重组腺病毒Ad5-mHes1的构建及其在小鼠海马组织中的表达

目的 构建含小鼠Hes1基因的重组腺病毒(rAd)并观察其在小鼠海马组织中的表达情况,为进一步研究Hes1基因在成年小鼠神经再生中的作用奠定基础。 方法 利用限制酶对pEGFP-mHes1质粒和pDC316质粒进行酶切,将获得的mHes1目的基因片段和pDC316质粒酶切产物回收,在T4 DNA连接酶作用下连接,形成pDC316-mHes1穿梭质粒,并用PCR法及EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切法对pDC316-mH-Hes1进行鉴定。利用AdMax包装系统,穿梭质粒pDC316-mHes1与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染293细胞,同源重组产生复制缺陷型腺病毒Ad5-mHes1,其报告病毒是包含高强度绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒Ad5 -EGFP。向成年C57BL/6小鼠海马中立体定向注射Ad5 -mHes1及Ad5-EGFP,Western blotting检测注射后7 d Hes1蛋白在海马中的表达情况,荧光显微镜观察EGFP在海马中的表达情况。 结果 用PCR法及EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切法对pDC316-mHes1鉴定的实验结果与预期结果相符,经测序后其序列与mHes1 CDS序列一致。注射后7d,Hes1蛋白在PBS注射组和Ad5-mHes1注射组海马组织中均有表达,其Hes1蛋白与GAPDH的比值分别为0.363±0.053和0.705±0.128,差异有统计学意义(P＜.05)。荧光显微镜下在海马齿状回颗粒细胞层中观察到Ad5-EGFP表达的绿色荧光。 结论 本研究成功构建了Ad5-mHes1表达载体系统,并在C57BL/6成年小鼠海马组织中表达了Hes1基因。     

Hes1在成年小鼠脑中表达的免疫组织化学分析****◆

背景：近年来的研究显示,在胚胎神经系统发育过程中,Hes1的表达调控对保持神经干细胞的数量、调控其分化至关重要。此外,成年个体内处于静止期的纤维母细胞重新获得分裂增殖的能力需要Hes1表达的上调。这表明Hes1在成体中也与某些潜在干细胞的增殖具有密切的关系。因此研究Hes1在成体神经干细胞中的表达及其与成体神经细胞生成的关系也就被提上日程。但Hes1在成年个体神经系统的表达至今未明。 目的：观察和分析小鼠脑中不同部位Hes1的表达及Hes1阳性细胞的细胞类型。 方法：12只成年雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为单染组和双染组,每组6只。单染组直接取材,采用免疫组织化学技术检测Hes1在小鼠脑中各部位的表达。双染组小鼠以200 mg/kg Brdu的剂量每天腹腔注射1次,连续注射3 d,第4天取材,采用双标记物染色观察分析海马区Hes1阳性细胞的细胞类型。 结果与结论：在所有观察的解剖部位中,Hes1表达于所有存在神经细胞的部位,Brdu阳性细胞几乎全部表达Hes1,NeuN阳性细胞全部表达Hes1,而神经胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞则完全不表达Hes1。由此可知,Hes1表达于神经细胞和神经干细胞中,胶质细胞不表达Hes1。     

创伤性颅脑损伤后的成年神经细胞再生

创伤性颅脑损伤能够导致严重的神经功能障碍。研究表明,成年哺乳动物脑内存在持续的内源性神经细胞再生,这可能有助于脑创伤的修复。适度的创伤能够刺激海马和脑室下区的神经细胞再生,神经细胞再生有助于海马神经功能的修复,一些促进神经细胞再生的外界因素同样能够改善海马功能,由于缺乏脑室下区及其相关脑区功能评价的理想指标,神经细胞再生对于这些部位的功能修复情况尚处于探索阶段。亦有证据表明,大脑皮层中可能存在处于静息状态的神经前体细胞,在一定条件下,它们可能会再次进入细胞周期从而诱发神经细胞再生。对于人类大脑皮层神经细胞再生的研究目前主要限制在组织的体外培养阶段,研究显示人类大脑皮层存在向神经细胞分化的前体细胞,这些细胞可能对于脑创伤修复有潜在意义。     

Adult neurogenesis for repairing cognitive function after deferent graded traumatic hippocampus injury

摘要 研究背景： 内源性神经细胞再生存在于成年哺乳动物脑内,海马是其中的一个典型区域。外伤性颅脑损伤后,该部位的神经前体细胞可能通过细胞增殖反应和突触重建修复神经功能。 目的： 检测不同程度海马创伤后空间学习和记忆能力的修复情况以及神经前体细胞的再生状态,评价内源性神经细胞再生对于脑创伤修复的意义。 实验设计,工作时间和环境： 随机对照实验。2009年2月到2009年10月于天津医科大学总医院神经损伤变异与修复重点实验室完成。 材料： 小鼠抗BrdU一抗,山羊抗小鼠二抗IgG-cy2,小鼠抗NeuN一抗,山羊抗小鼠二抗IgG-cy3用来进行免疫组化荧光染色,通过Morris水迷宫检测脑创伤后认知功能的情况。 方法： 按照完全随机化原则,成年Wistar大鼠45只随机分为轻型组(n=15)、重型组(n=15)和对照组(n=15),前两组分别给予不同程度的液压打击致海马损伤,对照组不给予创伤。使用生物标记物BrdU和NeuN对脑组织进行免疫组化荧光染色。 主要指标的测量： 在伤后8—12天、29—33天和57—61天3个时间点对大鼠进行Morris水迷宫检测以评价认知功能的修复情况,在伤后第7天和第61天对脑组织进行免疫组化荧光染色观察新生细胞的状态。 结果： 在伤后8—12天和29—33天,轻型组和重型组较对照组表现出明显的认知功能障碍(P＜0.01);在伤后57—61天,轻型组和对照组认知功能无明显差异(P=0.627),重型组依然存在认知功能障碍(P＜0.01)。伤后7天,打击组较对照组表现出明显增强的细胞增殖（BrdU+细胞）(P＜0.01);伤后61天,轻型组的新生神经细胞（BrdU+/NeuN+细胞）明显高于重型组和对照组(P＜0.01);在存活细胞中,对照组较打击组有更高比例的细胞分化为成熟神经细胞(P＜0.01)。 结论： 颅脑创伤对于成年海马的神经前体细胞增殖可能是一个促进因素,但是,严重的颅脑创伤并没有伴随着更多的神经细胞再生。内源性神经细胞再生能够在一定程度上修复神经功能障碍,对于严重的颅脑创伤,细胞再生的微环境遭到破坏,不能修复创伤从而残留神经功能障碍,需要外部治疗的干预。     

侧俯卧位留置胃管在昏迷患者中的应用效果研究

目的　探讨侧俯卧位留置胃管在昏迷患者中的临床应用及效果。方法　选取2014年9月—2016年9月哈励逊国际和平医院神经外科神经重症监护病房收治的自发性脑出血昏迷患者110例,应用随机排列表,将患者分为常规法置管组（A组,54例）和侧俯卧位置管组（B组,56例）。A组采用常规方法留置胃管,B组采用侧俯卧位留置胃管。比较两组一次性置管成功率、总置管成功率、置管时间以及并发症发生率。结果　两组总置管成功率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;B组一次性置管成功率高于A组（χ2=8.245,P=0.004）;B组置管时间短于A组（t=5.502,P<0.001）。A组中置管失败的患者转变为侧俯卧位后,均成功留置胃管;B组中1例患者置管失败后,在可视喉镜辅助下成功置管。B组干呕、呛咳、黏膜出血发生率均低于A组（χ2=8.937、4.599、8.901,P<0.05）。结论　侧俯卧位留置胃管的成功率高,操作简单,能够缩短置管时间,降低并发症发生率,适合昏迷患者使用。     

创伤性颅脑损伤后的成年神经细胞再生

中以"Traumatic brain injury; Neurogenesis; Hippocampus; Subventricular zone; Cerebral cortex"为检索词进行检索.选择的神经解剖部位为神经发生区域海马和脑室下区以及非神经发生区域大脑皮质,文章内容与创伤和成年神经细胞再生相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到213篇文献,根据纳入标准选择31篇文章进行综述.结果与结论:成年个体神经系统存在神经细胞再生,适度的创伤能够刺激海马和脑室下区的神经细胞再生,神经细胞再生有助于海马神经功能的修复,一些促进神经细胞再生的外界因素能够改善神经功能.大脑皮质中可能存在处于静息状态的神经前体细胞,在一定条件下,它们可能会再次进入细胞周期从而诱发神经细胞再生,可能对于脑损伤修复有潜在意义.     

Hes1蛋白在神经细胞生成中的作用

Hes1蛋白被广泛地表达于哺乳动物体内,并在生物进化过程中高度保守。其表达受Notch、Hedgehog信号系统等多种机制的调控,而且研究发现,Hes1蛋白表达量的高低与其功能有密切的关系。在神经系统发育过程中,Hes1蛋白功能的缺失可造成胚胎的无脑畸形,而其过高表达则可抑制神经祖细胞的增殖和分化,使神经祖细胞保持在未分化状态。由此可见,Hes1蛋白表达量的精确调控在神经细胞生成、神经系统发育过程中具有重要作用。     

经鼻蝶神经内镜结合磨钻辅助下垂体瘤切除术

目的 探讨神经内镜结合磨钻辅助下切除垂体瘤的手术技巧和手术经验. 方法 河北省衡水市哈励逊国际和平医院神经外科自2007年8月至2011年7月应用神经内镜结合磨钻辅助下切除垂体瘤29例,回顾性分析患者的临床资料,总结手术技巧及经验. 结果 肿瘤全切除19例(65.5％),近全切除8例(27.6％),部分切除2例(6.9％),发生脑脊液漏患者4例,暂时性尿崩症27例,治疗后均得到控制.患者术后随访3～8个月,术后视力好转15例(83.33％),视野缺损好转8例(80％),头痛消失或好转9例(81.82％),术后3个月复查15例患者PRL水平由术前的(304.55+181.30)μg/L降至术后的(43.27+28.75)μg/L,6例患者GH水平由术前的(48.16+22.36)ng/L下降至术后的(14.03+4.57)ng/L,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 经鼻蝶神经内镜结合磨钻辅助下垂体瘤切除手术是一种安全、微创、有效的方法.     

成年小鼠脑创伤后海马组织中Hes1的表达

目的:观察和分析创伤性脑损伤后成年小鼠海马组织中Hes1的表达情况.方法:雄性C57BL/6小鼠66只,随机分为假手术(NC)组33只和创伤性脑创伤(TBI)组33只,通过单侧液压性损伤(FPI)的方法建立小鼠创伤性脑创伤模型.分别在成模后6 h、1 d、3 d和7 d通过颈椎脱臼处死小鼠,2组每个时间点各选取小鼠6只,采用实时荧光定量PCR检测海马中Hes1 mRNA的表达;创伤后3 d,每组分别选取小鼠6只和3只分别用Western blot法和荧光免疫组织化学染色方法检测Hes1蛋白的表达情况.实时荧光定量PCR和Western blot均以GAPDH作为内参照.结果:TBI组所有标本中均检测到Hes1的表达.TBI组与相应的NC组海马组织中Hes1 mRNA的表达情况各时点比较差异均有统计学意义(P＜0.05);TBI组创伤后3 d海马的蛋白表达量与NC组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Hes1蛋白在NC组小鼠伤侧海马组织的细胞中广泛表达,而TBI组创伤后3 d Hes1蛋白的表达量明显降低.结论:Hes1可能参与了神经发生过程,并在随后的损伤修复中起重要的作用.     

利用CTA“点状征”指导中等量高血压脑出血手术方式的选择

目的根据CTA"点状征"是否存在对脑出血分类,研究开颅血肿清除术和钻孔引流术治疗中等量(30ml~60 ml)高血压基底节区脑出血的疗效,探讨手术方式的选择。方法选择中等量高血压基底节区脑出血166例,根据是否存在CTA"点状征"分为两类。每种类型的脑出血再次随机分为两组,分别行开颅血肿清除术和钻孔引流术治疗。比较CTA"点状征"阳性及阴性病例经过不同手术方式治疗后的再出血率、死亡率、发病后90d的改良Rankin评分(mRS)及日常生活能力评分(Barthel指数),对两种手术方式进行评价,探讨中等量脑出血手术方式的选择。结果对于CTA"点状征"阳性病例,钻孔引流术组的再出血率、死亡率均高于开颅手术组(P0.05),生活依赖性比例(mRS2)及预后良好比例(Barthel指数≥90)的差异无统计学意义。对于CTA"点状征"阴性病例,两组的再出血率、死亡率、生活依赖性比例及预后良好比例的差异均无统计学意义。结论对于CTA"点状征"阳性病例,适宜行开颅手术治疗,能够降低再出血率及死亡率。对于CTA"点状征"阴性病例,适宜行钻孔引流术治疗,操作简单,创伤较小。两种手术方式对于存活患者的预后影响没有差异。术前对病人进行合理的分类是必要的,CTA"点状征"为我们提供了一种良好的分类依据。