端粒和端粒酶与肝细胞的永生化

目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的蛋白-DNA复合体,保护染色体完整性和稳定性。端粒酶是一种特殊的细胞核蛋白反转录酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端。端粒酶介导的端粒延长作为细胞中端粒缩短的主要补偿机制,对正常细胞以及肿瘤细胞延长分裂代数起着重要作用。分化良好并具有肝脏正常合成代谢功能的永生化肝细胞在生物医学研究,尤其是肝细胞移植、生物人工肝支持治疗以及药理学和毒理学研究方面具有广泛的应用前景。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2005-12有关端粒、端粒酶和肝细胞永生化的文章,检索词“telomere,telomerase,hepatocyte,immortalization”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2005-12期间的相关文章,检索词“端粒、端粒酶、永生化、肝细胞”,限定文章语言种类为中文。资料选择:纳入标准:①有关端粒和端粒酶结构和功能的研究文献。②有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到32篇有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献,查找全文,从中选取14篇作为主要参考文献。资料综合:将所选文献资料按照以下顺序归纳总结:①端粒的结构和功能:端粒是指位于真核细胞染色体末端的一种特殊结构,由富含G的DNA重复序列与端粒结合蛋白所构成的一种蛋白-DNA复合体,它既可保护染色体不受核酸酶的破坏,又避免了因DNA粘性末端的裸露而发生的染色体融合。②端粒酶的结构和功能:端粒酶是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端,以补偿细胞分裂时端粒DNA缩短,使细胞克服危机期,成为永生化细胞。③端粒、端粒酶在肝细胞永生化:将端粒酶基因转染正常的人体细胞能使一部分细胞的寿命延长,这一技术目前已成功用于延缓组织工程细胞的衰老。结论:端粒酶的活化和端粒长度的维持与肝细胞永生化密切相关,端粒酶介导的永生化肝细胞为生物人工肝脏、肝细胞移植等临床治疗提供了细胞学基础。     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸对氧化苦参碱脂质体减轻肝纤维化的增强作用研究

目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arginine-Glycin-Aspartic acid,RGD)三肽序列对氧化苦参碱脂质体(oxymatrine liposomes,OXYL)治疗四氯化碳诱导的肝纤维化 ( hepatic fibrosis,HF)作用的影响.方法 建立四氯化碳诱导的大鼠HF模型,制备RGD-OXYL和OXYL.动物分组为:正常对照组;肝纤维化模型组;OXYL治疗组;RGD-OXYL治疗组;RGD脂质体组.检测各组大鼠血清ALP,利用HE染色和Masson染色评价肝脏病理损伤及细胞外基质沉积情况.分离各组大鼠的肝脏组织,利用半定量PCR检测纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达.结果 成功合成OXYL及RGD-OXYL.与肝纤维化组比较,OXYL治疗组大鼠的ALP水平下降(344.47±27.52 vs 550.69±43.78,P<0.05)、肝损伤减轻、细胞外基质沉积面积显著减少(2.36%±0.09% vs 7.70%±0.60%,P<0.05)、纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达下调;与OXYL治疗组大鼠相比,RGD-OXYL治疗组大鼠ALP水平(272.51±19.55 vs 344.47±27.52,P<0.05)和肝损伤及细胞外基质沉积面积(0.26%±0.09% vs 2.36%±0.09%,P<0.05)及纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达等指标均有均有进一步改善.结论 氧化苦参碱脂质体可减轻四氯化碳诱导的肝纤维化,抑制纤维化相关基因表达.RGD偶联的OXYL治疗效果优于OXYL.     

活化T细胞核因子2 可抑制高迁移率蛋白1 的释放

目的探讨活化T细胞核因子2（NFAT2）对炎症因子高迁移率蛋白1（HMGB1）释放的抑制效应。方法观察脂多糖刺激可
增加HMGB1向胞外释放,在脂多糖刺激的不同时间点收集细胞及其培养上清,应用蛋白印迹法及酶联免疫法检测细胞内及培
养上清中HMGB1蛋白水平的变化;另一方面,探讨脂多糖刺激对NFAT2与HMGB1在胞浆中的结合的影响,在脂多糖刺激的
不同时间点收集THP-1细胞,提取蛋白后应用免疫共沉淀观察二者的结合情况;应用小RNA干扰技术抑制NFAT2的表达,检测
对HMGB1 合成释放的影响。结果脂多糖刺激THP-1 细胞时间越长,细胞培养上清的HMGB1 浓度增加,而细胞浆内与
NFAT2 结合的HMGB1 水平下降,细胞核内没有检测到二者的相互作用。NFAT2 的小RNA干扰质粒转染后,THP-1 细胞内
NFAT2浓度下降,同时细胞上清中HMGB1的水平上升。结论NFAT2可抑制HMGB1的合成释放。
     

猪肺静脉处PGP9.5阳性细胞与肺静脉源性心房颤动关系的初步探讨

目的应用免疫组化技术检测猪肺静脉肌袖处PGP9.5及S-100抗原表达,初步探讨肺静脉源性心房颤动(简称房颤)的发病机制.     

猪肺静脉肌袖组织超微结构特点的初步研究

目的利用电子显微镜观察肺静脉肌袖组织的超微结构,初步探讨肺静脉源性心房颤动(简称房颤)的发病机制.     

肺静脉的组织学研究进展

心房颤动(房颤)是临床上最常见的持续性心律失常，房颤本身及其引起的血栓栓塞、心力衰竭等并发症严重威胁人类健康。近年来，国内外心脏电生理工作者研究证实，源于肺静脉的快速局灶性冲动在房颤的诱发及维持上起重要作用，而90％以上的局灶性房颤起源于肺静脉，其他的起源自上腔静脉、右心房游离壁、界嵴、冠状静脉窦口周围、左心房游离壁和Marshall韧带等。这些异位兴奋灶     

自身免疫性肝炎新型抗原分子高迁移率族蛋白B1的克隆表达鉴定及蛋白纯化

目的获得高纯度的人高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1),为制备单克隆抗体及研究其与自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的关系打基础。方法应用PCR从乳腺文库中扩增得到HMGB1基因片段,并将其克隆到pET28a( )载体上,对获得的pET28a( )-HMGB1重组质粒扩增后进行PCR、酶切和测序鉴定。将鉴定完全正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western blotting鉴定。最后进行大量诱导并纯化,得到带His标签的HMGB1蛋白。结果成功构建pET28a( )-HMGB1重组质粒,并经诱导表达,得到了纯化的His-HMGB1蛋白。结论构建pET28a( )-HMGB1重组质粒并得到其表达蛋白,为今后深入研究HMGB1在AIH中的作用机理提供有力的实验工具。     

HIV疫苗研究概况

现在全世界艾滋病（AIDS）病魔猖獗。据UNAIDS／WHO最新统计，截至2005年底全球约有4030万HIV-1型或2型感染者，在这些感染者中有3800万为成年人（男性2050万人、女性1750万人），15岁以下儿童230万。仅2005年，全球就有490万新感染病例（15岁以儿童感染70万），因AIDS死亡病例有310万（其中15岁以下儿童有57万），其中95％的新HIV感染者在发展中和低收入国家。我国性病艾滋病防治协会会长、卫生部艾滋病专家委员会主任戴志澄在2005年10月22日“中国首届性医学国际论坛”上表示，白1985年中国发现第1例AIDS病例以来，中国估计已有HIV现有感染者84万，AIDS患者8万。     

氧化苦参碱减轻大鼠肝纤维化的机制研究

目的探讨氧化苦参碱（oxymatrine,OM）减轻四氯化碳诱导肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）的机制。方法建立四氯化碳诱导的大鼠HF模型,制备氧化苦参碱脂质体（Oxymatrine liposomes,OM-liposome）、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arginine-Glycin-Aspartic acid,RGD）三肽序列偶联的OM及异硫氰酸荧光素（fluorescent isothiocyanate,FITC）标记的OM-liposome和RGD-OM-liposome。分离HF大鼠的肝脏星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）并体外培养：①将OM-liposome、RGD-OM-liposome和RGD偶联的空白脂质体（RGD-liposome）作用于HSCs,利用透射电镜检测HSCs的细胞亚显微结构（凋亡小体）变化,利用流式细胞技术检测HSCs的细胞周期,利用台盼蓝染色检测HSCs的细胞活性。②将FITC-OM-liposome和FITC-RGD-OM-liposome作用于HSCs,利用荧光显微镜技术比较两种剂型OM在HSCs中的分布。结果①与RGD-liposome比较,OM-liposome可促进HSCs凋亡小体形成,增加HSCs凋亡,降低HSCs的细胞活性;与OM-liposome比较,RGD-OM-liposome可进一步增加HSCs内凋亡小体,促进HSCs凋亡,降低HSCs活性。②RGD可促进OM-liposome在HSCs内的分布。结论 OM-liposome可在体外诱导HSCs凋亡,RGD可促进OM-liposome在HSCs的分布,进一步促进HSCs的凋亡。诱导HSCs凋亡可能是OM减轻肝纤维化的重要机制。     

心房颤动的电重构收缩重构和结构重构

心房颤动 (Af)电重构、收缩重构和结构重构是f细胞电生理的主要表现。电重构主要表现为心房有效不应期 (AERP)缩短和不应期频率适应性降低 ;而Af时L 型Ca2 +通道表达下调、Na+/Ca2 +交换蛋白表达增高引起的细胞Ca2 +代谢异常 ,能量不足导致的肌小节活性下降等可能是收缩重构的重要原因 ;另外 ,结构重构主要是指细胞“去分化”样改变和缝隙连接蛋白表达异常。三方面相互影响 ,构成了Af的电生理和病理生理基础。本文就Af时心房这三种重构的变化作一综述 ,以进一步认识Af的发病机制。1　电重构心房肌细胞离子通道可在Af早期发生改变 ,进…