结核病人外周血T辅助细胞含量分析

目的分析结核病患者Th细胞含量变化与结核分枝杆菌感染的关系。方法抽取肺结核患者、肺外结核患者、肺癌患者和健康人2ml肝素钠抗凝静脉血,按说明书进行胞内和膜表面分子染色,染色的细胞经流式细胞仪分析分泌IL-17、IFN-γ、IL-4阳性的T细胞和CTLA-4、PD-1阳性的T细胞。结果肺结核、肺外结核和肺癌组Th17细胞含量高于健康组、Th2细胞含量低于健康组、Th1细胞含量呈下降趋势,但与健康组比较差异无统计学意义。因此,肺结核、肺外结核组Th1细胞含量与Th17细胞含量比值及Th2细胞含量与Th17细胞含量比值低于健康组。肺外结核组CTLA-4阳性的CD3+T细胞(CTLA-4+CD3+T含量)含量高于肺结核组、肺癌组和健康组,肺结核和肺癌组PD-1阳性的CD4+T细胞(PD-1+CD4+T细胞)含量高于健康组。肺结核组,CTLA-4+CD3+T含量与Th1细胞含量呈负相关(r=-0.48,P=0.014);肺外结核组,PD-1+CD4+T细胞含量与Th17细胞含量呈正相关(r=0.68,P=0.015)。结论活动性结核病患者Th17细胞含量升高。     

WYE-354调控小鼠同种异体皮肤移植抗排斥反应中的mTOR信号传导通路

目的探讨mTOR激酶ATP竞争抑制剂WYE-354对小鼠同种异体皮肤移植抗排斥反应的作用及机制。方法以C57BL/6为受者,BALB/c为供者建立同种异体皮肤移植模型,C57BL/6小鼠行同种同体皮肤移植为自体移植组。移植-2d给药,共21d,阳性对照组为同种异体皮肤移植,雷帕霉素组口服给药0.2ml、剂量1mg/(kg.d),WYE-354药物组腹腔注射0.2ml:低剂量1mg/(kg.d)、中剂量1.5mg/(kg.d)、高剂量50mg/(kg.d)。术后3、7、11、21d时,应用免疫印记法留样检测每组脾细胞4E-BP1磷酸化水平,11d行皮肤移植物组织病理染色。结果阳性对照组皮肤移植物存活时间明显少于雷帕霉素组、WYE-354低、中、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.01);雷帕霉素组皮肤移植物存活时间明显少于WYE-354中、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.01)。雷帕霉素组及WYE-354低剂量组皮肤移植物局部淋巴细胞浸润较阳性对照组减少,WYE-354中、高剂量组皮肤移植物局部淋巴细胞浸润较阳性对照组、雷帕霉素组、WYE-354低剂量组均减少。雷帕霉素组、WYE-354低、中、高剂量组均可下调脾细胞中4E-BP1蛋白的磷酸化水平,以WYE-354中、高剂量组作用最为明显。结论 WYE-354可以抑制mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的调控,并阻滞其细胞周期,减少淋巴细胞向皮肤移植物浸润、显著延长小鼠皮肤移植物存活时间。     

结核分枝杆菌Rv3618蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化及其血清学诊断

目的 大肠埃希菌表达系统获重组结核分枝杆菌Rv3618蛋白,并评价其用于肺结核病血清学诊断的价值.方法 大肠埃希菌表达重组Rv3618蛋白,离子和疏水层析纯化获得高纯度的重组Rv3618蛋白,ELISA检测71例肺结核患者血清重组Rv3618蛋白和重组38000蛋白抗体IgG.结果 Rv3618蛋白在大肠埃希菌中表达,从大肠埃希菌纯化获得的重组Rv3618蛋白和重组38000蛋白的ELISA诊断临界值分别为A490 nm=0.51和A 490 nm=0.45.71例肺结核患者血清,重组Rv3618蛋白抗体阳性率39.4%与重组38000蛋白抗体阳性率(52.1%)比较差异无统计学意义(P＞0.05),而与两种重组蛋白联合检测的抗体阳性率(59.2%)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重组Rv3618蛋白可与重组38000蛋白联合用于肺结核病患者血清诊断以提高敏感性,因此,重组Rv3618蛋白可作为结核病血清学诊断的抗原之一.     

PBL结合情景教学在核应急医学救援教学中的应用

目的　探讨以问题为基础的学习（problem-based learning,PBL）结合情景教学在核应急医学救援教学中的应用效果。方法　选择陆军军医大学2017级100名学员为教学对象,将核应急医学救援课程前20个学时的教学设为对照组,后20个学时的教学设为实验组。对照组采取传统讲授法进行教学;实验组理论教学以PBL教学模式开展,技能实践教学则采用情景教学;采用理论考试、技能考核和问卷调查的形式对两组学员进行考查。采用SPSS 17.0进行卡方检验。结果　理论考试成绩：实验组（77.10±8.11）分,对照组（73.97±7.93）分,两组差异存在统计学意义（P＜0.01）;技能考核成绩：实验组（78.40±6.35）分,对照组（71.04±7.51）分,两组差异存在统计学意义（P＜0.01）;从理论考试和技能考核结果、学员自评情况来看,实验组各项均优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　与传统讲授法相比,PBL结合情景教学能提高学员的积极性,增强学员自主学习能力,促进其熟练掌握辐射防护相关知识和技能,培养学员团队合作精神,锻炼学员动手实践能力。     

重组结核分枝杆菌PPE65蛋白的制备及其在肺结核诊断中的价值

目的 评价重组PPE65蛋白IgG抗体用于检测肺结核患者的价值.方法 将编码结核分枝杆菌PPE65蛋白的基因克隆到PET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重组PPE65蛋白,透析复性和Lowry法测蛋白浓度.采用ELISA法检测144例肺结核患者、144名健康者、56例非结核肺部疾病患者血清中抗重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白的IgG抗体水平.用ELISA检测144例肺结核患者和97名PPD皮试阴性健康人血清IgG结果绘制ROC曲线确定临界值.分析评价重组PPE65蛋白及其与重组PstS1蛋白联合检测肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性.结果 结核分枝杆菌PPE65蛋白在大肠埃希菌中获得表达,层析纯化获得纯度为95%的重组PPE65蛋白,复性后蛋白浓度为0.5 mg/ml.重组PPE65蛋白IgG抗体的ELISA检测临界值为0.64.重组PPE65蛋白诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为34.7%(50/144)、93.5%(187/200)、79.4%(50/63)、66.5%(187/281)、68.9%(237/344);重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白联合诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为59.0%(85/144)、91.0%(182/200)、82.5%(85/103)、75.5%(182/241)、77.6%(267/344).结论 结核分枝杆菌PPE65蛋白可作为结核患者血清检测的蛋白抗原之一.PPE65蛋白和重组PstS1蛋白IgG抗体联合检测用于结核病诊断可提高敏感度.

Abstract：

Objective To evaluate the potential value of IgG antibodies against recombinant PPE65 protein (rPPE65) of Mycobacterium tuberculosis in serodiagnosis of tuberculosis.Methods The gene encoding PPE65 protein of M.tuberculosis was cloned into the PET-28a vector and then expressed in Escherichia coli.The rPPE65 was purified with Ni-NTA affinity and ion exchange chromatography.After dialysis renaturation, the concentration of rPPE65 was determined using Lowry assay.ELISA was used to detect the levels of specific IgG against rPPE65 and recombinant PstS1 protein (rPstS1) in sera from 144 patients with pulmonary tuberculosis (PTB patients), 144 health controls, and 56 patients with non-tuberculosis pulmonary diseases.ROC curves were used to determine cut-off values with the results of IgG antibodies against rPPE65 and rPstS1 for 144 PTB patients and 97 controls with negative PPD skin test.The sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), and accuracy of rPPE65 and the combination of rPPE65 and rPstS1 were counted.Results The PPE65 protein of M.tuberculosis was successfully expressed in E.coli. The purity and concentration of rPPE65 were 95% and 0.5 mg/ml, respectively.ROC analysis showed that the cut-off of ELISA using rPPE65 was 0.64.The sensitivity, specificity, PPV, NPV, and accuracy of rPPE65 were 34.7%(50/144), 93.5%(187/200), 79.4%(50/63), 66.5%(187/287), and 68.9%(237/344), respectively.The sensitivity, specificity, PPV, NPV, and accuracy of the combination of rPPE65 and rPstS1 were 59.0%, 91.0%, 82.5%, 75.5%, 77.6%, respectively.Conclusions The rPPE65 of M.tuberculosis appears to be a candidate antigen for serodiagnosis of tuberculosis.Detection of IgG antibodies against the combination of rPPE65 and rPstS1 can increase the sensitivity of serological test for tuberculosis.     

创面放射性沾染的处置效果研究

目的探讨不同药物对创面放射性沾染的治疗与洗消效果。方法使用SD大鼠建立放射复合伤模型,建模后将SD大鼠随机均分为4组(对照组、复合中药膏组、纳米银组、负压引流敷料组)。对照组不敷药,创面用碘伏酒精擦拭后用纱布包扎;负压引流敷料组采用自适性负压引流敷料覆盖创面包扎,其余2组分别敷药后用纱布包扎。4组连续7 d换药,并分别在7、14、21 d取材,制作病理切片,观察创面愈合情况。结果建模后21 d,与对照组相比,其余3组所使用药物对创面愈合均有促进作用,差异有统计学意义(P<0.01),其中复合中药膏组愈合最快最好。除对照组外的3个组创口放射性均降低,差异有统计学意义(P<0.01),其中负压引流敷料组创口的放射性最小,说明负压引流敷料块对放射性沾染物的吸附作用高于纱布块的吸附作用。结论复合中药膏与负压引流敷料联合应用对于创面放射性沾染的处理既能更好地降低放射性,也能促进创口的愈合。     

贫铀通过内质网应激诱导甲状腺损伤

目的 探究贫铀(DU)诱导甲状腺损伤的机制,并探索其防治方法。方法 将大鼠甲状腺细胞FRTL-5分别用500μmol/L的贫铀溶液作用不同时间,用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞暴露于不同浓度的贫铀,用Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况,用Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,用免疫荧光染色法检测转录激活因子6(ATF6)的表达。将FRTL-5细胞暴露于500μmol/L的4-苯基丁酸(4-PBA),用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞分为对照组、DU组和4-PBA+DU组,分别进行相应的处理后,用CCK-8法检测细胞活力。结果 贫铀导致了FRTL-5细胞活力下降和细胞凋亡;贫轴诱导FRTL-5细胞GRP78和ATF6表达增加;500μmol/L的4-PBA对FRTL-5细胞的活力没有影响;4-PBA预处理缓解了贫轴诱导的细胞活力的下降。结论 贫铀通过内质网应激诱导甲状腺细胞损伤,靶向内质网应激的治疗可能具有缓解贫铀导致的甲状腺损伤的作用。     

尿红细胞形态检查诊断肾脏疾病的临床研究

<正>现有肾脏疾病种类繁多，如急性肾炎、慢性肾盂肾炎、IgA肾炎等，而诱发肾脏疾病的原因也复杂多样，常见如感染、遗传和药物损伤等。患者以大量蛋白尿、低蛋白血症、血尿、水肿为主要临床表现^[1]，并随年龄的增长及高血压、糖尿病^[2]等慢性病发病率的增加，继发性肾病的发病率也在攀升^[3-5]。