人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达的竞争性逆转录-聚合酶链反应定量分析

为建立人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达检测方法,研究载脂蛋白E基因与儿童健康的关系,我们抽取26例健康儿童外周静脉血,分离血单核细胞,抽提RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应检测载脂蛋白E基因表达,并以正常人cDNA作定量标准物,待测样品与定量标准物共扩增,计算出待测样本的个体的mRNA量.研究发现载脂蛋白E基因能在健康儿童周围血单核细胞表达,健康儿童载脂蛋白E基因表达量为0.37±0.15 mol/mol mRNA.表明采用竞争性逆转录-聚合酶链反应方法来检测人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达的分析方法快速、简便、灵敏、实用、可靠,且能准确定量,值得推广应用.     

单纯性肥胖儿童脂肪细胞载脂蛋白E基因的表达

以RT PCR法分析脂肪细胞载脂蛋白E(apoE)基因的表达,发现肥胖儿童脂肪细胞apoE基因表达水平显著下调,重度及中心性肥胖尤甚,提示apoE基因可能与肥胖密切相关。     

冷氧合血与冷晶体停搏液对心脏瓣膜手术中心肌保护作用的对比研究

目的 评价4 ：1冷氧合血心脏停搏液同冷晶体停搏液在短主动脉阻断时间心脏瓣膜手术中的心肌保护作用。方法 30例风湿性心脏瓣膜病变病人随机分为冷氧合血灌注组（实验组n=15）及冷晶体灌注组（对照组n=15）。术中主动脉根部灌注冷灌注液，观察主动脉阻断前和开放后6h心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、心肌肌酸激酶CK及其同工酶CK-MB、术后自动复跳率、10ws电除颤次数及辅助循环时间的影响和改变。结果（1）主动脉阻断前实验组与对照组cTnI、CK、CK-MB值无差异性，主动脉开放后对照组cTnI升高较实验组有显著性差异（P〈0．05）；（2）术后两组CK、CK-MB、自动复跳率、10ws电除颤次数、辅助循环时间无差异性。结论 冷氧合血停搏液较冷晶体停搏液在成人瓣膜手术中有更好的心肌保护作用。     

组织型纤溶酶原激活因子构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性

背景：组织型纤溶酶原激活因子被认为是血管系统内初期血栓清除的关键酶。目的：构建pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞，观察外源性组织型纤溶酶原激活因子的表达情况。设计：随机对照实验。单位：中南大学湘雅二医院及中国医学遗传学国家重点实验室。材料：实验于2002-09／2003-06在中国医学遗传学国家重点实验室完成。脐静脉内皮细胞取自中南大学湘雅二医院健康产妇分娩后胎盘脐带，pcDNA3．1为Smith Kline Beecham公司赠送。方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子，并将pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转入人脐静脉内皮细胞，用酶联免疫吸附法定量检测转基因后组织型纤溶酶原激活因子蛋白表达情况、发色底物法检测外源性组织型纤溶酶原激活因子活性。以转pcD-NA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞为观察对象，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞作为对照。主要观察指标：组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量及活性测定结果。结果：①组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量表达结果为568．6ng／10。细胞／24h，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为17．8ng／10。细胞／24h。②组织型纤溶酶原激活因子活性为108．8IU／10。细胞／24h，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为5．6IU／105细胞／24h。结论：pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转染人脐静脉内皮细胞后，外源性组织型纤溶酶原激活因子基因获有效表达。为pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转入人体细胞确立了有效依据。     

pcDNA3.1(+)TPA构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性研究

目的建立TPA基因在人脐静脉内皮细胞外源性表达的方法，为缺血性心脏疾病的基因治疗及防止血管再狭窄提供理论依据和新方法。方法构建真核表达载体pcDNA3．1( )TPA，并采用脂质体法将其转入体外培养的人脐静脉内皮细胞，并现察外源性TPA表达情况。结果真核表达载体pcDNA3．1( )TPA在人脐静脉内皮细胞中获有效表达，酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为568．6ng／10^6细胞／24h，未转pcDNA3．1( )TPA的人脐静脉内皮细胞测得为17．8ng/10^6细胞／24h；发色底物法测得外源性TPA活性为108．8IU／10^6细胞／24h，未转pcDNA3．1( )TPA的人脐静脉内皮细胞测得为5．6IU／10^6细胞／24h。结论pcD．NA3．1( )TPA转入人脐静脉内皮细胞后，外源性TPA基因荻有效表达，为缺血性心脏病的TPA基因治疗提供了理论依据和新方法。     

冠心病患者外周血单核细胞载脂蛋白E基因表达的研究

本研究旨在探讨人外周血单核细胞载脂蛋白E(apolipoprotein ,apoE)表达状况及与冠心病 (coronaryheartdisease ,CHD)的相关性。一、对象与方法研究对象来源于海南省人民医院及中南大学湘雅二医院 ,有确诊的CHD史者列为研究组 ,年龄、性别与研究组基本近似的无CHD病史健康成人为对照组。各收集 2 3例 ,男17例 ,女 6例 ,年龄 4 0～ 70岁。禁食 12h ,抽取外周静脉血10ml,肝素抗凝。采用竞争性逆转录 聚合酶链式反应方法检测apoE基因表达 ,并检测血脂水平。应用SPSS10 0统计软件包进行统计分析 ,组间比较采用t检验或方差分析 ,并行相关…     

全胸腔镜手术治疗中叶综合征57例

目的探讨全胸腔镜下手术切除治疗中叶综合征的可行性。方法2002年4月至2012年3月全胸腔镜手术治疗中叶综合征57例,回顾性分析其年龄、性别、病因病理、手术方式、淋巴结清扫情况、术后病理分期等临床资料。结果全部57例中叶综合症患者诊断明确,均经双腔气管插管全麻下全胸腔镜下手术治疗。全组无死亡病例,11例中转开胸;46例完成全胸腔镜下手术切除,其中中肺叶切除35例、中下肺叶切除6例、中上肺叶切除4例、右全肺切除1例。术后病理诊断：中叶肺癌26例,慢性炎性病变12例、支气管扩张10例,炎性假瘤3例,肺囊肿3例,异物2例,结核1例。结论全胸腔镜手术治疗中肺综合征是合理可行的,且具有损伤小、患者疼痛较轻、术后恢复快的特点。     

器官系统整合课程中课程思政的教学设计与实施——以“循环系统”为例

本团队遵循“循环系统”课程的特点,按照课程设置泰勒模型的要求,有机结合《中国本科医学教育标准》和社会主义核心价值观,深入提炼“循环系统”课程中所蕴含的职业素养、道德等德育元素,以具体案例为教学载体,在教学的各个环节中融入课程思政,旨在为器官系统整合课程及其他医学课程教学提供参考。     

人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测

目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。     

自体心包片修补主动脉食管瘘1例

主动脉食管瘘是一种因食管异物造成的罕见但致命的急重症。手术过程中多采用主动脉置换或主动脉支架来处理主动脉瘘口,修补的材料一般为人工合成材料,采用心包修补的方式修补主动脉瘘口的报道极为少见。本病例因误食鸡骨造成主动脉食管瘘并继发严重纵隔感染,采用自体心包补片进行主动脉破口修补。