平关系的探讨

目的：探讨婴幼儿反复呼吸道感染（RRI）与机体免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）及补体（C3、C4）水平的关系。方法：采用免疫比浊法对100例RRI患儿和100例正常对照组进行血清IgG、IgM、IgA、C3、C4水平检测。结果：RRI患儿组IgG、IgA水平明显低于正常对照组（P〈0．01）；C3水平明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论：RRI患儿存在免疫功能异常，IgG、IgA、C3的检测可作为RRI的实验室诊断指标，同时对RRI快速诊断治疗和预后有重要的临床价值。     

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用KB纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮一舒巴坦有较高的敏感率（33．3％）,对其他抗菌药物的敏感率均较低（20．0％）。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac（3）-I、aac（6’）Ib、aph（3’）-I和16SrRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72．2％（26株）、72．2％（26株）、80．6％（29株）和80．6％（29株）。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。     

耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因分子流行病学研究

目的 了解临床分离的92株耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因存在状况以及其基因进化分析.方法 92株耐药鲍曼不动杆菌分离自某省级医院痰液标本,药敏纸片法检测其药物敏感性,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析ADC型β-内酰胺酶基因.结果 92株鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、左氧氟沙星、米渃环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为:91.3％、91.3％、91.3％、89.1％、89.1％、90.2％、67.4％、83.7％、58.7％、84.7％; ADC型β-内酰胺酶的阳性率为93.5％; ADC型β-内酰胺酶基因分子进化显示,可分为4个簇群.结论 ADC型β-内酰胺酶基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中广泛存在,这有可能是造成青霉素、第一至第三代头孢类药物和单环类β-内酰胺类药物耐药的主要原因.     

LPS诱导心肌成纤维细胞HMGB1的释放与Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白分泌的相关性研究

目的:探讨小鼠心肌成纤维细胞(CFs)在LPS刺激下高迁移率族蛋白(HMGB1)释放与Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的相关性。方法:从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用LPS(500 ng/mL)刺激0,6,12,24,36,48 h后收取细胞及其上清。采用RT-PCR检测HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,通过Western blot检测细胞及其培养上清中HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;采用免疫荧光分析HMGB1在细胞内的定位。结果:LPS刺激CFs 6 h时HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平无明显变化,12、24、36、48 h后HMGB1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量均增加。Western blot检测发现,LPS刺激CFs 24 h后细胞上清可检测到HMGB1蛋白,且细胞中HMGB1的表达呈现先增加后降低的现象。免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着从细胞核到细胞质的转位过程。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的Western blot结果均呈现增加趋势。结论:LPS刺激CFs后HMGB1由细胞核转移到细胞质并可主动分泌到胞外,其作用呈现一定的时间依赖性。与心肌纤维化密切相关的Ⅰ、Ⅲ型胶原在LPS刺激后表达量明显增加,提示内源性HMGB1的定位及分泌可能与脓毒症引起的心功能紊乱后期的心肌纤维化可能有一定的关系。     

鲍曼不动杆菌多重耐药性与外排泵机制研究

目的分析江苏大学附属医院鲍曼不动杆菌外排泵对其耐药性形成的作用。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院住院患者44株鲍曼不动杆菌。应用K-B纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对抗生素的敏感性。经Realtime PCR法检测外排泵基因ade B m RNA水平。扩增外排泵调控基因ade R和ade S全长片段并测序比对。结果在44株鲍曼不动杆菌中,27株为多重耐药株且对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素较为敏感。耐药菌株ade B m RNA表达水平明显高于敏感株,且发现ade R的2639位碱基发生A→G突变,其对应的219位氨基酸则呈现AAA(赖氨酸)→GAA(谷氨酸)改变,而ade S无有义突变。结论鲍曼不动杆菌的多重耐药性可能与ade ABC外排泵系统的过表达相关,且其表达可能与调控基因ade R的突变相关。     

青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用

目的合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用。方法以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况。MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响。用终浓度为(0、1、2、5、10)μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24 h,再加终浓度为1μg/kg的LPS刺激6 h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平。结果成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达。结论青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的。     

多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因的分析

目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)的耐药性,并分析其相关耐药基因tetA,tetB,sul1,dfrA,mdfA。方法 2012年8月至2013年3月江苏省镇江市第一人民医院住院患者的痰液标本中分离得到的MDR-AB菌株50株。应用纸片扩散法检测对抗菌药物的敏感度。采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因tetA,tetB,sul1,dfrA1,mdfA。结果 50株MDRAB对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为38%、64%、40%、50%,对其他参与试验的8种常见抗菌药物的耐药率均大于或等于94%。50株MDR-AB中检测到tetB、sul1和mdfA基因的表达,阳性率分别为70%、95%和45%。结论该研究中MDR-AB多重耐药情况比较严重,MDR-AB对四环素、复方磺胺甲噁唑类抗菌药物耐药与tetB、sul1及广谱抗菌药物外排泵基因mdfA等的表达密切相关。