急性脑挫伤患者脑脊液神经元特异性烯醇化酶的变化及意义

目的 :探讨急性脑挫伤患者脑脊液中神经元特异性烯醇化酶 (Neuron -specificenolase,NSE)的变化。方法 :用放射免疫双抗体夹心法对 2 4例广泛脑组织挫伤组 ,30例局部脑挫伤及正常对照组脑脊液NSE含量进行测定。并测定各组冬氨酸转氨酶 (Aspartatetranscarbamoylsse ,AST)水平。结果 :弥漫性脑挫伤患者脑脊液NSE浓度为 (2 5 .43± 5 .6 1)ng/ml,局灶性脑挫伤组为 (14.6 1± 7.5 2 )ng/ml,对照组为 (7.81± 3.2 1)ng/ml,脑挫伤组明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且弥漫性脑挫伤组与局灶性脑挫伤组差异显著 (P <0 .0 5 )。脑挫伤组中AST明显高于对照组 ,但AST在广泛脑挫伤组与局部脑挫伤组中无明显差异。结论 :急性脑挫伤患者的NSE、AST水平升高 ,且NSE与脑挫伤体积相关 ,NSE可反映挫伤及其严重程度     

抑制Blimp-1表达导致浆细胞去分化

目的探讨转录因子Bhmp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siRNA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1、J-chain、c-myc、BCMA的变化。结果Blimp-1抑制后,浆细胞表面标志CD138表达显著下降,B淋巴细胞免疫标志CD19表达增加。同时,与浆细胞功能及存活密切相关的XBP-1、J-chain、BCMA基因表达下降,而促进B淋巴细胞增殖发育的c-myc表达上升。结论浆细胞中Blimp-1被抑制后,浆细胞发育程序出现再编程,发生了去分化现象,返回到更早期的发育阶段,提示Blimp-1特异性shRNA有可能用于浆细胞相关疾病的治疗。     

系统性红斑狼疮患者静脉血BCMA和CD138~+浆细胞的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康者静脉血B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)表达和CD138+浆细胞数量的差异。方法将40例SLE患者血液标本作为SLE组,30例健康人血液标本作为对照组,采用荧光定量实时聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测BCMA的表达,流式细胞技术检测静脉血CD138+浆细胞数量。结果 SLE组患者静脉血中BCMA mRNA水平、蛋白含量以及CD138+浆细胞的数量明显高于对照组(P<0.05)。结论 SLE患者中浆细胞数量的增多可能与BCMA高表达相关。     

慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA, shRNA)对宫颈癌Caski细胞中人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)16型E6表达的抑制作用.方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经限制性酶切鉴定和测序后,与3种包装质粒混合,以Lipofectamine 2000包裹后转染293FT细胞,72 h后收取含病毒的上清液并感染宫颈癌Caski细胞,感染48 h后加入G418筛选阳性克隆.每天对阳性细胞克隆进行细胞计数;提取细胞总mRNA,进行RT-PCR反应.结果与对照组相比HPV16型E6的表达降低70%,宫颈癌Caski细胞生长速度减慢50%.结论慢病毒携带的短发夹状干扰RNA能干扰宫颈癌细胞中HPV16型E6的表达并有抑制癌细胞生长的作用.     

结核感染患者外周血中性粒细胞自噬水平的研究

目的探讨结核感染患者外周血中性粒细胞自噬水平。方法根据结核病诊断标准,将患者分为健康对照组(16例)和活动性结核组(24例),收集患者外周血,采用流式细胞技术分别检测健康对照组和活动性结核组中性粒细胞和单个核细胞的自噬状态。分离外周血中性粒细胞,采用Trizol法提取总RNA,经逆转录实时荧光定量PCR,利用2-△△Ct计算Beclin1表达的相对定量。结果活动性结核组与健康对照组年龄差异无统计学意义(P=0.165 5,P0.05);活动性结核组男性比例(79.2%)明显高于健康对照组(37.5%)。活动性结核组中性粒细胞自噬水平显著低于健康对照组(P=0.013 8,P0.05),而单个核细胞两组差异无统计学意义(P=0.784 2,P0.05);活动性结核组中性粒细胞Beclin1△Ct=-1.254±0.40明显低于健康对照组△Ct=-0.105±0.48,差异有统计学意义(P0.001)。结论结核感染患者外周血中性粒细胞的自噬水平降低,且自噬相关基因Beclin1mRNA的表达下调,中性粒细胞的自噬水平可能与结核病的发生、发展密切相关。     

Taqman技术定性检测主要性病病原体的临床评价

目前对性传播疾病主要病原体淋病奈瑟菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)和解脲脲原体 (ＵＵ)的病原检测 ,主要采用培养法和常规聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术。本试验采用Ｔａｑｍａｎ技术对临床标本中ＮＧ、ＣＴ及ＵＵ进行定性检测 ,并与培养法和常规ＰＣＲ方法比较 ,评价Ｔａｑｍａｎ技术在性病病原体定性检测中的临床应用价值。一、材料与方法1 .仪器试剂 :ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ热循环仪系罗氏公司产品 ;ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ所用引物及Ｔａｑｍａｎ探针由上海生工生物工程有限公司合成。2 .标本来源与分类 :2 0 0 1年 1～ 6月四川大学华西医院泌…     

重庆地区地中海贫血基因突变类型分析

目的了解重庆地区地中海贫血患者基因突变类型及分布,以指导优生优育。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和膜杂交术,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因检测。结果 2012年9月至2013年9月共检出349例地中海贫血患者,其中α-地中海贫血患者125例,α-地中海贫血患者的基因突变类型以缺失为主,缺失类型主要为东南亚型缺失--SEA/αα(占73.60%)和右侧缺失-3.7/αα(占19.20%)。检出β-地中海贫血患者211例,基因突变热点分别为CD17(A→T)(29.38%)、CD41-42(-TCTT)(28.91%)、IVS-Ⅱ-654(C→T)(27.49%)。α-地中海贫血兼β-地中海贫血13例。结论了解重庆地区地中海贫血基因突变类型及分布可以为该地区地中海贫血的遗传咨询和临床诊疗提供有价值的信息。     

建立检验医学实习带教新模式的探索

临床实习是医学检验教学工作中理论联系实际的重要阶段，因为这个阶段是理论阶段与临床工作的桥梁。在此阶段医学生能够把所学的理论知识与临床紧密相结合，使理论知识直接应用于临床，专业知识得到了有效的巩固与提高。在此过程中，医学生逐渐锻炼了分析问题、解决问题的能力，毕业后能够独自担当检验师的工作。但随着临床检验医学的发展，临床检验工作的内涵发生了改变，现代化仪器在检验科的大量投入使用，使检验工作者的工作任务和工作形式发生了根本变化，因而对检验医学实习生的带教也要随之发生改变，要求对其内涵重新认识，培养实习生多样化的专业技能。现将本科室几年来带教实习生的探索模式总结如下。     

抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建

目的:构建抑制增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的慢病毒表达载体。方法:选取EGFP的19nt特异性序列,构建针对EGFP的shRNA,用XbaⅠ、XhoⅠ双酶切后定向克隆到慢病毒表达载体pLL3.7中,用包装的慢病毒液感染细胞,用荧光显微镜观察EGFP基因在不同细胞的表达情况。结果:干扰序列正确克隆至含U6启动子的慢病毒载体中,慢病毒感染Hela及J558L细胞后,可有效抑制细胞中EGFP的表达。结论:构建的慢病毒系统有效抑制了EGFP的表达,为后续的基因功能研究提供了有利工具。     

5＇-核苷酸酶的测定及临床意义

目的对5＇-核苷酸酶（5＇-NT）与碱性磷酸酶（AIJP）进行测定,探讨5＇-NT在肝胆疾病与骨科疾病中诊断与鉴别诊断的应用。方法选择2012年1—2月健康体检者30例为对照组,另选择2012年1—5月在肝胆外科住院患者48例（各类肝胆疾病组）和骨科住院患者15例（骨病组）,测定三组受试人员5＇-NT与ALP水平。结果各类肝胆疾病组患者的5＇-NT、AIJP水平显著高于骨病组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论5＇-NT是诊断肝胆疾病的特异性指标,与ALP联合应用可鉴别诊断肝胆疾病与骨骼疾病。