高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)在介导肾小管-间质损伤过程中的作用. 方法采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖,RT-PCR方法观察PAI-1 mRNA的表达.同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中,观察高糖中渗透压所起的作用. 结果培养24h后,高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖.与正常对照组相比,高糖可以增加PAI-1的表达.甘露醇也抑制细胞增殖,同时对PAI-1的表达产生作用. 结论高糖可抑制成纤维细胞增殖,刺激PAI-1的表达.PAI-1在糖尿病肾病肾小管-间质纤维化过程中,可能具有主要的介导作用.     

有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病

糖尿病时 ,多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶 (MAPK)信号通路。MAPK激活后通过调节下游转录因子活性 ,控制基因表达 ,最终引起肾小球肥大和细胞外基质 (ECM)积聚 ,导致糖尿病肾病 (DN)的发生。     

透析膜和内毒素对单个核细胞白细胞介素—1受体拮抗物产生的协同作用

目的：研究不同透析膜和内毒素对尿毒素对尿毒症患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素－1受体拮抗物（IL－1Ra）基因转录和IL－1Ra合成的影响。方法：细胞和不同透析膜孵育后采用细胞原位杂交检测mRNA水平,PBMC培养后采用酶联免疫吸附试验法测定细胞IL－1Ra水平。结果：不同析膜孵育后的PBMC在未用内毒素刺激情况下IL－1RamRNA水平有显著判别,但IL－1Ra合成量无差异。其中正常人仅有极微量IL－1Ra合成;内毒素刺激下的PBMC IL－1Ra合成明显明显高于未刺激组,与铜仿膜孵育后的合成量明显高于聚砜膜孵育后和对照组。结论：内毒素和透析膜对正常人和尿毒症患者PBMC的IL－1Ra的合成协同作用。     

反义寡核苷酸技术的进展及应用

随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,得到广泛的肯定,其中包括反义核酸技术,简称反义技术。那些能与特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ以碱基互补配对的方式结合,并阻止其转录和翻译的短核酸片段,称为反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）。研究反义寡核苷酸作用机理和应用的技术叫反义技术。 反义技术概述 早在１９８４年,Ｊｏｈｎａｔｈａｎ Ｇ就报道了用反义ＲＮＡ抑制ＴＫ基因的表达取得了良好的效果~［１］。反义寡核苷酸抑制靶基因的作用途经包括：１．反义寡核苷酸与ＤＮＡ双螺旋形成三螺旋,…     

医学生物化学实验改革的尝试

为了培养提高学生动手能力,掌握基本生化技术,培养学生独立思考、分析解决问题的能力,最近我室生物化学实验教学在教材建设,教学改革,加强实验技能和实验室建设等方面做了一些探索和尝试。     

浅谈开展设计性实验的体会

开展设计性实验是教学改革探索中的一种尝试，目的是希望通过这种学习方法，提高学生学习兴趣。激发他们学习的主动性。通过三年的实践，我们认为设计性实验能提高学生自主学习及自我认识的能力，加深对生化这门课程的理解。同时能开阔学生的学习思路，培养他们对今后所从事工作的能力及信心。     

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究

目的：探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）内钙离子（Ca^2＋）浓度的动态变化及其信号转导途径。方法：在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂（Hypericin）、半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Apopain）、蛋白酪氨酸激酶抑制剂（Genistein）、一氧化氮合酶抑制剂（NAME）,利用激光共聚焦显微镜（LSCM）观察HK-2细胞内[Ca^2＋]动态变化。结果：LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca^2＋]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10^-4mmol/LHypericin、10^-6mmol/LApopain、10^-7mmol/LGenistein、10^-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca^2＋]增高。结论：葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca^2＋]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮（NO）均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca^2＋]增高的信号传导过程。     

hVEGF基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面中Fn和整合素α5表达的研究

目的探讨将含人血管内皮细胞生长因子（hVEGF）重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,在创面愈合过程中对细胞外基质中纤维连接蛋白（Fn）及其受体整合素α5表达的影响。方法通过建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,采用免疫组化方法并结合图像分析,分别观察并测定实验组和对照组大鼠创面愈合3、7、14、29d时创面中Fn和整合素α5表达的平均光密度值,判断其在创面中表达的强弱。结果在术后3、7、14d时,实验组中Fn表达显著高于对照组（P〈0．05）;在术后14、29d时,实验组中整合素α5表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,在创面愈合的早、中期促进Fn的表达;在创面愈合中、晚期,上调整合素α5的合成与分泌,从而有利于创面愈合。     

人胃癌组织和对应正常胃粘膜cDNA文库的构建

作者从一例人高转移型原发性胃癌组织及其对应的正常胃粘膜中分别提取总RNA和分离多聚(A)~+RNA,进而合成cDNA。cDNA第一条链合成效率前者为58.8%,后者为29.8%;第二条链合成效率前者为98.3%,后者为93.3%。cDNA分子大小在0.5～8Kb之间。cDNA接上含有NotI切点和EcoRI粘性末端的接头,重组到经EcoRI酶解5端脱磷酸化的pT7T318U质粒上,转化大肠杆菌NM522,构建了二个cDNA文库,文库的容量分别为1.2×10~5与1.0×10~5重组子,重组率均为80%,克隆效率分别为2.4×10~6克隆/lμg cDNA与2.0×10~6克降/lμg cDNA,插入片段的大小在0.5Kb～4Kb之间。     

透析膜和内毒素对尿毒症患者外用血单个核细胞白细胞介素1受体拮抗物产生的协同作用

血液透析（血透）过程中患者血液与异己材料接触后导致血液中白细胞的激活,其产生的前炎症性细胞因子和透析患者的急、慢性并发症密切相关。有研究显示,白介素－１受体拮抗物（ＩＬ－１Ｒａ）在反映机体炎症反应方面较为敏感［１］。因此,我们采用细胞培养和原位杂交等技术观察不同条件下正常人和尿毒症患者外周血单个核细胞（ ＰＢＭＣ） ＩＬ－ １Ｒａ的ｍＲＮＡ转录和蛋白质合成情况,以了解透析膜和内毒素在ＰＢＭＣ激活中的作用,为将来超净水透析的临床应用提供理论依据。 一、材料和方法 １研究对象：血透组患者９例,其中男性 ６…